具有煙草根結(jié)線蟲防效的萬壽菊秸稈生物有機肥配方及田間防控研究

劉加紅 盤文政 呂亞瓊

摘要：根結(jié)線蟲病是一種重要的煙草土傳病害，在局部煙區(qū)發(fā)生嚴重，造成過巨大經(jīng)濟損失。采集受根結(jié)線蟲危害的植煙區(qū)土壤，分離出線蟲后，利用已有菌種庫資源，通過室內(nèi)菌株發(fā)酵液滅殺線蟲活性試驗，篩選出了4株具有防治根結(jié)線蟲的生防菌株，菌株發(fā)酵液原液室內(nèi)殺線效果良好，均達到80%以上，隨著稀釋倍數(shù)增加滅殺活性不斷降低，320倍時滅殺活性完全喪失。將篩選出的功能菌與腐熟的萬壽菊秸稈有機肥復(fù)配后形成功能型生物有機肥，在植煙區(qū)通過田間小區(qū)試驗驗證其功能，結(jié)果表明，施用功能型生物有機肥后，能夠促進煙株的早生快發(fā)，在后期能夠促進葉片開片，改善烤煙農(nóng)藝性狀，但根結(jié)線蟲危害情況并無改善，說明在根結(jié)線蟲危害極為嚴重的地塊，生防功能有機肥對根結(jié)線蟲的防治效果有限。

關(guān)鍵詞：煙草;根結(jié)線蟲;生防菌株;萬壽菊秸稈;農(nóng)藝性狀

煙草（Nicotiana tabacum L.）是茄科煙草屬，一年生或有限多年生草本植物，原產(chǎn)于南美洲。目前在我國云南、貴州等地大面積種植，是我國重要的經(jīng)濟作物之一，其成熟葉片主要用于卷煙生產(chǎn)，具有極高的經(jīng)濟價值。因此在烤煙生產(chǎn)過程中，提高煙葉產(chǎn)量和品質(zhì)極為重要，而煙草病害是影響煙葉產(chǎn)量和品質(zhì)的重要因素[1-3]。

其中，根結(jié)線蟲病是煙草種植的主要病害之一，嚴重影響煙草的高質(zhì)高產(chǎn)[4-5]，在我國各大煙草種植區(qū)均有發(fā)生，且危害嚴重，每年因根結(jié)線蟲危害造成的損失巨大。據(jù)統(tǒng)計，全國根結(jié)線蟲直接危害所造成的煙葉經(jīng)濟損失占侵染性病害造成損失的5.7%[6]，嚴重制約煙葉的生產(chǎn)發(fā)展。但是由于該病侵染的特殊性、為害的隱蔽性而對防治工作造成了極大的困擾[7]。并且受環(huán)境和經(jīng)濟水平所限，我國大部分缺水旱作煙區(qū)無法開展水旱輪作，因此多采用化學手段防治[8-10]，雖取得了一些成效，但因其選擇性差、高殘留和不易降解，也造成了煙葉農(nóng)藥殘留增加、農(nóng)作物生態(tài)環(huán)境被破壞、煙葉品質(zhì)下降、環(huán)境污染加重、抗藥性問題日益突出等后果[11-13]。

隨著國家煙草專賣局提倡綠色防控理念，減少化學農(nóng)藥使用，采用微生物菌劑或其他綠色防控措施替代化學農(nóng)藥，已經(jīng)成為煙草病蟲害防控的主要思路。因此，篩選出具有生防功能的微生物，將其應(yīng)用到煙草生產(chǎn)中，并評價其針對煙草根結(jié)線蟲的防控效果，對煙草根結(jié)線蟲的防控、生態(tài)環(huán)境的保護以及人們生命健康具有重大意義[14]。

