糞便DNA與血CEA、CA199在結腸癌靶向治療監(jiān)測中的價值

雷慧 項濤 譚綺瓊 胡波 劉芳

[摘 要] 目的：檢測200例結腸癌復發(fā)患者瑞格菲尼靶向治療后糞便DNA與血CEA、CA199的變化，討論糞便DNA在結腸癌復發(fā)后瑞格菲尼靶向治療后監(jiān)測中評估價值。方法：200例結腸癌復發(fā)患者治療前檢測糞便DNA或者血CEA、CA199，入組后予瑞格菲尼靶向治療，一個月后檢測其糞便DNA與血CEA、CA199的含量。結果：在結腸癌復發(fā)靶向治療效果監(jiān)測中糞便DNA優(yōu)于血CEA、CA199，差異均具有統(tǒng)計學意義。結論：糞便DNA在結腸癌復發(fā)后瑞格菲尼靶向治療效果監(jiān)測中具有重要的評估價值。

[關鍵詞] 糞便DNA;血CEA、CA199;結腸癌復發(fā);靶向治療;監(jiān)測

[基金項目] 2019年度湛江市科技局“湛江市科技局科技計劃項目”（2019B01188，2019B01272）;2020年度廣東省衛(wèi)健委“2020年廣東省醫(yī)學基金”（B2020221）

[作者簡介] 雷 慧（1985—），女，湖北武漢人，護理學碩士，廣東省吳川市人民醫(yī)院內(nèi)科副主任護師，主要從事護理臨床研究;項 濤（1979—），男，湖北黃岡人，碩士，廣東省吳川市人民醫(yī)院內(nèi)科副主任醫(yī)師（通信作者），主要從事惡性腹水研究。

[中圖分類號] G642.0? ? ? ?[文獻標識碼] A? ? ?[文章編號] 1674-9324（2021）17-0054-04? ? ?[收稿日期] 2020-10-26

結腸癌屬于全世界范圍內(nèi)最常見的消化道腫瘤之一，其發(fā)病率逐年增高，全球每年新發(fā)結腸癌患者約200萬人。手術切除是結腸癌的主要治療方法，輔以藥物局部治療、靶向藥物治療等。

眾所周知，結腸癌復發(fā)后治療比較困難，腫瘤細胞發(fā)生轉移和繼續(xù)生長的原因可能是腫瘤細胞的異常增殖和過度生長導致瘤體內(nèi)氧氣供應不足，使腫瘤細胞出現(xiàn)異型性。在結腸癌中，由于APC和PI3K的p110α亞基的激活突變，Wnt/β-

catenin和PI3K/Akt信號通路頻繁失調(diào)。因此，激活腫瘤通路已成為藥物開發(fā)的一個有吸引力的治療靶點。Wnt/β-catenin致癌信號通路對PI3K或akt抑制藥物促進的凋亡具有耐藥性。這兩條重要信號通路的整合增強了腫瘤的癌變生長，并對靶向治療產(chǎn)生耐藥性。據(jù)統(tǒng)計，接受根治性全切手術治療后依然有超過一半的患者最終出現(xiàn)局部復發(fā)和遠處轉移，而復發(fā)和轉移是導致結腸癌治療失敗的主要原因，因此，早期結直腸癌的診斷對降低結直腸癌死亡率具有重要意義。

近期發(fā)現(xiàn)瑞格菲尼靶向治療效果較好，但治療效果監(jiān)測評估有效指標較少，對于結腸癌復發(fā)治療效果監(jiān)測目前主要是血CEA、CA199等，但這兩種指標敏感性、特異性不高，目前世界上敏感性、特異性都高并且可臨床實用的檢測指標非常少。

結腸癌是美國癌癥相關死亡的第二大原因。如果腫瘤在可治愈階段被發(fā)現(xiàn)，那實際上這種疾病的死亡率是可以控制的，但只有少數(shù)人群接受定期篩查。美國癌癥協(xié)會認可的篩查工具是侵入性的，而且價格昂貴。

分子糞便檢測的出現(xiàn)提供了一種可能的能替代傳統(tǒng)的結直腸癌篩查方法。在糞便中發(fā)現(xiàn)了多種DNA標記，包括致癌基因和抑癌基因的突變、DNA甲基化。由于非凋亡腫瘤細胞的持續(xù)脫落，長DNA在結腸癌患者糞便中比正常糞便中更豐富，可作為篩選標記物。從正常上皮脫落的結腸細胞發(fā)生凋亡，其DNA被內(nèi)切酶分解成短于200bp的片段。然而，在脫落的發(fā)育不良細胞中似乎有一種逃避這種凋亡的方法，這導致了糞便中的長DNA序列，可用于癌癥檢測。國際上運用糞便DNA檢測監(jiān)測結腸癌復發(fā)治療評估幾乎是空白，所以本研究進行前瞻性對比研究以尋找監(jiān)測評估結腸癌復發(fā)后瑞格菲尼靶向治療效果的高敏感性、高特異性指標。

