鄭威 孫文文 董學(xué)明 張秋穎 于雪飛 陳寧

摘?要：?為研究八氫番茄紅素合成酶（phytoene synthase）基因在龍眼類胡蘿卜素合成途徑中的作用機(jī)制，該文從龍眼轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中篩選獲得一個PSY基因，命名為DlPSY，采用生物信息學(xué)方法對龍眼PSY蛋白的一級結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、信號肽、跨膜結(jié)構(gòu)、亞細(xì)胞定位、親疏水性、蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)、蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)、卷曲螺旋、蛋白質(zhì)結(jié)合位點、系統(tǒng)進(jìn)化樹、蛋白質(zhì)互作等進(jìn)行分析和預(yù)測，并同時運用實時熒光定量PCR（RT-qPCR）技術(shù)對DlPSY基因在龍眼根和葉中的差異表達(dá)進(jìn)行分析。結(jié)果表明：龍眼DlPSY基因長度為1 260 bp，編碼420個氨基酸;生物信息學(xué)預(yù)測DlPSY蛋白具有Isoprenoid Biosyn C1超家族結(jié)構(gòu)，含有信號肽，為分泌性蛋白，無跨膜結(jié)構(gòu)，是一種可溶性親水蛋白，定位于膜外;DlPSY蛋白的二級結(jié)構(gòu)主要由α-螺旋和無規(guī)則卷曲組成，具有卷曲螺旋。Ramachandran評估結(jié)果表明應(yīng)用SWISS-MODEL構(gòu)建的蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)模型可靠，其配體結(jié)合位點為344Phe和347Lys。RT-qPCR分析結(jié)果表明DlPSY基因在龍眼根和葉中均有表達(dá)，葉中表達(dá)量高于其在根中的表達(dá)量。該研究結(jié)果為下一步采用遺傳學(xué)方法提高龍眼中類胡蘿卜素的含量奠定理論基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞： 龍眼， DlPSY基因， 生物信息學(xué)， 基因表達(dá)

中圖分類號：?Q943

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：?A

文章編號：?1000-3142（2021）04-0546-13

Abstract：?To study the function of phytoene synthase gene in carotenoid synthesis of Dimocarpus longan Lour. （D. longan）， a DlPSY gene identified from D. longan RNA-seq data was screened and analyzed in this research by bioinformatics methods including the primary structure of protein， physicochemical properties， signal peptide， transmembrane structure， subcellular localization， hydrophilicity， protein secondary structure and tertiary structure， coiled coil， protein binding site， phylogenetic tree， as well as protein-protein interaction. In addition， the real-time quantitative PCR （RT-qPCR） was applied in this research to analyze the expression pattern of DlPSY gene in root and leaf tissues. The bioinformatics software used in this research included NCBI BLAST， DNAMAN， NCBI CD search， Protparam， SignalP 4.1 Server， TMHMM Server， SOSUI， PSORT， ProtScale， SOPMA， COILS， SWISS-MODEL， MolProbity， 3DLigandSite， and STRING. The bioinformatics analysis results were as follows： The length of the DlPSY gene was 1 260 bp， coding for 420 amino acids; the DlPSY protein was predicted to have ‘Isoprenoid Biosyn C1 superfamily structure，?contained a signal peptide， did not contain the transmembrane structure， and was a soluble hydrophilic and secretory protein which was predicted to be located outside the membrane; the DlPSY protein secondary structure was predicted to be mainly composed of α-helix and random coil; the DlPSY protein was predicted to have a coiled coil. The Ramachandran evaluation results showed that the tertiary structure model constructed by SWISS-MODEL was reliable， and its ligand binding sites were 344Phe and 347Lys， respectively. In addition， the expression pattern of the DlPSY gene was analyzed by RT-qPCR， the results of which showed that the DlPSY gene was expressed in roots and leaves of D. longan but with the different expression levels. The expression level of DlPSY gene was higher in leaves than that in roots. The results of this study will enrich our knowledge on PSY gene family and also lay a foundation for further improving the carotenoid content in D. longan by genetic methods.