萬壽菊別稱臭芙蓉，一年生草本花卉，其花朵提取的色素被廣泛用于食品、化妝品、煙草、醫(yī)藥及禽類飼料中[15-17]。由于其用途廣泛以及具備的經(jīng)濟價值，在曲靖地區(qū)大面積種植。萬壽菊主要經(jīng)濟器官是花朵，采收后會產(chǎn)生大量秸稈，但由于萬壽菊秸稈中木質(zhì)素、纖維素的含量較高，直接還田難以自然降解，而且含有多種揮發(fā)性化學成分，不能作為飼料使用。目前萬壽菊秸稈大部分就地焚燒或曬干后作農(nóng)家燃料，均未能得到有效利用，造成了資源的極大浪費，且對環(huán)境造成一定污染[18]。國內(nèi)多個學者均針對此問題進行研究，并且有研究表明，萬壽菊秸稈提取物對根結(jié)線蟲具有較好的抑殺作用[19]。

本研究第1階段利用已有菌種庫資源，篩選能夠防治煙草根結(jié)線蟲的生防菌株，探究其對煙草根結(jié)線蟲的滅殺效果，同時研究具有殺線潛力菌株與完全腐熟萬壽菊秸稈有機肥的復(fù)配機制。第2階段采用田間小區(qū)試驗的方式，開展以萬壽菊秸稈為原料開發(fā)的生防功能有機肥對烤煙生產(chǎn)和線蟲危害的影響研究，通過對施肥前后植煙土壤養(yǎng)分、煙株的田間長勢長相和農(nóng)藝性狀、線蟲的發(fā)生狀況、經(jīng)濟性狀和煙葉品質(zhì)等數(shù)據(jù)的綜合分析，客觀評價生防功能有機肥在曲靖煙區(qū)的應(yīng)用效果，整個研究對曲靖植煙區(qū)煙草根結(jié)線蟲及土壤保育具有重要意義，并且為后期的推廣應(yīng)用提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試菌株為云南省微生物發(fā)酵工程研究中心有限公司自主篩選研發(fā)的具有殺線作用的生防菌株。

供試根結(jié)線蟲采自曲靖市沾益區(qū)大坡鄉(xiāng)植煙區(qū)受根結(jié)線蟲侵染的煙株，煙草品種為云煙97，取受侵染煙株根際土，采用蔗糖離心浮選法分離根結(jié)線蟲。

供試地為曲靖市沾益區(qū)大坡鄉(xiāng)。試驗時間為2019年5—12月。供試作物為煙草品種（云煙97）。

供試肥料：煙草專用復(fù)合肥（氮、P2O5、K2O含量分別為15%、8%、25%）、普通過磷酸鈣（P2O5含量≥17%）、硝酸鉀（氮、P2O5、K2O含量分別為135%、0%、44.5%）、硫酸鉀（K2O含量≥50%）、鈣鎂磷肥（P2O5含量≥18%）、生防功能有機肥5號（萬壽菊秸稈有機肥中添加功能菌Q1、Q2、WSWFJ5），生防功能有機肥9號（萬壽菊秸稈有機肥中添加功能菌Q1、Q2、WSWFJ9）、生防功能有機肥11號（萬壽菊秸稈有機肥中添加功能菌Q1、Q2、WSWFJ11）、生防功能有機肥12號（萬壽菊秸稈有機肥中添加功能菌Q1、Q2、WSWFJ12）。

蔗糖溶液的配制：1 000 mL純凈水+454 g蔗糖（白糖）。

1.2 試驗方法

1.2.1 蔗糖離心懸浮法分離根結(jié)線蟲 按李美芹等的專利中提及的蔗糖離心懸浮法進行根結(jié)線蟲的分離[20]。分離完成后，取試管下部帶有線蟲的液體，取1 mL置于培養(yǎng)皿中，于體式顯微鏡下計數(shù)。

