李書(shū)帆，劉 毅，江漢美，劉天琪

（湖北中醫(yī)藥大學(xué)/湖北省藥用植物研發(fā)中心，武漢 430065）

烏梅為薔薇科植物梅（Prunus mume）的干燥近成熟果實(shí)。夏季果實(shí)近成熟時(shí)釆收，低溫烘干后悶至色變黑。烏梅味酸、澀，性平，歸肝、脾、大腸經(jīng)，具有斂肺、澀腸、生津安蛔的功效。臨床用于肺虛久咳、久瀉久痢、虛熱消渴、蛔厥嘔吐腹痛［1］?，F(xiàn)代藥理研究表明，烏梅具有抑菌、鎮(zhèn)咳、抗病毒、鎮(zhèn)靜催眠抗驚厥等藥理作用［2］。烏梅中主要含有有機(jī)酸、萜類、甾醇、黃酮類、揮發(fā)性成分等［3］。臨床上多使用烏梅、烏梅炭和醋烏梅進(jìn)行用藥，目前國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)采用頂空固相微萃取法（HS-SPME）與氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）相結(jié)合對(duì)烏梅和烏梅炮制品的揮發(fā)性成分進(jìn)行分析對(duì)比的研究報(bào)道。本研究首次使用HS-SPME-GC-MS 對(duì)烏梅及烏梅炮制品的揮發(fā)性成分進(jìn)行分析比較，討論炒炭及醋制對(duì)烏梅的揮發(fā)性成分的影響，旨在從揮發(fā)性成分的角度為臨床合理用藥提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試藥

烏梅藥材（批號(hào)：2020092218）購(gòu)于老百姓大藥房，經(jīng)湖北中醫(yī)藥大學(xué)生藥教研室楊紅兵教授鑒定為梅的干燥近成熟果實(shí)。米醋購(gòu)于北區(qū)超市（佛山市海天調(diào)味食品股份有限公司，批號(hào)：BM0921115C）。

1.2 儀器

手動(dòng)固相微萃?。⊿PME）進(jìn)樣裝置，德國(guó)IKA 公司；Agilent6890/5973 型氣相-質(zhì)譜-計(jì)算機(jī)聯(lián)用儀，美國(guó) Hewlett-Packard 公司；65 μm 聚二甲基硅氧烷-二乙烯基苯（PDMS/DVB）萃取纖維頭，美國(guó)Supelco公司；ALC-210.2 型電子天平，北京賽多利斯天平有限公司，d=0.01 g。

1.3 方法

1.3.1 醋制烏梅的制備 參照中藥炮制學(xué)第十版烏梅的炮制方法，取60 g 烏梅，加6 g 米醋拌勻，悶潤(rùn)至醋被吸盡，置適宜容器內(nèi)，密閉，隔水加熱2~4 h，取出干燥。

1.3.2 烏梅炭的制備 取凈烏梅置炒制容器內(nèi)，用武火加熱，炒至皮肉發(fā)泡，表面呈焦黑色，取出晾涼，篩去碎屑。

1.3.3 頂空固相微萃取條件 取烏梅樣品1.2 g，置于 15 mL 頂空瓶中，插入裝有 65 μm PDMS/DVB 萃取纖維頭的手動(dòng)進(jìn)樣器，在60 ℃下平衡10 min 后，再壓縮手柄伸出萃取頭萃取15 min，解析附時(shí)間4 min。

1.3.4 GC-MS 色譜與質(zhì)譜條件

1）GC色譜條件。HP-5MS石英毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；從50 ℃開(kāi)始升溫，以10 ℃/min升至 230 ℃；載氣為高純度 He（99.999%），柱流速0.8 mL/min，進(jìn)樣口溫度230 ℃；不分流進(jìn)樣。

2）MS條件。EI源；離子源溫度230 ℃，電離電壓70 eV；四級(jí)桿溫度150 ℃；掃描質(zhì)量范圍35~550m/z。

2 結(jié)果與分析

按既定的試驗(yàn)條件進(jìn)樣，查閱有關(guān)文獻(xiàn)，按照出峰數(shù)、相似度與相對(duì)百分含量進(jìn)行定性與定量分析，離子流結(jié)果見(jiàn)圖1，烏梅與其炮制品揮發(fā)性成分見(jiàn)表1。