Key words： Dimocarpus longan ， DlPSY gene， bioinformatics， gene expression

龍眼（Dimocarpus longan），又名桂圓、益智，味甘、淡，性平，屬于無患子科常青果樹，具有清熱解毒之功效（黃春燕等，2019）。龍眼原產(chǎn)于我國南方，是主要的栽培水果之一，但在泰國、印度和越南等地也有廣泛的種植（Campbell & Campbell，2001;Jiang et al.， 2002）。龍眼中含有豐富的膳食纖維、維生素、蛋白質(zhì)、多糖和礦物質(zhì)等（Chaikham & Prangthip，2015），對人體的健康十分有益，可以清除自由基，降低血糖，調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)等（Jiang et al.，2014; Li et al.，2015）。龍眼中還含有多種次生代謝產(chǎn)物，如酚酸、類黃酮和類胡蘿卜素等，具有抗氧化、抗血清酶，抗突變、抗炎和抗癌等功效（Rangkadilok et al.，2007; Prasad et al.，2010）。

類胡蘿卜素是高等植物中的一類重要的次生代謝產(chǎn)物，屬烯萜類化合物，分子式為C40H56，分為胡蘿卜素和葉黃素兩大類。類胡蘿卜素主要存在于植物的葉綠體和色素體膜上，參與光合作用并保護(hù)組織不受光氧化損傷等重要功能（Robert et al.，2004;Sanae et al.，2018）。在高等植物中，類胡蘿卜素可以使組織和器官等（如花和果實）呈現(xiàn)出鮮艷的顏色，如黃色、橙色和紅色等，使植物可以吸引傳粉者（Suzuki et al.，2007;Tian et al.，2018）。除此之外，類胡蘿卜素還具有多種生物活性，如抗氧化，提高人體免疫力，對心血管疾病、某些腫瘤具有一定的預(yù)防和治療作用（王慶偉，2000）。類胡蘿卜素是由八個異戊二烯單位縮合而成的類異戊二烯化合物（Li et al.，1996）。迄今為止，已經(jīng)報道了約有750種天然類胡蘿卜素，它們在光捕獲、光保護(hù)和信號傳導(dǎo)等方面發(fā)揮重要的作用（Gruszecki & Strzaka，2005; Nisar et al.，2015）。萜類化合物的生物合成途徑有甲基赤蘚糖-4-磷酸（MEP）途徑和甲羥戊酸（MVA）途徑。在光照條件下，類胡蘿卜素的合成途徑以MEP為主（霍培等，2011）。該途徑在很多植物中予以詳細(xì)闡述（圖1），其中類胡蘿卜素合成的第一步是由八氫番茄紅素合成酶（PSY）催化生成八氫番茄紅素。PSY是類胡蘿卜素生物合成途徑中第一個關(guān)鍵酶，起限速作用（Zhang & Dubcovsky，2011）。大量研究表明PSY基因的表達(dá)水平影響植物中類胡蘿卜素的積累（Fray et al.，1995;Shewmaker et al.，1999）。

龍眼在我國的種植面積廣，資源豐富，其根、葉、花和種子等因含有類黃酮、萜類、多糖、酚酸等多種藥用成分可作為藥材使用，在我國已經(jīng)有一百多年的應(yīng)用歷史（Thitiratsaku & Anprung，2014）。然而龍眼各組織中的藥用成分含量較少，限制了龍眼作為中藥材的應(yīng)用范圍及藥用價值。本文對龍眼類胡蘿卜素合成途徑中關(guān)鍵的合成酶PSY蛋白進(jìn)行全面的生物信息學(xué)分析，并運用RT-qPCR技術(shù)對該基因在龍眼根與葉中的表達(dá)進(jìn)行研究，實驗結(jié)果將豐富我們對植物PSY家族的認(rèn)識，同時為今后采用遺傳學(xué)手段提高龍眼類胡蘿卜素的含量提供思路。

