吳興興，唐力，朱怡君，伍成祥

（常州制藥廠有限公司，江蘇常州 213000）

藥用輔料一般情況下被認(rèn)為是惰性物料，但藥用輔料中所含的活性雜質(zhì)會(huì)間接催化或直接參與藥物的降解反應(yīng)。例如，微晶纖維素等諸多輔料中存在的硝酸鹽及亞硝酸鹽等雜質(zhì)。一些含胺基團(tuán)的藥物在一定條件下可以與亞硝基發(fā)生反應(yīng)，生成一種基因毒性雜質(zhì)[1]。雖然輔料中亞硝酸鹽雜質(zhì)的含量較低，但微量的亞硝酸鹽即可與某些胺基類藥物反應(yīng)生成基因毒性遠(yuǎn)超亞硝酸鹽本身毒性的雜質(zhì)。因此，對(duì)于胺基類藥物制劑，選取亞硝酸鹽含量低的輔料是有效控制藥品中基因毒性雜質(zhì)且代價(jià)較低的一條途徑。

目前，現(xiàn)行版《中國(guó)藥典》[2]四部收載的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，未涉及藥用輔料中亞硝酸鹽的檢查方法。在純化水的“檢查”項(xiàng)下也僅以顏色對(duì)比的方法對(duì)純化水中亞硝酸鹽的含量限度作了定性規(guī)定。本文擬利用食品中亞硝酸鹽的鹽酸萘乙二胺分光光度法對(duì)藥用輔料中的亞硝酸鹽進(jìn)行檢測(cè)，探究該方法的精密度、回收率等，并對(duì)市場(chǎng)上常見(jiàn)的藥用輔料進(jìn)行檢測(cè)，以驗(yàn)證該方法的適用性。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

（1）檢測(cè)試劑：對(duì)氨基苯磺酰胺，上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司；鹽酸萘乙二胺、亞硝酸鈉、鹽酸，南京化學(xué)試劑有限公司。

（2）藥用輔料：無(wú)水磷酸氫鈣，湖州展望藥業(yè)有限公司；磷酸氫鈣，連云港德邦化工有限公司；乳糖，KERRY；預(yù)膠化淀粉，卡樂(lè)康；硬脂酸鎂，安徽山河藥用輔料股份有限公司；7個(gè)生產(chǎn)廠家的微晶纖維素，分別為明臺(tái)化工股份有限公司、JRS、曲阜天利藥業(yè)有限公司、FMC、湖州展望藥業(yè)有限公司、安徽山河藥用輔料股份有限公司、江蘇西典藥用輔料有限公司。

UV2600型紫外分光光度計(jì)，日本島津；ME4002型電子天平，梅特勒-托利多。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 溶液的制備

（1）檢測(cè)試劑：配制濃度為4 g/L的對(duì)氨基苯磺酰胺的20%（V/V）稀鹽酸溶液；配制濃度為2 g/L的鹽酸萘乙二胺溶液。

（2）線性標(biāo)準(zhǔn)溶液：分別稱取適量的亞硝酸鈉，以純化水制備濃度分別為0.649 μg/mL、1.326 μg/mL、2.652 μg/mL、5.304 μg/mL、7.960 μg/mL的亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液；分別吸取1 mL上述亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，加對(duì)氨基苯磺酰胺的稀鹽酸溶液1 mL及鹽酸萘乙二胺溶液1 mL，制得濃度分別為0.216 μg/mL、0.442 μg/mL、0.884 μg/mL、1.768 μg/mL、2.653 μg/mL的線性標(biāo)準(zhǔn)溶液。

（3）供試品溶液：分別稱取適量的藥用輔料，以純化水制得濃度為0.1 g/mL的儲(chǔ)備液。分別吸取1 mL上述儲(chǔ)備液，加對(duì)氨基苯磺酰胺的稀鹽酸溶液1 mL及鹽酸萘乙二胺溶液1 mL，制得濃度分別為0.033 g/mL的供試品溶液。

1.2.2 方法學(xué)驗(yàn)證

1.2.2.1 確定最大吸收波長(zhǎng)

將濃度為0.442 μg/mL的線性標(biāo)準(zhǔn)溶液于紫外分光廣度計(jì)上進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，得到最大吸收波長(zhǎng)。

1.2.2.2 線性考察

于最大吸收波長(zhǎng)處檢測(cè)線性標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2.3 精密度

將濃度為0.442 μg/mL的線性標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算6次吸光值的RSD值。

1.2.2.4 回收率

分別取濃度為2.653 μg/mL、0.884 μg/mL、0.216 μg/mL的線性標(biāo)準(zhǔn)溶液，檢測(cè)吸光度值，平行測(cè)定3次，與根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方程計(jì)算而得的吸光值進(jìn)行對(duì)比，計(jì)算高、中、低3個(gè)濃度的回收率。

1.2.3 藥用輔料中硝酸鹽含量分析

于最大吸收波長(zhǎng)處檢測(cè)供試品溶液的吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算供試品中亞硝酸鈉的含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法學(xué)檢驗(yàn)

2.1.1 最大吸收波長(zhǎng)

全波長(zhǎng)掃描得到最大吸收波長(zhǎng)為553 nm。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

在濃度為0～2.653 μg/mL的范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為y=0.257 0x-0.000 2，相關(guān)系數(shù)R2=0.999。

2.1.3 精密度

同一份溶液連續(xù)進(jìn)樣6次所得吸光值的RSD%=0.68%（n=6）。

2.1.4 回收率

回收率結(jié)果見(jiàn)表1。由回收率試驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)，高、中、低3個(gè)濃度的溶液，回收率均較佳。

表1 回收率結(jié)果

2.2 輔料中亞硝酸鹽檢測(cè)結(jié)果

分別對(duì)7種不同種類輔料中亞硝酸鈉的含量進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 不同種類輔料中亞硝酸鈉含量對(duì)比

以微晶纖維素為例，就不同廠家的同種輔料進(jìn)行了亞硝酸鈉含量的對(duì)比考察，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 不同廠家的微晶纖維素亞硝酸鈉含量對(duì)比

對(duì)同一微晶纖維素生產(chǎn)廠家4個(gè)批次的樣品中亞硝酸鈉的含量進(jìn)行了對(duì)比考察，具體見(jiàn)表4。

表4 同廠家不同批次微晶纖維素中亞硝酸鈉含量的定性和定量對(duì)比

在考察的7種不同種類輔料中，亞硝酸鈉的含量差異較大，最大差異達(dá)60倍；不同廠家的微晶纖維素中亞硝酸鈉的含量存在不同程度的差異，最大值及最小值差異近20倍；同生產(chǎn)廠家不同生產(chǎn)批次的微晶纖維素中亞硝酸鈉含量的定性顏色對(duì)比及定量檢測(cè)結(jié)果均顯示無(wú)明顯差異。

3 結(jié)論

本文初步建立了藥用輔料中亞硝酸鹽殘留量的檢查方法。這種方法檢測(cè)成本低，簡(jiǎn)便可行，重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度高。實(shí)現(xiàn)了藥用輔料中亞硝酸鹽含量的定量檢測(cè)。這對(duì)輔料企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)、輔料企業(yè)和用戶協(xié)議標(biāo)準(zhǔn)的提升，甚至對(duì)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的制定都具有非常重要的現(xiàn)實(shí)意義。