本研究檢測了200例結腸癌復發(fā)后瑞格菲尼靶向治療患者糞便DNA與血CEA、CA199的含量，討論糞便DNA在結腸癌復發(fā)后瑞格菲尼靶向治療監(jiān)測中的評估價值。

一、資料和方法

1.收集結腸癌術后患者共200例，為2018年1月—2018年12月吳川市人民醫(yī)院、佛山市高明區(qū)人民醫(yī)院和浙江省腫瘤醫(yī)院的住院結腸癌復發(fā)患者，平均年齡51.9歲，所有患者病例均經(jīng)過病檢確診。

2.實驗組（100例）和對照組（100例）瑞格菲尼口服（德國拜耳公司，注冊證號H20170159），160mg，每天一次，28天為一個周期，在前21天服用（服用21天，休息7天）。一個月后檢測糞便DNA與血CEA、CA199的含量。糞便DNA測定使用“長安心”試劑盒測定（廣州康立明生物公司，醫(yī)療器械備案憑證編號：粵穗械備20160241號），血CEA、CA199濃度采用醫(yī)院檢驗科化學發(fā)光法檢測，腫塊直徑大小由醫(yī)院512排CT測量。

3.吳川市人民醫(yī)院、佛山市高明區(qū)人民醫(yī)院和浙江省腫瘤醫(yī)院擁有較先進的全自動生化儀和全自動酶標儀等，具備糞便DNA與血CEA、CA199測定條件。所有患者均簽署參加研究知情同意書，通過了醫(yī)院倫理委員會批準（L201801004）。

4.統(tǒng)計學方法。采用SPSS17.0軟件對數(shù)據(jù)進行分析運算。計量資料用均數(shù)±標準差表示，計數(shù)資料用率表示。組與組之間比較采Mann-Whitney檢驗、t檢驗。用受試者工作曲線（ROC）確定診斷胃癌性腹水的界值。用KaplanMeier法計算患者生存率及中位生存期，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

二、結果

實驗組糞便DNA下降比對照組血CEA、CA199下降明顯，與腫塊直徑變化一致，在結腸癌復發(fā)靶向治療效果監(jiān)測中，糞便DNA優(yōu)于血CEA、CA199，差異均具有統(tǒng)計學意義，見表1。

三、討論

瑞格菲尼可靶向作用于各種蛋白激酶，如PI3K，PI3K[1]的重新激活是導致結腸癌細胞對瑞格菲尼耐藥的主要原因，是目前結腸癌治療面臨的關鍵問題。瑞格菲尼是口服的血管生成性血管內(nèi)皮生長因子受體（vascu-lar endothelial growth factor receptor，VEGFR）及基質受體酪氨酸激酶的抑制劑[2]。國外發(fā)現(xiàn)結腸癌瑞格菲尼治療效果較好，但對結腸癌復發(fā)治療效果監(jiān)測目前主要是血CEA、CA199等，但這兩種指標敏感性、特異性不高，目前世界上敏感性、特異性都高并且可臨床實用的檢測指標非常少，國際上運用糞便DNA檢測監(jiān)測結腸癌復發(fā)后靶向治療效果幾乎是空白，所以十分必要進行前瞻性對比研究，以尋找監(jiān)測評估結腸癌復發(fā)后瑞格菲尼靶向治療效果的高敏感性、高特異性指標。

糞便脫落細胞DNA檢測對于檢測腸道常見結直腸癌細胞具有無與倫比的優(yōu)勢，因為正常成年人類每日都會有腸道上皮細胞脫落至腸腔并隨糞便排出體外，而研究表明結直腸癌等惡性細胞由于異常增殖、細胞與細胞間或者細胞基底膜的黏附性降低等因素，比正常上皮細胞更易脫落。因此，腸道腫瘤患者的糞便中會含有大量的從腸道腫瘤表面脫落的攜帶了腸癌病變信息的細胞和細胞成分，這些信息可以由脫落細胞的特殊DNA檢測手段來分析。

由中國廣州市康立明生物科技有限責任公司自主研發(fā)、生產(chǎn)的屬于三類體外診斷試劑的人類SDC2基因甲基化檢測試劑盒（熒光PCR法）（商品名“長安心”）目前正式獲國家藥品監(jiān)督管理局批準上市。