1?材料與方法

1.1 材料

1.1.1 植物材料?將龍眼種子置于流水中沖洗48 h后播種于哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥學(xué)院植物培養(yǎng)室的塑膠花盆（40 cm × 30 cm × 10 cm）中，在恒溫25 ℃、濕度50%條件下培養(yǎng)一個月后，選擇長勢一致且發(fā)育良好的龍眼植株。先用清水沖洗龍眼植株的根系除去泥土，快速用吸水紙吸取根上水分;再用RNAase-free小剪刀剪取龍眼根尖和幼葉;最后用錫紙包裹，迅速放入液氮中速凍后置于-80 ℃超低溫冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 實驗儀器與試劑?主要儀器：T100TM Themal Cycler 型PCR儀（Bio-Rad，CA，USA）、CT15RE型高速低溫離心機(jī)（HITACHI， Japan）、Gel DocTM XR+型凝膠成像系統(tǒng)（Bio-Rad， CA，USA）、Bio-Rad CFX96型實時熒光定量PCR儀（Bio-Rad，CA，USA）。

主要試劑：2×TransTaq High Fidelity （HiFi） PCR SuperMix Ⅱ （Transgen，Beijing，China）、TransStart Top Green qPCR SuperMix（TransGen，Beijing，China）、HiScript Ⅱ Q Select RT SuperMix for qPCR （+gDNA wiper）（Vazyme，Nanjing，China）。

1.2 方法

1.2.1 生物信息學(xué)分析?運用BLAST（https：//blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）和DNAMAN進(jìn)行序列檢索比對;運用CD search（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgi）預(yù)測保守結(jié)構(gòu)域;運用Protparam（http：//www.expasy.org/tools/protparam.html）分析蛋白理化性質(zhì);運用Signal P4.1 Server（http：//www.cbs.dtu.dk/services/SignalP）預(yù)測信號肽;運用TMHMM Server v.2.0（http：//www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/）預(yù)測跨膜區(qū);運用SOSUI（http：//harrier.nagahama-i-bio.ac.jp/sosui/sosui_submit.html）進(jìn)行可溶性蛋白預(yù)測;運用PSORT（http：//psort.hgc.jp）分析亞細(xì)胞定位;運用ProtScale（http：//ca.expasy.org/tools/protscale.html）分析親疏水性;運用SOPMA（https：//npsa-prabi.ibcp.fr/cgi-bin/npsa_automat.pl？page=npsa_sopma.html）進(jìn)行二級結(jié)構(gòu)預(yù)測;運用COILS（http：//www.ch.embnet.org/software/COILS_form.html）進(jìn)行卷曲螺旋分析;運用SWISS-MODEL（https：//www.swissmodel.expasy.org/）進(jìn)行三級結(jié)構(gòu)建模;運用MolProbity（http：//molprobity.biochem.duke.edu）進(jìn)行拉氏構(gòu)象圖分析;運用3DLigandSite（http：//www.sbg.bio.ic.ac.uk/～3dligandsite/）預(yù)測配體結(jié)合位點;運用STRING（https：//string-db.org/）構(gòu)建候選蛋白與相關(guān)蛋白的互作網(wǎng)絡(luò)。

1.2.2 龍眼總RNA提取與cDNA合成?從-80 ℃超低溫冰箱中取出龍眼的根和葉，分別將其研磨成細(xì)粉狀。取1.5 mL離心管，將研磨好的細(xì)粉放入其中，加入700 μL CTAB裂解液，充分震蕩混勻，65 ℃水浴10 min，每隔2 min搖晃一次，冰浴2 min。將離心管放入低溫離心機(jī)，4 ℃，12 000 r·min-1離心2 min;取上清液至新的1.5 mL離心管中，加入350 μL水飽和酚和350 μL氯仿，抽提一次，4 ℃，1 2 000 r·min-1離心2 min，重復(fù)一次;加入700 μL氯仿提取一次，12 000 r·min-1 4 ℃ 離心2 min，重復(fù)一次;取上清，加入250 μL無水乙醇和250 μL 8 mol·L-1 LiCl，冰上靜置20 min，4 ℃，1 2000 r·min-1離心20 min;棄上清，75%乙醇洗滌兩次，風(fēng)干5 min;加入30 μL DEPC，得到總RNA。根據(jù)Vazyme 公司 HiScript II Q Select RT SuperMix for qPCR （+gDNA wiper）產(chǎn)品說明書進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，得到cDNA，-20 ℃保存于冰箱備用。

