補(bǔ)腎活血方對少弱畸精癥患者精子DNA完整率及體外受精效果的影響

鄭敏華 謝福賢 高宇琳

1.廣東省東莞市婦幼保健院生殖遺傳研究所，廣東東莞 523000；2.廣東省東莞市婦幼保健院男科，廣東東莞 523000

男性不育癥是指夫妻同居1年以上，未避孕，由于男性原因造成女方不孕，約占總不孕不育比例的30%～40%，其中以精液異常最為常見[1-2]，其中少弱畸精癥就是其中一種造成男性不育的生殖系統(tǒng)疾病，該病病因較為復(fù)雜，有研究表明，其與精子DNA完整率密切相關(guān)[3-4]。中醫(yī)認(rèn)為少弱畸精癥大多是由于先天不足，稟賦薄弱，腎陽虧損，命火衰微而致脈浮弱而澀，造成氣血不暢，精氣清冷。補(bǔ)腎活血方由桂枝茯苓丸合五子衍宗丸加減而成，可化血通瘀，補(bǔ)腎益精共成生精助育之功[5]。為了改善精子質(zhì)量，提供優(yōu)秀的精子，助少弱畸精癥患者受孕成功，通過前瞻性研究，本研究在左卡尼汀治療的基礎(chǔ)上，結(jié)合中醫(yī)理論，給予患者補(bǔ)腎活血方，觀察補(bǔ)腎活血方對少弱畸精癥患者精子DNA完整率及體外受精結(jié)局的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年11月至2019年5月于廣東省東莞市婦幼保健院（我院）接受治療的少弱畸精癥患者70例，隨機(jī)分為對照組（n=35）和觀察組（n=35），對照組患者年齡26～43歲，平均（36.2±3.4）歲；病程2～6年，平均（4.48±1.76）年；平均睪酮（16.74±2.19）nmol/L；觀察組患者年齡25～43歲，平均（35.7±3.1）歲；病程 2～ 6年，平均病程（4.11±2.20）年；平均睪酮（17.37±2.36）nmol/L。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，患者均已簽署知情同意書。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)[6-7]：同時符合臨床對少弱畸精癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)，即畸形精子癥、少精癥和弱精癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且在3個月治療后接受體外受精助孕者。

排除標(biāo)準(zhǔn)：男方伴侶基礎(chǔ)性激素檢查、卵巢功能及輸卵管異常者；存在染色體缺失、AZF基因異常者；合并精索靜脈曲張、生殖系統(tǒng)感染、慢性前列腺炎癥等引起的少弱畸精癥者；長期服用藥物影響精液質(zhì)量者。

1.3 方法

對照組患者給予口服左卡尼汀口服液（東北制藥集團(tuán)沈陽第一制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H19990372），用餐時服用，1 支 /次，3 次 / d，持續(xù)服藥25 d，休息5 d。觀察組服用根據(jù)補(bǔ)腎活血方制成的蜜丸，9 g/丸，早晚各服1丸，連續(xù)服藥25 d，休息5 d。兩組患者均連續(xù)治療3個月。補(bǔ)腎活血基本方如下：茯苓10 g，桂枝10 g，桃仁10 g，丹皮10 g，蜂房10 g，赤芍10 g，菟絲子15 g，水蛭10 g，淫羊藿15 g，車前子10 g，枸杞子15 g。兼脾虛者加黃芪20 g，黨參10 g；兼濕熱者加薏苡仁30 g，黃柏10 g；氣滯甚者加枳殼15 g，柴胡10 g。

1.4 觀察指標(biāo)

使用精子自動分析系統(tǒng)，觀察并對比兩組患者的精液質(zhì)量，包括精液常規(guī)指標(biāo)[4-5]：精子濃度、精子活率、前向運(yùn)動精子數(shù)（PR）；使用SCD法檢測精子DNA碎片指數(shù)（DNA fragmentation index，DFI），試劑盒購自安科生物股份有限公司。比較分析兩組患者體外受精情況[1]，包括受精率、卵裂率和優(yōu)胚率，受精率=（受精卵數(shù)/總卵數(shù)）×100%，卵裂率=（受精卵裂胚胎數(shù)/受精卵數(shù)）×100%，優(yōu)胚率=（優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)/正常受精卵裂胚胎數(shù)）×100%；跟蹤隨訪自伴侶移植胚胎1年內(nèi)兩組患者妊娠結(jié)局。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 兩組患者精液質(zhì)量比較

治療前，兩組治療前精子濃度、精子活率、PR、DFI比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療后，兩組患者的精子濃度、精子活率、PR數(shù)明顯高于治療前，DFI比率明顯低于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且觀察組患者精子濃度、精子活率、PR數(shù)高于對照組，DFI比率低于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組患者精液質(zhì)量比較（）