2.1 烏梅生品揮發(fā)性成分分析

由表1 可知，從烏梅生品中檢測(cè)出32 個(gè)峰，鑒定出了23 種揮發(fā)性成分，占總量的88.90%，其中主要為醛類成分，占烏梅揮發(fā)性成分的60.30%。烏梅中揮發(fā)性成分最高的是苯甲醛，占揮發(fā)性成分的48.45%，其次為崖柏酮（6.63%）、糠醛（6.32%）、壬醛（5.10%）、苯甲醇（4.31%）等。崖柏酮具有抗菌消炎、抗過(guò)敏及促進(jìn)血液循環(huán)的作用，促進(jìn)支氣管擴(kuò)張，對(duì)皮膚有保健作用，許多香精含有該化合物，是醫(yī)藥和防腐的重要材料［4］。桉油精具有抗菌、抗癌、抗炎、抗氧化、殺菌、殺蟲(chóng)等多種藥理活性［5］。

2.2 醋烏梅揮發(fā)性成分分析

醋烏梅中檢測(cè)出18 個(gè)成分，鑒定出了14 種揮發(fā)性成分，占總量的82.52%，其中主要為醛類成分，占醋烏梅揮發(fā)性成分的71.59%。醋烏梅成分和生品對(duì)比減少了13 種成分，新增4 種成分，分別為異戊酸、雙戊烯、苯乙醛、鄰甲酚。異戊酸具有抑菌作用，是一種天然抗菌產(chǎn)品［6］。雙戊烯具有良好的祛痰、鎮(zhèn)咳、抑菌作用，臨床上用于利膽、溶石、祛除腸道氣體和增加消化液體積［7］。苯乙醛具有一定抗菌和抗氧化作用［8］。鄰甲酚對(duì)硝化細(xì)菌具有一定的抑制作用［9］。

表1 烏梅及其炮制品的揮發(fā)性成分

2.3 烏梅炭揮發(fā)性成分分析

從烏梅炭當(dāng)中檢測(cè)出28 個(gè)成分，鑒定出18 種揮發(fā)性成分，占總量的91.93%，其中主要成分為醛類，占烏梅炭揮發(fā)性成分的80.01%。烏梅炭中揮發(fā)性最高的同為苯甲醛，占揮發(fā)性成分的58.57%。與生品對(duì)比，減少了13 種成分，新增8 種成分，分別為苯乙醛、2-乙?；秽?-（正庚酰）噻吩、2-吡咯甲醛、甲酸芐酯、山梨酸甲酯、1-苯基-1，2-丙二酮、水楊酸甲酯。烏梅炭中特有的水楊酸甲酯具有抗炎、鎮(zhèn)痛、促滲等作用［10］。

2.4 烏梅與其炮制品的共有揮發(fā)性成分分析

烏梅生品和醋制烏梅及烏梅炭中有9 種共有揮發(fā)性成分，分別為苯甲醛、苯甲醇、苯酚、乙酸芐酯、乙酸乙酯、2-甲基丁酸、糠醛、愈創(chuàng)木酚、壬醛，共占其總揮發(fā)性成分的70.65%、79.47%、87.64%。其中苯甲醛具有解熱鎮(zhèn)痛、抗癌、潤(rùn)腸通便的功效［11］。苯甲醇可作為抗菌劑，具有中等抗菌活性，用于抑制革蘭陽(yáng)性菌、霉菌、酵母菌［12］。乙酸乙酯有水果香味，具有抗血栓［13］、抗炎［14］以及對(duì)LPS 誘導(dǎo)的急性肝損傷有保護(hù)作用［15］。2-甲基丁酸有一定的抑菌作用［16］。愈創(chuàng)木酚具有很好的殺菌作用［17］。壬醛對(duì)細(xì)菌和真菌具有明顯的抑制作用［18］。

3 討論

在烏梅生品及2 種炮制品的揮發(fā)性成分中，烏梅生品含有較多崖柏酮，而醋烏梅和烏梅炭中均無(wú)此成分。壬醛、2-甲基丁酸和愈創(chuàng)木酚在生品中含量較高，并含有桉油精。醋制烏梅中含有特有的雙戊烯，烏梅炭中苯乙醛、乙酸乙酯和苯甲醇含量較高，說(shuō)明烏梅生品長(zhǎng)于抑菌殺蟲(chóng)消炎，醋烏梅長(zhǎng)于鎮(zhèn)咳固澀抗菌，而烏梅炭長(zhǎng)于抗炎鎮(zhèn)痛抗血栓，且炒炭后苯酚含量降低，有緩和藥性減少刺激的作用［19］。

試驗(yàn)通過(guò)HS-SPME-GC-MS 技術(shù)對(duì)烏梅及其炮制品進(jìn)行了揮發(fā)性成分分析，結(jié)果顯示烏梅生品及炮制品的揮發(fā)性成分在炮制前后藥理作用變化較大，且各有特點(diǎn)。新增及減少的化學(xué)成分可能因?yàn)樵诖字婆c炒炭過(guò)程中發(fā)生了化學(xué)變化和物理變化，如還原反應(yīng)和氧化反應(yīng)，具體原因仍需進(jìn)一步研究［20］。