1.2.3 DlPSY基因差異表達(dá)分析?根據(jù)DlPSY基因序列，設(shè)計RT-qPCR的上游和下游引物。上游引物為ACTGTGTCCGATAAGGCAGC，下游引物為AACGGCTTTAGACAGGTGGG。依據(jù) TransStart Top Green qPCR SuperMix 試劑盒說明書進(jìn)行基因定量分析實驗。反應(yīng)體系（20 μL）：TransStart Top Green qPCR SuperMix10 μL，ddH2O 7 μL，上、下游引物各1 μL，根和葉cDNA 模板各1 μL。RT-qPCR反應(yīng)條件為預(yù)變性95 ℃，30 s;95 ℃變性30 s，60 ℃退火10 s，延伸30 s，擴(kuò)增40個循環(huán)。采用 2-ΔΔCt 方法（Schmittgen & Livak，2008）計算PSY基因相對表達(dá)量。

2?結(jié)果與分析

2.1 DlPSY一級結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)分析

應(yīng)用ExPASy ProtParam 分析DlPSY的氨基酸組成及理化性質(zhì)。結(jié)果表明，DlPSY蛋白由420個氨基酸組成（圖2），其中Leu占比最大為10.2%，His占比最小為0.5%;DlPSY蛋白質(zhì)的總原子數(shù)為6 717，相對分子量為47 593.70，420個氨基酸中有52個是負(fù)電荷氨基酸殘基（Asp+Glu），60個是正電荷氨基酸殘基（Arg+Lys），其預(yù)測的理論等電點PI為8.95，呈堿性;在波長280 nm下，假設(shè)所有半胱氨酸均來自胱氨酸，其DlPSY的消光系數(shù)為71 195 m-1·cm-1，假設(shè)無半胱氨酸殘基存在，其消光系數(shù)為70 820 m-1·cm-1;DlPSY的不穩(wěn)定系數(shù)為53.51，預(yù)測該蛋白為不穩(wěn)定蛋白;脂肪系數(shù)為90.81;DlPSY的總平均親水性為-0.260，預(yù)測DlPSY為親水蛋白。

2.2 DlPSY蛋白的保守結(jié)構(gòu)域分析

采用NCBI CD search分析DlPSY蛋白序列保守結(jié)構(gòu)域，結(jié)果如圖3所示。DlPSY基因編碼八氫番茄紅素合成酶，具有Isoprenoid Biosyn C1超家族結(jié)構(gòu)。

2.3 DlPSY蛋白的信號肽、跨膜結(jié)構(gòu)域、亞細(xì)胞定位及親疏水性分析

運用SignalP 4.1 Server對DlPSY 蛋白進(jìn)行信號肽預(yù)測，結(jié)果如圖4所示。DlPSY的最大剪切位點值（C-score）為0.413。最大綜合剪切位點值（Y-score）為0.439，兩個位點都在第21位氨基酸。最大信號肽值（S-score）在第13位氨基酸，為0.647，大于閾值0.5，預(yù)測DlPSY蛋白含有信號肽，為分泌性蛋白。

采用TMHMM Server v.2.0 對DlPSY 蛋白跨膜結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析（圖 5），結(jié)果表明DlPSY不含有跨膜螺旋（TMHs），無跨膜區(qū);非跨膜螺旋區(qū)（ExpAA）概率為0.235 91，預(yù)測該蛋白為非跨膜蛋白;該蛋白質(zhì)的 N 末端位于膜內(nèi)側(cè)的概率為 0.172 34，總體位于膜外，整條肽鏈的跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測值小于1，推測其不存在跨膜結(jié)構(gòu)域。應(yīng)用 PSORT對DlPSY細(xì)胞內(nèi)定位進(jìn)行預(yù)測，結(jié)果如表1所示，預(yù)測DlPSY蛋白可能存在于膜外。

