不同炮制方法對(duì)蒼術(shù)中蒼術(shù)素含量及蒼術(shù)特征圖譜的影響

趙娟，王科，楊帆（湘潭市食品藥品檢驗(yàn)所，湖南 湘潭 411100）

蒼術(shù)為菊科植物茅蒼術(shù)Atractylodes lancea（Thunb.）DC.或北蒼術(shù)Atractylodes chinensis（DC.）Koidz.的干燥根莖，辛、苦，溫，歸脾、胃、肝經(jīng)，具有燥濕徤脾、祛風(fēng)散寒、明目的功效，用于濕阻中焦、脘腹脹滿、泄瀉、水腫、腳氣痿躄、風(fēng)濕痹痛、風(fēng)寒感冒、夜盲、眼目昏澀[1]。蒼術(shù)的炮制品從唐代開始已有記載，歷代沿用的方法有炒焦、炒黃、炒炭、米泔水炒、麩炒、土炒、醋炒、鹽炒、酒制等20 余種[2]，而目前《中國藥典》2020年版一部?jī)H收錄了生品和麩炒兩種[1]。

蒼術(shù)是常用中藥材，不同的炮制方式在臨床使用時(shí)有不同藥效[3]，本文采用了麩炒、炒焦、曬干、烘干4 種常用且操作簡(jiǎn)單的炮制方式，分別對(duì)茅蒼術(shù)和北蒼術(shù)進(jìn)行處理，運(yùn)用HPLC 法測(cè)定蒼術(shù)素的含量，并通過特征圖譜比較炮制前后的成分變化情況，旨在為蒼術(shù)的炮制和臨床使用提供參考。

1 材料

1.1 儀器

安捷倫1260高效液相色譜儀，包括VWD1260紫外檢測(cè)器（美國安捷倫公司）；SHIMADZU 電子天平（AUW220D）（日本島津）；高速萬能粉碎機(jī)FW100（北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司）；電熱鼓風(fēng)干燥箱WGLL-125BE（天津市泰斯特儀器有限公司）。

1.2 試藥

蒼術(shù)素對(duì)照品（批號(hào)：111924-201605，純度：99.5%）、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ?qū)φ掌罚ㄅ?hào)：111976-201501，純度：99.9%）、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對(duì)照品（批號(hào)：111978-201501，純度：99.9%）（中國食品藥品檢定研究院）；β-桉葉醇對(duì)照品（STANDARD，批號(hào)：473-15-4，純度＞98%）；蒼術(shù)苷A 對(duì)照品（成都普瑞發(fā)科技開發(fā)有限公司，CAS：126054-77-1，純度：98%）；北蒼術(shù)對(duì)照藥材（批號(hào)：120983-201605），茅蒼術(shù)對(duì)照藥材（批號(hào)：120932-201708）（中國食品藥品檢定研究院）；色譜甲醇（批號(hào)：R4CG2H）、色譜乙腈（批號(hào)：P3RA1H）（Honeywell）；磷酸（分析純，批號(hào)：20171218）（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；甲苯（上海沃凱生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：20180111）；純化水實(shí)驗(yàn)室自制。

1.3 樣品來源

樣品來源于當(dāng)?shù)夭赏?，?jīng)本所蔡永副主任藥師鑒定為茅蒼術(shù)Atractylodes lancea（Thunb.）DC.和北蒼術(shù)Atractylodes chinensis（DC.）Koidz.的根莖鮮品，其中茅蒼術(shù)采自湖北英山縣，北蒼術(shù)采自河北涉縣。

2 方法與結(jié)果

2.1 炮制方法

參照《中國藥典》2020年版四部[4]（通則）0213 炮制通則和《湖南省中藥飲片炮制規(guī)范》2010年版[5]，麩炒和炒焦由湖南亞飛中藥飲片有限公司炮制完成，具體操作如下：曬干：將鮮品洗凈，曬干，撞去須根，再洗凈潤(rùn)透，切片，曬干。