1.2.2 具有拮抗煙草根結(jié)線蟲的功能菌株篩選

1.2.2.1 不同生防菌株對根結(jié)線蟲滅殺活性測定 將菌種庫保存的具有殺線功能的菌株分別接種于Luria-Bertani（LB）液體培養(yǎng)基中進行活化，即37 ℃、180 r/min 培養(yǎng)48 h，后將菌液濃度稀釋至 1億CFU/mL，取1 mL置于48孔細胞培養(yǎng)板中，再加入線蟲懸浮液100 μL（約 100頭）混勻，25 ℃靜置12 h后，于光學顯微鏡下觀察，記錄線蟲存活情況，計算校正死亡率（僵直不動為死體，彎曲蠕動為活體）。設(shè)無菌LB液體培養(yǎng)基及萬壽菊秸稈有機肥浸出液處理作為對照，每個處理設(shè)置5個重復(fù)。

根據(jù)以下公式計算線蟲的校正致死率：致死率=死亡線蟲數(shù)/供試線蟲數(shù)×100%;

校正致死率=（處理致死率-對照致死率）/（1-對照致死率）×100%。

選取上述試驗中對線蟲校正死亡率在80%以上的菌株分別進行處理時間及處理濃度的測定，即利用其發(fā)酵原液分別處理線蟲30、60、90、120、150、180 min;利用其發(fā)酵原液以及10、20、40、80、160、320、640倍的稀釋液分別處理線蟲，觀察記錄線蟲的活性情況，計算校正死亡率，每個處理設(shè)置5次重復(fù)。

1.2.2.2 不同生防菌株在溫室大棚內(nèi)對根結(jié)線蟲防效的測定 試驗于云南省微生物發(fā)酵工程研究中心有限公司試驗基地溫室大棚內(nèi)進行，將健康且長勢一致的煙苗移栽至裝有從受危害嚴重地區(qū)（曲靖市沾益區(qū)大坡鄉(xiāng)）采集的根際土壤的花盆中，制備供試菌株發(fā)酵液，在煙苗移栽后3 d，每盆分別灌根300 mL，同時設(shè)清水、LB液體培養(yǎng)基、萬壽菊秸稈有機肥浸出液3個處理作為對照。90 d后取煙株根系調(diào)查病情指數(shù)，分級并記錄結(jié)果，調(diào)查方法采用GB/T 23222—2008 《煙草病蟲害分級及調(diào)查方法》。

1.2.3 功能微生物與完全腐熟的萬壽菊秸稈有機肥復(fù)配 利用能夠防治煙草青枯病的生防菌1號（Q1）、能夠防治煙草黑脛病的生防菌2號（Q2）與上述試驗中防效較好的菌株分別復(fù)配后添加到完全腐熟的萬壽菊秸稈有機肥中，添加量為肥料總質(zhì)量的1%，添加結(jié)束后按倉庫正常堆貯條件堆放，定期檢測各生防功能菌的有效活菌數(shù)，同時每天定時檢測堆體上、中、下層的溫度，連續(xù)檢測10 d，并記錄分析。

1.2.4 植煙地區(qū)田間效果驗證 試驗安排在曲靖市沾益區(qū)大坡鄉(xiāng)，試驗地塊往年發(fā)病較為嚴重，試驗前對土壤中線蟲的蟲口密度進行了統(tǒng)計，得出土壤中線蟲的蟲口密度為56頭/100 g。

1.2.4.1 試驗設(shè)計 試驗采用隨機區(qū)組設(shè)計，6個處理，3次重復(fù)，共18個小區(qū)。

處理1：空白對照，不施用任何有機肥料;處理2：施用萬壽菊秸稈有機肥200 g/株;處理3：施用生防功能有機肥5號200 g/株;處理4：施用生防功能有機肥9號200 g/株;處理5：施用生防功能有機肥11號200 g/株;處理6：施用生防功能有機肥12號200 g/株。

每個小區(qū)植煙60株，株行距為120 cm×60 cm，植煙13 890株/hm2。每個處理施純氮97.5 kg/hm2，氮、磷、鉀質(zhì)量比為1 ∶ 1.5 ∶ 3，各處理肥料具體用量詳見表1。

施肥方法：煙草專用復(fù)合肥、普鈣、硫酸鉀、萬壽菊秸稈有機肥和生防功能有機肥作基肥，其中萬壽菊秸稈有機肥和生防功能有機肥在移栽前塘施，煙草專用復(fù)合肥、普鈣和硫酸鉀在移栽時中層環(huán)施;硝酸鉀作追肥，在移栽后30 d左右兌水澆施。