通過ExPASY ProtScale預(yù)測DlPSY氨基酸序列的親疏水性（圖6），預(yù)測結(jié)果的正分值越大，疏水性越強(qiáng);負(fù)分值越小，其親水性越強(qiáng)。分析結(jié)果表明，DlPSY最大正分值（2.678）位于肽鏈中的第6位氨基酸，最小負(fù)分值（-3.022）位于第57位氨基酸，整條肽鏈的親水性氨基酸數(shù)量大于疏水性氨基酸數(shù)量，推測DlPSY為可溶性親水蛋白。

2.4 DlPSY蛋白的二級結(jié)構(gòu)分析

采用SOPMA對DlPSY蛋白二級結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測，結(jié)果如圖7所示。DlPSY蛋白中有235個氨基酸殘基呈現(xiàn)α-螺旋結(jié)構(gòu)，占肽鏈氨基酸總數(shù)的55.95%;49個氨基酸殘基呈延伸鏈結(jié)構(gòu)，占肽鏈氨基酸總數(shù)的11.67%;17個氨基酸殘基呈 β-轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)，占肽鏈氨基酸總數(shù)的4.05%;119個氨基酸殘基呈無規(guī)則卷曲結(jié)構(gòu)，占肽鏈氨基酸總數(shù)的28.33%。DlPSY蛋白的主要結(jié)構(gòu)為α-螺旋和無規(guī)則卷曲，該結(jié)構(gòu)有助于蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性。

2.5 DlPSY蛋白的卷曲螺旋域分析

應(yīng)用ExPASy COILS對DlPSY蛋白進(jìn)行卷曲螺旋域預(yù)測（圖8），加權(quán)與未加權(quán)的預(yù)測結(jié)果一致，推測 DlPSY蛋白含卷曲螺旋域。

2.6 DlPSY蛋白三級結(jié)構(gòu)建模及結(jié)合位點預(yù)測

利用SWISS-MODEL對DlPSY進(jìn)行蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)建模（PyMOL視圖） （圖 9），并利用MolProbity Ramachandran評估DlPSY的三級結(jié)構(gòu)模型（圖10）。結(jié)果顯示，DlPSY蛋白95%氨基酸位點位于最佳區(qū)域內(nèi)，100%氨基酸位點位于允許區(qū)域范圍，表明DlPSY蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)模型準(zhǔn)確可靠。利用3DLigand-Site預(yù)測DlPSY蛋白質(zhì)配體結(jié)合位點為344Phe和347Lys（圖11）。

2.7 PSY序列比對及系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建

應(yīng)用Bioedit對黃水仙（X78814）、胡椒（X68017）、番茄（KC767847.1）、擬南芥（L25812）、水稻（AY452768）、柑橘（AF152892）、柿子（FJ594485.1）、柚子（KP462726.1）、向日葵（CAC27383.1）、草莓（ACR61392.1）、甜瓜（AEH03199.1）、枸杞（AAW88383.1）、廣藿香（AHJ90431.1）、芒果（JQ277716.1）、溫州蜜柑（AF220218.1）、苦瓜（AAR86104.1）和南瓜（AEK86564.1）的PSY蛋白進(jìn)行序列比對（圖12），采用MEGA10進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建（圖13），探索PSY蛋白在不同物種之間的進(jìn)化關(guān)系。結(jié)果表明，DlPSY與柑橘、溫州蜜柑、柚子、芒果的PSY同源性較高，推測它們來自同一個祖先，與甜瓜PSY的同源性較低，親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。

2.8 DlPSY蛋白互作關(guān)系

應(yīng)用 STRING 交互式數(shù)據(jù)庫構(gòu)建候選蛋白與相關(guān)蛋白的相互作用網(wǎng)絡(luò)，分析預(yù)測與DlPSY相互作用的蛋白。選擇擬南芥為模式植物，構(gòu)建出的蛋白互作結(jié)果如圖14所示。DlPSY與ZDS（ζ-胡蘿卜素脫氫酶）、LUT2（番茄紅素ε環(huán)化酶）、Z-ISO（ζ-胡蘿卜素異構(gòu)酶）、LYC（番茄紅素β環(huán)化酶）、ABA1（玉米黃質(zhì)環(huán)氧酶）、CRTISO（番茄紅素異構(gòu)酶）、PDS3（15-順式八氫番茄紅素去飽和酶）、GGPS1（牻牛兒基牻牛兒基焦磷酸合酶大亞基1）、DXR（1-脫氧-D-木糖5-磷酸還原異構(gòu)酶）和CLA1（1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶）具有相互作用。

