徐勇存，金鑫雷，霍春梅，張平，周建成(浙江天豐生物科學(xué)有限公司檢測中心，浙江 金華 321000)

0 引言

5%丙草胺·噁草酮·乙氧氟草醚顆粒劑為三元復(fù)配混劑，是由符合標(biāo)準(zhǔn)的丙草胺原藥、噁草酮原藥、乙氧氟草醚原藥及載體和助劑制成。藥劑通過雜草的根部、葉片吸收，是一種水稻田選擇性除草劑。試驗(yàn)結(jié)果表明，該制劑對一年生雜草有優(yōu)良的防除效果。目前此三元復(fù)配混劑的檢測方法未見報(bào)道。本文列舉的丙草胺·噁草酮·乙氧氟草醚檢測方法可將丙草胺、噁草酮、乙氧氟草醚及其雜質(zhì)快速的分離、測定。有利于幫助企業(yè)組織生產(chǎn)，并進(jìn)行科學(xué)全面的質(zhì)量管理，維護(hù)公司產(chǎn)品的信譽(yù)和用戶的利益。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器設(shè)備

高效液相色譜儀LC1260：配有二極管陣列檢測器(美國Agilent 公司)、色譜柱：Eclipse Plus C18，4.6×50 mm(i.d.)1.8 μm(美國Agilent 公司)、超聲波清洗器：KQ-400B(昆山市超聲儀器有限公司)、超純水機(jī)：Milli-Q(美國Millipore 公司)。

1.2 試劑

乙腈：色譜純；異丙醇：色譜純；磷酸：分析純；丙草胺標(biāo)樣、噁草酮標(biāo)樣、乙氧氟草醚標(biāo)樣：采購自國家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心(沈陽)，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為98.3%、99.2%、98.9%；5%丙草胺·噁草酮·乙氧氟草醚顆粒劑(3.2%丙草胺+1.1%噁草酮+0.7%乙氧氟草醚)：浙江天豐生物科學(xué)有限公司。各有效成分結(jié)構(gòu)式如圖1、圖2、圖3 所示[1]。

圖1 丙草胺結(jié)構(gòu)式

圖2 噁草酮結(jié)構(gòu)式

圖3 乙氧氟草醚結(jié)構(gòu)式

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液的制備

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

準(zhǔn)確稱取丙草胺標(biāo)樣0.064 g、乙氧氟草醚標(biāo)樣0.014 g、噁草酮標(biāo)樣0.022 g(精確至0.000 02 g)置于100 mL 容量瓶中，加甲醇溶解，超聲波浴槽中脫氣10 min，取出降至室溫后，用甲醇補(bǔ)加至刻度，搖勻，經(jīng)微孔濾膜過濾，此為標(biāo)樣溶液。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取試樣約2 g(精確至0.000 02 g)置于100 mL 容量瓶中，加入5 mL 水超聲使樣品化開，加甲醇溶解，超聲波浴槽中脫氣10 min，取出降至室溫后，用甲醇補(bǔ)加至刻度，搖勻，經(jīng)微孔濾膜過濾，此為試樣溶液。

1.4 HPLC 分析條件

流動相：Ψ(乙腈+異丙醇+0.05%磷酸水溶液)=15+28+57(V/V/V)；流速：1.4 mL/min；檢測器波長：245 nm；柱溫：50 ℃；進(jìn)樣體積：5 μL[2]。

1.5 測定和分析

在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，計(jì)算各針有效成分響應(yīng)值的重復(fù)性，待相連兩針各有效成分的峰面積變化小于1.5%時(shí)，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。5%丙草胺·噁草酮·乙氧氟草醚顆粒劑典型的標(biāo)樣、試樣色譜圖如圖4和圖5 所示，丙草胺保留時(shí)間約5 min、乙氧氟草醚保留時(shí)間約8min、噁草酮保留時(shí)間約9 min。

圖4 標(biāo)樣色譜圖

圖5 5%丙草胺·噁草酮·乙氧氟草醚顆粒劑試樣色譜圖

1.6 計(jì)算

將測得的兩針試樣溶液以及試樣前后兩針標(biāo)樣溶液中的峰面積分別進(jìn)行平均。丙草胺(乙氧氟草醚、噁草酮)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X1按式(1)進(jìn)行計(jì)算：

式中：r1為標(biāo)樣溶液中丙草胺(乙氧氟草醚、噁草酮)峰面積的的平均值；r2為試樣溶液中丙草胺(乙氧氟草醚、噁草酮)峰面積的平均值；m1為標(biāo)樣的質(zhì)量(g)；m2為試樣的質(zhì)量(g)；p為標(biāo)樣中丙草胺(乙氧氟草醚、噁草酮)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)[3]。

2 結(jié)果和討論

2.1 色譜條件的選擇

檢測波長的確定：用二極管陣列(DAD)檢測器進(jìn)行光譜掃描，在245 nm 波長處3 個(gè)有效成分(丙草胺、噁草酮、乙氧氟草醚)吸收值較大且雜質(zhì)1、雜質(zhì)2、雜質(zhì)3 吸收值較小，故選擇245 nm 為檢測波長。

流動相的選擇：流動相選用甲醇-0.05%磷酸水溶液、乙腈-0.05%磷酸水溶液不同配比濃度時(shí)，有效成分和雜質(zhì)不能完全分離，在乙腈-0.05%磷酸水溶液中加入異丙醇時(shí)，分離度有明顯改善，經(jīng)過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)當(dāng)流動相選用Ψ(乙腈+異丙醇+0.05%磷酸水溶液)=15+28+57(V/V/V)時(shí)，各有效成分及雜質(zhì)得到很好地分離，峰形對稱。

2.2 方法線性相關(guān)試驗(yàn)

結(jié)果表明，丙草胺(圖6)在此分析條件下具有良好的線性關(guān)系。線性回歸方程為y= 848.6x-5.664 5，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 5。乙氧氟草醚(圖7)在此分析條件下具有良好的線性關(guān)系。線性回歸方程為y= 6 901.8x-8.346 9，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 8。噁草酮(圖8)在此分析條件下具有良好的線性關(guān)系。線性回歸方程為y= 708 7x-9.534，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 9。

圖6 丙草胺標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

圖7 乙氧氟草醚標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

圖8 噁草酮標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.3 方法精密度的測定

按上述方法平行檢測6 次，測得丙草胺標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.02，變異系數(shù)為0.58%，乙氧氟草醚標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.01，變異系數(shù)為1.77%，噁草酮標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.01，變異系數(shù)為1.30%(如表1所示)。

2.4 方法準(zhǔn)確度的測定

采用加標(biāo)回收率法測定回收率，結(jié)果表明此方法具有較高的回收率(如表2 所示)。

表1 方法精密度

表2 丙草胺·噁草酮·乙氧氟草醚加標(biāo)回收率

3 結(jié)語

經(jīng)過上述試驗(yàn)表明，此檢測方法具有線性關(guān)系好、精密度高、回收率高、分離效果好的特點(diǎn)，適用于企業(yè)生產(chǎn)過程中的定性定量分析。