烘干：將鮮品洗凈，烘干，撞去須根，再洗凈潤(rùn)透，切片，調(diào)節(jié)電熱鼓風(fēng)干燥箱溫度為50℃烘烤24 h。

麩炒：將鮮品洗凈，曬干，撞去須根，再洗凈潤(rùn)透，切片，按照100 kg 洗凈曬干切片的樣品加10 kg 麩皮的比例加入麩皮，炒至表面呈黃色或深黃色時(shí)，取出，篩去麩皮，放涼。

炒焦：將鮮品洗凈，曬干，撞去須根，再洗凈潤(rùn)透，切片，放至鍋中不斷翻炒，至表面呈棕黑色，取出，放涼。

2.2 水分值的測(cè)定

蒼術(shù)的水分值按照《中國藥典》2020年版四部[4]（通則0832）第四法測(cè)定，結(jié)果見表1。

表1 不同炮制方法下蒼術(shù)的水分值(%)Tab 1 Water percentage in Atractylodis Rhizoma by different processing methods (%)

2.3 不同炮制方法下蒼術(shù)中蒼術(shù)素的含量情況

精密稱取蒼術(shù)素對(duì)照品10.80 mg，加甲醇制成21.60 μg·mL－1的溶液，即得。將“2.1”項(xiàng)下4 種炮制方法制備的蒼術(shù)粉碎，過三號(hào)篩，取約0.2 g，按照《中國藥典》2020年版一部[1]蒼術(shù)項(xiàng)下的含量測(cè)定方法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見表2。單因素方差分析采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 21.0 進(jìn)行分析。

表2 不同炮制方法蒼術(shù)中蒼術(shù)素的含量(%， ±s，n ＝3)Tab 2 Content of atractylodin in Atractylodis Rhizoma by different processing methods (%， ±s，n ＝3)

表2 不同炮制方法蒼術(shù)中蒼術(shù)素的含量(%， ±s，n ＝3)Tab 2 Content of atractylodin in Atractylodis Rhizoma by different processing methods (%， ±s，n ＝3)

注：不同字母代表差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。Note：Different letters represent significant differences（P＜0.05）.

炮制方法 茅蒼術(shù)蒼術(shù)素含量 北蒼術(shù)蒼術(shù)素含量曬干烘干麩炒炒焦0.438±0.07a 0.416±0.01b 0.348±0.06c 0.273±0.03d 0.503±0.03a 0.528±0.05a 0.362±0.06b 0.287±0.05c

茅蒼術(shù)與北蒼術(shù)經(jīng)過不同方法炮制后，蒼術(shù)素的含量為：曬干法＞烘干法＞麩炒法＞炒焦法，且不同方法之間蒼術(shù)素的含量有顯著差異，但均高于藥典標(biāo)準(zhǔn)（蒼術(shù)藥材及凈制飲片按干燥品計(jì)，蒼術(shù)素含量不得少于0.30%；麩炒蒼術(shù)則不得少于0.20%）。

2.4 不同炮制方法下蒼術(shù)的特征圖譜

2.4.1 對(duì)照品溶液的配制 精密稱取蒼術(shù)素、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、β-桉葉醇、蒼術(shù)苷A 對(duì)照品適量，分別置棕色量瓶中，用甲醇溶解并定容到刻度，配制成含蒼術(shù)素0.0216 mg·mL－1，白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ0.3026 mg·mL－1，白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ0.4265 mg·mL－1，β-桉葉醇0.2282 mg·mL－1，蒼術(shù)苷A 0.4955 mg·mL－1的對(duì)照品溶液，裝入棕色液相進(jìn)樣小瓶備用。

2.4.2 供試品溶液的制備 試驗(yàn)避光操作。分別精密稱定不同炮制方法下的茅蒼術(shù)和北蒼術(shù)粉末各約1.00 g（過三號(hào)篩），置150 mL 具塞錐形瓶中，精密加入50 mL 甲醇，稱取重量，超聲提取40 min（功率250 W，頻率40 kHz），取出放置冷卻至室溫，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液即為供試品溶液。裝入棕色液相進(jìn)樣小瓶備用。