植煙株數(shù)按13 890株/hm2計，單株肥料用量見表2。

1.2.4.2 土壤養(yǎng)分調(diào)查 在施肥前取一個基礎(chǔ)土樣，烤煙采烤后每個處理各取1個土樣，合計7個土樣（每個土樣1 kg），對每個樣品的土壤pH值、有機質(zhì)、全氮、全磷、全鉀、水解性氮、有效磷、速效鉀的含量進行檢測分析。

1.2.4.3 生育期調(diào)查 分別觀察記錄每個處理50%煙株達到團棵、旺長、現(xiàn)蕾、封頂、采烤等生育期的時間。

1.2.4.4 農(nóng)藝性狀調(diào)查 在移栽后50 d和采烤前，每個小區(qū)試驗選擇5株有代表性的煙株測量其株高、莖圍、葉片數(shù)、最大葉長和最大葉寬等農(nóng)藝性狀。

1.2.4.5 病害發(fā)生情況調(diào)查 在整個大田生育期對其他主要病害的發(fā)生情況以及采烤后取根系調(diào)查各處理根結(jié)線蟲的發(fā)生情況及病情指數(shù)進行調(diào)查分級并記錄結(jié)果，調(diào)查方法采用GB/T 23222—2008《煙草病蟲害分級及調(diào)查方法》。

1.2.4.6 產(chǎn)質(zhì)量調(diào)查統(tǒng)計 每個處理單獨掛牌烘烤，依據(jù)GB 2635—1992《烤煙》中42級國家烤煙分級標準分級，并統(tǒng)計產(chǎn)量和產(chǎn)值。各處理分別選取X2F、C3F、B2F（X2F表示下部葉橘黃色2級煙、C3F表示中部葉橘黃色3級煙、B2F表示上部葉橘黃色2級煙）各1 kg統(tǒng)一送檢，進行煙葉內(nèi)在化學成分分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 具有拮抗煙草根結(jié)線蟲的菌株篩選

2.1.1 具有滅殺根結(jié)線蟲的功能生防菌篩選 由表3可知，利用試驗前期篩選得到的對線蟲具有滅殺活性的7株生防菌再次進行煙草根結(jié)線蟲滅殺活性的篩選發(fā)現(xiàn)，各菌株發(fā)酵液均有滅殺活性，其中5、9、11、12號菌對線蟲的校正致死率都在80%以上，分別達81.12%、84.28%、85.91%、82.36%，后續(xù)試驗將選取以上4個菌株進一步開展。

2.1.2 不同稀釋倍數(shù)發(fā)酵液對線蟲活性的影響 由圖1可知，不同稀釋倍數(shù)發(fā)酵液對根結(jié)線蟲的校正死亡率隨著發(fā)酵倍數(shù)的增加而降低。稀釋40倍后，各生防功能菌的抑殺活性大幅降低，稀釋160倍后，生防菌的校正致死率均低于10%，稀釋320倍后，各生防菌已基本喪失抑殺活性。

2.1.3 不同處理時間發(fā)酵液對線蟲活性的影響 由圖2可知，隨著各菌株發(fā)酵液對線蟲的處理時間增長，對線蟲的抑殺活性越強，處理時間為2 h時，9號、11號菌株發(fā)酵液校正死亡率大幅高于5號、12號菌株發(fā)酵液，且較為相近，分別為81.69%和8159%;處理時間為3 h時，9號、11號菌株發(fā)酵液依然極為相近，且均高于其余2株菌株發(fā)酵液。整體而言，9號與11號菌株發(fā)酵液對線蟲抑殺活性較高，且2 h后隨著時間的延長抑殺活性增幅較小。