表1 兩組患者精液質(zhì)量比較（）

組別 n 精子濃度（×106/ml） 精子活率（%）治療前 治療后 t值 P值 治療前 治療后 t值 P值觀察組 35 11.43±4.37 52.20±7.44 27.954 0.000 31.53±7.62 56.50±9.29 12.295 0.000對照組 35 12.13±4.08 40.38±6.70 9.993 0.000 30.96±7.31 51.34±9.42 10.112 0.000 t值 0.693 15.847 0.319 2.307 P值 0.491 0.000 0.750 0.024組別 n PR（×106個） DFI（%）治療前 治療后 t值 P值 治療前 治療后 t值 P值觀察組 35 8.48±2.73 21.80±5.50 12.833 0.000 20.52±2.16 14.36±3.60 8.680 0.000對照組 35 8.29±2.17 15.26±4.21 8.706 0.000 21.38±2.22 18.29±2.79 5.127 0.000 t值 0.322 5.586 1.643 5.105 P值 0.748 0.000 0.105 0.000

2.2 兩組患者體外受精情況比較

觀察組患者體外受精的受精率、卵裂率與對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），優(yōu)胚率高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組患者體外受精情況比較（，%）

表2 兩組患者體外受精情況比較（，%）

組別 n 受精率 卵裂率 優(yōu)胚率觀察組 35 88.77±9.45 89.90±12.47 49.88±6.78對照組 35 85.43±10.91 87.00±11.59 45.71±6.03 t值 1.369 1.008 2.719 P值 0.176 0.317 0.008

2.3 兩組患者伴侶妊娠結(jié)局比較

隨訪期間發(fā)現(xiàn)觀察組17例患者伴侶妊娠，2例流產(chǎn)，對照組14例患者伴侶妊娠，其中4例流產(chǎn)。觀察組妊娠率為48.57%（17/35）、流產(chǎn)率為11.76%（2/17），對照組妊娠率為 40.00%（14/35）、流產(chǎn)率為28.57%（4/14），與對照組比較，觀察組妊娠率較高，流產(chǎn)率較低，兩組妊娠率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.512，P=0.470），兩組流產(chǎn)率比較經(jīng)Fisher精確檢驗(yàn)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.370＞0.05）。

3 討論

男性不育癥一直是男科領(lǐng)域中的重要議題，病因復(fù)雜，發(fā)病率逐年升高，病因大多是由精液異常引起的[8]。精子質(zhì)量是衡量男性生育能力的一個重要指標(biāo)，而對于一部分少弱畸精癥患者來說，單純依靠藥物治療仍然無法做到自然妊娠，必須依靠人工生育技術(shù)才能達(dá)到妊娠目的。然而不管是人工授精，還是體外受精～胚胎移植技術(shù)，都需要對精子進(jìn)行篩選，分離出精子活力、形態(tài)更好的優(yōu)質(zhì)精子[9-10]。補(bǔ)腎活血方是由桂枝茯苓丸合五子衍宗丸加減而成，桂枝茯苓丸是活血化瘀的名方，原本是用于女性宿有癥瘕、妊娠漏下的方劑，由桂枝、茯苓、丹皮、芍藥、桃仁組成，方中桂枝溫通經(jīng)脈，芍藥疏肝安脾，桂枝、白芍相配調(diào)和營衛(wèi)、通暢血脈；桃仁破瘀消癥，丹皮化瘀清熱，茯苓健脾滲濕，共同達(dá)到祛瘀生新、利水滲濕的功能[11-12]。也可用于瘀血阻滯所致的男性疾病，如精索靜脈曲張、慢性前列腺炎、前列腺增生、免疫性不育等[13]。五子衍宗丸亦是著名的補(bǔ)腎良方，對男性不育癥療效甚佳，被譽(yù)為“古今種子第一方”，有“五子壯陽、六味滋陰”之說。由枸杞子、菟絲子、覆盆子、五味子、車前子五味藥組成。方中菟絲子、枸杞子補(bǔ)腎精，壯陽道，助精神；覆盆子養(yǎng)真陰，固精關(guān)，起陽痿；五味子補(bǔ)腎水，益肺氣，止遺泄；車前子利小便，與其他四子相配，補(bǔ)中寓瀉，補(bǔ)而不膩[14-15]。此兩方諸藥合理加減，相配成方，共成補(bǔ)腎化瘀、生精助育之功。

本研究結(jié)果顯示，治療后，觀察組患者精液質(zhì)量指標(biāo)（精子濃度、精子活率、PR數(shù)）均明顯高于對照組，且DFI比率低于對照組，提示補(bǔ)腎活血方可大大提高少弱畸精癥患者的精子質(zhì)量及精子DNA完整率。根據(jù)體外受精情況來進(jìn)行比較，觀察組患者的優(yōu)胚率也明顯高于對照組。呂小洽[16]的研究結(jié)果與本研究相近，認(rèn)為可能與補(bǔ)腎活血方改善患者的精液質(zhì)量有關(guān)，因?yàn)檠a(bǔ)腎活血方可能有助于精子直線運(yùn)動速度的提高，增強(qiáng)精子的活力，改善精子低滲透膨脹率，提高精子頂體酶活性，其詳細(xì)機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。另外，隨訪期間觀察組患者伴侶的妊娠率、流產(chǎn)率與對照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這可能因本研究納入病例相對較少，補(bǔ)腎活血方對妊娠最終結(jié)局的影響還需要擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步分析，此不足也將在下一步研究過程中加以改進(jìn)和完善。

綜上所述，補(bǔ)腎活血方能改善少弱畸精癥患者精子質(zhì)量，提高精子DNA完整率對體外受精效果有一定的促進(jìn)作用，具有較高的臨床價值。