2.4.3 色譜條件 色譜柱為Agilent 5 TC-C18（2）（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈（A），0.5%磷酸溶液（B），梯度洗脫，洗脫程序見表3[6]；柱溫為30 ℃；流速為1 mL·min－1；檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm；進(jìn)樣量為20 μL。

表3 流動(dòng)相梯度洗脫程序Tab 3 Gradient elution program

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 精密度試驗(yàn) 取同一批北蒼術(shù)，按“2.4.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6 次，記錄色譜圖，以蒼術(shù)素為參照，共有峰相對(duì)保留時(shí)間RSD＜1.0%，相對(duì)峰面積RSD＜1.6%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.5.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批北蒼術(shù)，按“2.4.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件分別在0、6、12、24 h 和1 周后進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，以蒼術(shù)素為參照，共有峰相對(duì)保留時(shí)間RSD＜1.0%，相對(duì)峰面積RSD＜1.9%。結(jié)果表明樣品在1 周內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批北蒼術(shù)6 份，按“2.4.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，以蒼術(shù)素為參照，共有峰相對(duì)保留時(shí)間RSD＜1.3%，相對(duì)峰面積RSD＜1.7%。結(jié)果表明方法重復(fù)性良好。

2.6 對(duì)照特征圖譜

取“2.4.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，按照“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，色譜圖見圖1。

圖1 各對(duì)照品HPLC 圖譜Fig 1 HPLC chromatogram of the controls

2.7 茅蒼術(shù)和北蒼術(shù)對(duì)照藥材的特征圖譜

取茅蒼術(shù)對(duì)照藥材和北蒼術(shù)對(duì)照藥材各約1.00 g，按“2.4.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，結(jié)果如圖2所示。

2.8 不同炮制方法下茅蒼術(shù)和北蒼術(shù)的特征圖譜

取茅蒼術(shù)和北蒼術(shù)藥材各約1.00 g，按“2.4.2”項(xiàng)下方法制備供試溶液，按“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，結(jié)果見圖3及圖4。

如圖3所示，茅蒼術(shù)在不同炮制方法下特征圖譜的主要區(qū)別在與1號(hào)峰和2號(hào)峰，麩炒和炒焦后，1 號(hào)峰和2 號(hào)峰不明顯。如圖4所示，北蒼術(shù)的炒焦和麩炒品在3 號(hào)峰到6 號(hào)峰之間比曬干品有更豐富的色譜峰。結(jié)合圖2～4 來看，茅蒼術(shù)和北蒼術(shù)的比較：茅蒼術(shù)7 號(hào)峰比北蒼術(shù)含量高，茅蒼術(shù)9號(hào)峰和10 號(hào)峰的比值＞1，而北蒼術(shù)9 號(hào)峰和10號(hào)峰的比值＜1，但從茅蒼術(shù)和北蒼術(shù)的對(duì)照藥材來看并無這一特點(diǎn)，這可能還與樣品的產(chǎn)地有關(guān)。

圖2 茅蒼術(shù)和北蒼術(shù)對(duì)照藥材特征圖譜比較Fig 2 Characteristic chromatogram of Atractylodes lancea（Thunb.）DC and Atractylodes chinensis（DC.）koicz.

圖3 不同炮制方法下茅蒼術(shù)的特征圖譜Fig 3 Characteristic chromatogram of Atractylodes lancea（Thunb.）DC with different processing methods

圖4 不同炮制方法下北蒼術(shù)的特征圖譜Fig 4 Characteristic chromatogram of Atractylodes chinensis（DC.）koicz.with different processing methods