2.1.4 不同生防菌株對根結(jié)線蟲溫室煙草盆栽防效的測定 由表4的生防結(jié)果可知，4株生防功能能菌對煙草根結(jié)線蟲均具有一定的防效，生防功能菌的病情指數(shù)均低于對照，生防效果依次為WSWFJ11>WSWFJ5>WSWFJ12>WSWFJ9，但本試驗的結(jié)果相較于圖1、圖2的結(jié)果而言，并未呈現(xiàn)出一致性。

2.2 功能功能微生物與腐熟萬壽菊秸稈復(fù)配

由表5可知，功能微生物與萬壽菊秸稈有機肥復(fù)配后，功能微生物有效活菌數(shù)雖呈下降趨勢，但參照NY 884—2012《生物有機肥執(zhí)行標準》中有效活菌數(shù)≥0.2億CFU/g的要求，該肥料遠超生物有機肥標準。生防功能微生物加入時采用的是離心孢子液的形式，其加入的初始量均大于2.0億CFU/g，由于功能菌種均為芽孢桿菌，加之其存活形態(tài)均為芽孢，故其可在有機肥中長久存活，且保持活性。各處理中有效活菌數(shù)在180 d內(nèi)均出現(xiàn)下降現(xiàn)象，但其有效活菌數(shù)均維持在1.2億CFU/g以上。

2.3 植煙地區(qū)田間效果驗證

2.3.1 生防功能有機肥對烤煙大田生育期的影響 由表6可知，不同處理的大田生育期從移栽至封頂?shù)臅r間基本一致，說明施用生防功能有機肥對烤煙前、中期的生育期影響不大，也可能是由于試驗區(qū)域前期降水量過低，導致煙株生長緩慢，未出現(xiàn)生育期差異，后期由于根結(jié)線蟲危害較為嚴重，已失去采烤價值，因此煙葉的成熟期未統(tǒng)計。

2.3.2 生防功能有機肥對植煙土壤養(yǎng)分的影響 由表7可知，煙葉采收后各處理的土壤pH值均下降，以處理1的降幅最大;各處理有機質(zhì)、全氮、全磷、全鉀和速效鉀含量差別不大;處理1、處理2、處理6的水解性氮含量增加，處理3、處理4、處理5降低;處理1、處理2、處理4、處理6的有效磷含量增加，處理3、處理5降低。

2.3.3 生防功能有機肥對烤煙農(nóng)藝性狀的影響 移栽后55 d和采烤前各處理煙株農(nóng)藝性狀調(diào)查結(jié)果見表8。移栽后55 d，處理4的農(nóng)藝性狀優(yōu)于其他處理，其株高與其他處理均差異顯著（P<0.05），莖圍與處理1、處理3差異顯著，單株葉數(shù)與處理1、處理2、處理3差異顯著，中部葉最大葉面積與處理1、處理2、處理3、處理6差異顯著。采烤前，以處理4的農(nóng)藝性狀整體表現(xiàn)最優(yōu)，其單株葉數(shù)與處理1、處理2、處理3差異顯著，中部葉最大葉面積與處理2、處理5、處理6差異顯著。

綜合來看，處理4在前期能夠促進煙株的早生快發(fā)，在后期能夠促進葉片開片，改善烤煙農(nóng)藝性狀。

2.3.4 生防功能有機肥對烤煙病害發(fā)生情況的影響

2.3.4.1 生防功能有機肥對根結(jié)線蟲發(fā)生情況的影響 由表9可知，各處理的根結(jié)線蟲病情指數(shù)均在97.00以上，根系干質(zhì)量差別也不大。說明在根結(jié)線蟲危害極為嚴重的地塊，生防功能有機肥對根結(jié)線蟲的防治效果不理想。

2.3.4.2 生防功能有機肥對烤煙其他主要病害的發(fā)生情況的影響 由表10可知，該地塊其他主要病害為青枯病，主要出現(xiàn)在烤煙生育前期，處理4、處理5、處理6的發(fā)病率低于處理1，說明生防功能有機肥9號、11號及12號對青枯病發(fā)生有抑制作用，其中處理4的病情指數(shù)最低，說明生防功能有機肥9號對青枯病預(yù)防效果最明顯。