2.9 DlPSY基因在龍眼根和葉中的差異表達(dá)分析

采用實時熒光定量PCR 技術(shù)（RT-qPCR）分析從龍眼轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中篩選獲得的DlPSY基因在根和葉中的相對表達(dá)量，結(jié)果如圖15所示。DlPSY基因在龍眼根和葉中均有表達(dá)，葉中的表達(dá)量高于其在根中的表達(dá)量。

3?討論與結(jié)論

類胡蘿卜素是植物中的一類重要的次生代謝產(chǎn)物，屬于親脂性類異戊二烯化合物（Walter & Strack，2011），其合成途徑在很多植物中給予了詳細(xì)的介紹。PSY基因是類胡蘿卜素合成途徑中的首個合成酶基因，起到限速的作用，影響類胡蘿卜素在植物組織中的積累（Zhang & Dubcovsky，2011）。在本研究中，我們根據(jù)龍眼轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)篩選獲得一個DlPSY基因，編碼420個氨基酸。生物信息學(xué)分析表明，該蛋白為堿性不穩(wěn)定蛋白，不存在跨膜區(qū)，具有可溶和親水的特性，存在于膜外，二級結(jié)構(gòu)主要為α-螺旋和無規(guī)則卷曲，本研究結(jié)果與桃、枇杷、芒果等PSY蛋白一致（黃建峰等，2017;梁敏華等，2018;洪敏等，2018），推測不同植物種屬間PSY蛋白的親疏水性、蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)等具有一定的保守性。甘薯、芥藍(lán)等PSY蛋白主要位于葉綠體中，直接在細(xì)胞器中發(fā)揮作用;而龍眼和芒果中的PSY主要位于膜外，推測其在細(xì)胞質(zhì)中合成前體蛋白后，并未進(jìn)入其他亞細(xì)胞器中，而是經(jīng)過加工成為成熟的蛋白質(zhì)后發(fā)揮作用（薛生玲等，2017;程潔等，2017）。蛋白質(zhì)折疊時能夠形成親水表面和疏水內(nèi)核，并且在跨膜結(jié)構(gòu)中存在高疏水區(qū)域（李卿等，2015）。本文對PSY蛋白親疏水性分析結(jié)果表明其不存在高疏水區(qū)域， 由此推斷龍眼PSY蛋白為非跨膜親水蛋白。

RT-qPCR結(jié)果表明DlPSY基因在根和葉中均有表達(dá)，其葉中的表達(dá)量高于根。在已研究植物中，PSY基因在不同植物中的各組織表達(dá)量存在差異，溝葉結(jié)縷草ZmPSY基因在葉中的表達(dá)量較高，草莓FaPSY基因在花中的表達(dá)量較高，而西瓜ClPSY基因在果實中的表達(dá)量較高（朱海生等，2011;呂品等，2014;董笛等，2017）。相關(guān)研究表明PSY基因的表達(dá)量與類胡蘿卜素在組織中的積累呈正相關(guān)，在油菜、馬鈴薯和番茄中轉(zhuǎn)入與類胡蘿卜素合成相關(guān)的PSY基因后其類胡蘿卜素含量也隨之提高（王玉萍等，2006;羅秀芹等，2018），因此我們推測，龍眼葉片與根相比，葉片中的類胡蘿卜素的含量較高。

綜上所述，本文從龍眼轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫中篩選獲得一個PSY基因，采用生物信息學(xué)的方法對其理化性質(zhì)、亞細(xì)胞定位、親疏水性和高級結(jié)構(gòu)等進(jìn)行研究，同時采用RT-qPCR技術(shù)分析DlPSY基因在龍眼根與葉中的差異表達(dá)，實驗結(jié)果為后期即將開展的通過轉(zhuǎn)基因方法提高類胡蘿卜素的含量提供了科學(xué)依據(jù)。

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