3 討論

3.1 提取條件的優(yōu)化

考察了超聲提取、回流提?。? h）和索氏提?。? h）3 種方法，結(jié)果超聲提取效率較高，操作方便快捷?？疾炝瞬煌晻r(shí)間（30、40、50、60 min）（功率250 W，頻率40 kHz）提取的效果，以蒼術(shù)素的含量為依據(jù)，《中國藥典》2020年版一部標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定為超聲1 h，本文對(duì)比不同超聲時(shí)間的蒼術(shù)素色譜峰面積，結(jié)果40、50、60 min 蒼術(shù)素的峰面積之間不存在顯著性差異，所以最終確定超聲提取40 min?？疾炝瞬煌瑵舛鹊募状甲鳛樘崛∫海陨n術(shù)素為參照物，最終確定無水甲醇提取率高。

3.2 色譜條件的確定

考察了甲醇-0.5%磷酸水、乙腈-0.5%磷酸水作為流動(dòng)相，使用乙腈-0.5%磷酸水作為流動(dòng)相時(shí)，各峰分離度較好，基線較平穩(wěn)，色譜峰信息較豐富；對(duì)比了波長(zhǎng)220、245、254、270、340 nm 條件下色譜峰的出峰情況，在波長(zhǎng)220 nm 下，色譜峰信息豐富，基線較平穩(wěn)[6]。

3.3 測(cè)定結(jié)果分析

不同的炮制方法對(duì)蒼術(shù)中的蒼術(shù)素的含量具有顯著影響，且含量高低呈現(xiàn)曬干法＞烘干法＞麩炒法＞炒焦法，但蒼術(shù)中的成分復(fù)雜，已知成分達(dá)100 多種，其質(zhì)量控制需結(jié)合臨床藥效綜合評(píng)價(jià)[7]。

傳統(tǒng)炮制理論認(rèn)為蒼術(shù)炮制后可去油以減緩燥性，減少不良作用，并增強(qiáng)健脾止瀉作用?，F(xiàn)代研究也認(rèn)為蒼術(shù)中過量的揮發(fā)油對(duì)人體有較強(qiáng)的中樞抑制作用，且能致瀉。因此適當(dāng)降低蒼術(shù)炮制品中揮發(fā)油的含量是避免其臨床毒副作用的主要方法[8]。不同炮制方法下的茅蒼術(shù)和北蒼術(shù)，各峰含量不同，有學(xué)者指出炒制品尤其是麩炒品揮發(fā)油蒼術(shù)酮、蒼術(shù)素相對(duì)百分含量比生品低，而茅蒼術(shù)醇和β-桉葉醇相對(duì)百分含量高，本研究炮制品蒼術(shù)素的含量低于生品，從特征圖譜上也可以看出5 號(hào)峰β-桉葉醇在茅蒼術(shù)和北蒼術(shù)的炮制品中含量高于生品，目前因10 ～40 min 各峰的具體化學(xué)成分不能完全確認(rèn)，有待進(jìn)一步研究。

中藥炮制是指以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，根據(jù)辨證施治用藥的需求和調(diào)劑、制劑、貯藏的不同要求，對(duì)中藥材加工處理的技術(shù)和工藝的總稱[9]，其主要目的是增效減毒，更加適合臨床應(yīng)用[10]。蒼術(shù)的炮制方法沿用至今，對(duì)其炮制目的《中藥炮制經(jīng)驗(yàn)集成》有“泔制、土制、麩制，去油、減緩其燥性；炒焦、能溫脾祛濕，止瀉”[11]之論述。蒼術(shù)歷代流傳下來的炮制方法多達(dá)數(shù)十種，而目前《中國藥典》2020年版僅收載生品和麩炒品，有學(xué)者認(rèn)為米泔水浸炒使蒼術(shù)揮發(fā)油含量減少較多，且其炮制方法條件較難掌握，需時(shí)也較長(zhǎng)[12]，在滿足現(xiàn)代臨床需求的前提下，目前蒼術(shù)飲片實(shí)際上多使用生片、清炒（炒焦）和麩炒三種炮制品。炮制之后的蒼術(shù)各成分含量有新的變化，從中藥檢驗(yàn)的角度出發(fā)，利用質(zhì)譜探明蒼術(shù)各成分及其炮制前后的變化情況，是后續(xù)研究的內(nèi)容，也有利于臨床更好地使用蒼術(shù)。