2.3.5 生防功能生物有機肥料對煙株產(chǎn)值及產(chǎn)量的影響 由于前期干旱，后期整塊試驗地根結(jié)線蟲病危害極為嚴重，烤煙失去采烤價值，烤煙經(jīng)濟性狀未統(tǒng)計。

2.3.6 生防功能有機肥對煙葉化學成分的影響 由于前期干旱，后期整塊試驗地根結(jié)線蟲病危害極為嚴重，烤煙失去采烤價值，烤煙未采烤，因此未分析煙葉化學成分。

3 結(jié)論與討論

本研究利用云南省微生物發(fā)酵工程研究中心有限公司菌種庫中7株具有殺線蟲功能的生防功能菌篩選出的發(fā)酵液研究發(fā)現(xiàn)，對煙草根結(jié)線蟲的校正致死率在80%以上的生防菌株包括 WSWFJ5、WSWFJ9、WSWFJ11、WSWFJ12共計4株，且均為芽孢桿菌，對根結(jié)線蟲的校正致死率分別達81.12%、84.28%、85.91%、82.36%，其發(fā)酵液隨著稀釋倍數(shù)的增加對線蟲滅殺活性逐漸下降，稀釋至320倍后滅殺活性完全喪失。同時，這4株生防功能菌發(fā)酵液對根結(jié)線蟲的校正致死率隨著處理時間的延長而升高，與譚可菲等的研究結(jié)果[21]一致，均在2 h以后效果最優(yōu)，對煙草根結(jié)線蟲的校正致死率分別為79.94%、81.69%、81.59%、78.94%。將4株生防功能菌株直接用于發(fā)生煙草根結(jié)線蟲病煙株，其防效分別為44.32%、38.46%、46.84%、42.53%，與發(fā)酵液實驗室滅殺活性試驗結(jié)果未呈現(xiàn)出一致性，推測是因為在土壤中微生物環(huán)境較為復(fù)雜，各生防菌株生存能力及代謝物分泌的能力受到一定影響，但整體而言，4株生防功能菌對煙草根結(jié)線蟲均具有一定的抑殺作用，在溫室盆栽試驗中也表現(xiàn)出了一定防效。

將以上4株生防功能菌與另2株生防菌以及腐熟完全的萬壽菊秸稈有機肥按一定添加比例復(fù)配，在正常包裝堆放后，有機肥本身并不會出現(xiàn)再次升溫發(fā)酵的情況，同時，萬壽菊生防功能有機肥中功能菌有效活菌數(shù)達到生物有機肥標準且高于標準，證明該方案可行。

然后本研究采用田間小區(qū)試驗的方式，客觀評價以萬壽菊秸稈為原料開發(fā)的生防功能有機肥在曲靖煙區(qū)的應(yīng)用效果。結(jié)果表明：不同處理間煙株的生育期表現(xiàn)一致，推測可能是由于試驗區(qū)域在煙株移栽后至團棵期間未有降雨，導致煙株前期的生育期增長;生防功能有機肥9號在前期能夠促進煙株的早生快發(fā)，在后期能夠促進葉片開片，改善烤煙農(nóng)藝性狀，同時能夠提高烤煙對根結(jié)線蟲和青枯病的抗病性，減少病害的發(fā)生。

總而言之，在豐富的微生物資源中，可篩選出對煙草根結(jié)線蟲具有滅殺功能的菌株，并且可與腐熟的萬壽菊秸稈復(fù)配形成穩(wěn)定且具有生防功能的有機肥。但在田間試驗中，由于氣候原因及試驗地選取不當而造成田間小區(qū)試驗效果不理想。針對此情況，本研究團隊將重新選取多個試驗地塊繼續(xù)進行生防功能有機肥的田間效果驗證，為生防功能有機肥在煙草根結(jié)線蟲防控方面提供理論基礎(chǔ)及技術(shù)支撐。

參考文獻：

[1]唐曉敏，李 丹，程軒軒，等. 我國煙草規(guī)范化生產(chǎn)（GAP）研究進展[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2016（22）：13-15.