基于全面自主創(chuàng)新的高檢測性能的PCR專利技術的國產(chǎn)“長安心”人類SDC2基因甲基化檢測試劑盒具有世界領先技術，它用于體外定性檢測人類糞便樣本中脫落細胞SDC2基因的甲基化情況。該產(chǎn)品是我國首個在中國大陸人群中篩選出的糞便DNA檢測產(chǎn)品，被批準用于大腸癌輔助診斷，不同于外國其他敏感性、特異性不高的產(chǎn)品，它明顯針對中國人特別優(yōu)化，可以給中國的臨床病人及健康體檢者提供一種更優(yōu)的、針對性更強的大腸癌輔助診斷方法。

眾所周知，糞便DNA檢測對于檢測腸道惡性腫瘤細胞具有天然的優(yōu)勢[3]，因為正常成年人類每天都會有上皮細胞脫落至腸腔并隨糞便排出體外[4]，而研究表明結直腸癌腫瘤細胞由于異常增殖、細胞與細胞間或者細胞基底膜的黏附性降低等因素，比正常上皮細胞更易脫落[5]。因此，腸道腫瘤病人的糞便中會含有大量的從腸道腫瘤表面脫落的攜帶了腸癌病變信息的細胞和細胞成分[6]，這些信息可以由特殊的檢測手段來解讀[7]。

“長安心”人類SDC2基因甲基化檢測試劑盒是國際上主要基于自主創(chuàng)新的高檢測性能的PCR專利技術，用于體外定性檢測人類糞便樣本中SDC2基因的甲基化情況。該產(chǎn)品是我國首個在中國人群中篩選出的糞便結直腸癌脫氧核糖核酸甲基化標志物，被批準用于大腸癌輔助診斷的檢測產(chǎn)品，不同于國外其他敏感性、特異性不高的產(chǎn)品，它明顯針對中國人優(yōu)化，可以給中國的臨床和受檢者提供更優(yōu)的一種針對性的大腸癌輔助診斷方法的選擇[8]。本研究發(fā)現(xiàn)“長安心”人類SDC2基因甲基化檢測試劑盒解決了血CEA、CA199在結腸癌復發(fā)后瑞格菲尼靶向治療監(jiān)測中敏感性、特異性不高的情況[9]。

歐美研究者Sohita等通過臨床研究得出結論：使用瑞格菲尼口服，160mg，每天一次，28天為一個周期，在前21天服用（即服用21天，休息7天），晚期結腸癌患者的治療效果明顯，腫塊縮小明顯，監(jiān)測發(fā)現(xiàn)糞便DNA拷貝數(shù)與其一致性較好。

總之，在結腸癌復發(fā)后靶向治療效果監(jiān)測中，糞便DNA優(yōu)于血CEA、CA199，糞便DNA在結腸癌復發(fā)后瑞格菲尼靶向治療效果監(jiān)測中具有重要的評估價值。

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On the Value of Fecal DNA， Blood CEA and CA199 in Targeted Therapy Monitoring

of Colon Cancer

LEI Hui1， XIANG Tao1， TAN Qi-qiong2， HU Bo3， LIU Fang4

（1. Department of Internal Medicine， Wuchuan Peoples Hospital，Zhanjiang，Guangdong 524500， China; 2. Department of Internal Medicine， Gaoming District People's Hospital，Gaoming Hospital Affiliated of Guangdong Medical College，F(xiàn)oshan， Guangdong 528500，China; 3. Department of Chemotherapy， Cancer Hospital， Hangzhou， Zhejiang 310022， China; 4. College of Life Science and Technology， Tongji University， Shanghai 200092， China）

Abstract： Objective： To detect the changes of fecal DNA， blood CEA and CA199 in serum of 200 patients with recurrent colon cancer after Regorafenib targeted therapy， and to discuss the value of fecal DNA in the monitoring of Regorafenib targeted therapy after the recurrence of colon cancer. Methods： 200 patients with recurrence of colon cancer were examined for fecal DNA， blood CEA and CA199 before treatment， and then treated with Regorafenib after admission. One month later， the contents of fecal DNA， blood CEA and CA199 were measured. Results： fecal DNA is superior to blood CEA and CA199 in the monitoring of targeted therapeutic effect for recurrence of colon cancer， and the difference is statistically significant. Conclusion： fecal DNA plays an important role in monitoring the efficacy of targeted therapy for colon cancer recurrence.

Key words： fecal DNA; blood CEA and CA199; recurrence of colon cancer; targeted therapy; monitoring