[2]張 翔，毛家偉，黃元炯，等. 不同施肥處理烤煙氮磷鉀吸收分配規(guī)律研究[J]. 中國煙草學報，2012，18（1）：53-57，63.

[3]劉光輝，李迪秦，陳一凡，等. 烤煙生長發(fā)育特性及產(chǎn)質(zhì)量對施肥技術(shù)的響應(yīng)[J]. 核農(nóng)學報，2017，31（10）：2032-2038.

[4]陳瑞泰，朱賢朝，王智發(fā)，等. 全國16個主產(chǎn)煙省（區(qū)）煙草侵染性病害調(diào)研報告[J]. 中國煙草科學，1997，18（4）：1-7.

[5]朱賢朝，王彥亭，王智發(fā)，等. 中國煙草病害[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002.

[6]張 涵，焦永吉，趙世民，等. 利用生態(tài)炭肥修復(fù)土壤防治煙草根結(jié)線蟲病與黑脛病[J]. 煙草科技，2016，49（6）：30-35.

[7]Williamson V M，Hussey R S. Nematode pathogenesis and resistance in plants[J]. Plant Cell，1996，8（10）：1735-1745.

[8]Stirling G R. Biological control of plant parasitic nematodes：progress，problems and prospects[M]. Wallingford：CABI，1991.

[9]田 培，李曉輝，賀文俊，等. 南方根結(jié)線蟲侵染煙草抗感品種前后的代謝組學分析[J]. 中國煙草學報，2019，25（4）：81-92.

[10]李熙全，代 飛，周 波，等. 緩釋長效施藥技術(shù)對煙草根結(jié)線蟲病的防控效果[J]. 貴州農(nóng)業(yè)科學，2018，46（12）：52-54.

[11]Sharon E，BarEyal M，Chet I，et al. Biological control of the root-knot nematode Meloidogyne javanica by Trichoderma harzianum[J]. Phytopathology，2001，40（8）：2016-2020.

[12]金 娜，劉 倩，簡 恒. 植物寄生線蟲生物防治研究新進展[J]. 中國生物防治學報，2015，31（5）：789-800.

[13]鄭云峰，李建生，邱美強. 根結(jié)線蟲生防菌研究進展[J]. 中國農(nóng)村小康科技，2006（11）：62-65.

[14]黃金玲，劉志明，劉紀霜，等. 植物寄生線蟲生防細菌的研究進展[J]. 廣西農(nóng)業(yè)生物科學，2008，27（3）：288-293.

[15]周良娟，計 成，李玉欣，等. 幾種天然葉黃素對三黃肉雞著色效果的研究[J]. 飼料工業(yè)，2003，24（4）：36-40.

[16]李文英，劉賢謙，戴建青. 萬壽菊粗提物的抑菌作用初探[J]. 農(nóng)藥，2002（10）：43-44.

[17]吳思琳，孔叢玉，王利芬. 不同配方營養(yǎng)液對萬壽菊生長的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學，2019，47（22）：167-169.

[18]秦 沖，高建民. 萬壽菊秸稈活性炭的制備及其表征[C]//2013年“木（竹）材低碳加工與綠色保障”研討會論文集. 福州：中國工程院農(nóng)業(yè)學部，2013：650-654.

[19]許 華，宋曉艷，蔣夢嬌. 萬壽菊秸稈的殺線作用及其對黃瓜植株生長的影響[J]. 北京師范大學學報（自然科學版），2012，48（2）：164-168.

[20]李美芹，張 濤，付春鵬，等. 一種作物全生育期微波滅殺根結(jié)線蟲的方法：CN201110438123.X[P]. 2012-06-13.

[21]譚可菲，段玉璽，陳立杰，等. 根結(jié)線蟲生防菌SneF8發(fā)酵代謝產(chǎn)物穩(wěn)定性研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學，2009，37（3）：130-132.王榮轅，劉廣勤，李佰峰，等. 性信息素誘捕器不同懸掛方式對梨小食心蟲誘殺效果[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學，2021，49（6）：99-102.