基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接研究“柴胡-丹參”藥對治療慢性乙型肝炎的作用機(jī)制*

任思思，范 妤,△，郭東艷，李 倩，陳 陽，翟秉濤，史曉燕，段麗芳

(1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，陜西 咸陽 712046；2.陜西省中藥基礎(chǔ)與新藥研究重點實驗室，陜西 咸陽 712046)

慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)是指檢測乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)為陽性，具有潛伏期長、治愈率低、病情易惡化等特點的一類慢性傳染性疾病，被我國法典列入乙類傳染病的范疇[1]。中國是世界上感染HBV病毒最多的國家，為了就關(guān)于防治肝炎的可持續(xù)發(fā)展目標(biāo)采取了一系列的治療措施，在過去30年里，我國取得了良好的進(jìn)展，將在2030年前成為全球消除CHB的主要貢獻(xiàn)者[2]。但中國作為人口基數(shù)大的國家，國內(nèi)感染HBV病毒的患者高達(dá)7 000萬左右，中國在實現(xiàn)到2030年消除乙型肝炎的目標(biāo)方面仍然面臨挑戰(zhàn)[3]。目前西醫(yī)對CHB以核苷酸類似物和干擾素兩大類為主，但存在無法完全消除或滅活cccDNA，造成疾病停藥后易復(fù)發(fā)等缺點[4]。

CHB根據(jù)癥狀、體征，中醫(yī)學(xué)屬于“鼓脹”“黃疸”“肝熱病”等肝臟疾病的范疇，并因本病具有廣泛的傳染性，亦歸屬“疫邪”的范疇。本病病位在肝，肝膽濕熱兼氣滯血瘀為本病常見證型，清熱利濕、理氣化瘀是主要治法[5]。查閱大量文獻(xiàn)，對治療CHB的證型、用藥頻率、用藥規(guī)律、歸經(jīng)等進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析[6-7]，其中柴胡、丹參兩味藥材在多種證型中為主治藥物，選用頻次較高，是CHB主治方劑的多用中藥。現(xiàn)有研究表明，柴胡中的有效成分具有疏肝理氣、解毒除濕、抗病毒、抗肝炎損傷等生物活性[8]。丹參具有抗炎鎮(zhèn)痛、活血化瘀、清心除煩、抗纖維化、抗心血管疾病等功效[9]。盡管兩藥相配伍共奏清熱利濕、疏肝理氣、養(yǎng)血柔肝之效，但因其中藥化學(xué)成分復(fù)雜，為闡明其治療CHB的作用機(jī)制帶來了一定困難。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是運用網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫和相應(yīng)軟件及算法，借助生物信息學(xué)、系統(tǒng)生物學(xué)等相關(guān)學(xué)科理論，對其進(jìn)行系統(tǒng)性、整體性網(wǎng)絡(luò)分析的一門新興學(xué)科[10]。本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接的方法，對柴胡-丹參藥對治療CHB數(shù)據(jù)中的藥物及疾病成分、靶點進(jìn)行多層次、多通路、多角度分析，構(gòu)建相互靶點作用網(wǎng)絡(luò)，并對其有效成分與慢性乙型肝炎HBcAg、HBeAg、HBsAg進(jìn)行分子對接，深入探討柴胡-丹參藥對治療CHB的潛在作用機(jī)制，為以后的實驗研究和臨床應(yīng)用奠定了新的思路和理論依據(jù)，方案流程圖如圖1所示。

圖1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)流程圖

1 材料與方法

1.1 獲取“柴胡-丹參”有效活性成分及靶點篩選 借助 TCMSP 數(shù)據(jù)庫(https：//tcmspw.com/tcmsp.php)和CNKI(https：//www.cnki.net/)獲取中藥的有效活性成分。在TCMSP的“Herbname”中分別以“柴胡”“丹參”為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索，獲取相對應(yīng)的全部有效化學(xué)成分信息。設(shè)置條件為口服利用度(oral bioavilability，OB)≥30%，類藥性(drug-like，DL)≥0.18，篩選滿足口服利用度高且藥物相似性較好的有效；成分納入研究。同時在CNKI中查閱文獻(xiàn)和藥典，將已有文獻(xiàn)報道對治療疾病的潛在化學(xué)成分納入其中。

利用TCMSP數(shù)據(jù)庫查詢化合物的靶點，在U－niprot數(shù)據(jù)庫(https：//www.uniprot.org/)和 Drugbank數(shù)據(jù)庫(http：//www.drugbank.ca/)中查找對應(yīng)基因，設(shè)置物種為“Homo Sapiens”，且校正所有靶點基因名稱，刪除與標(biāo)準(zhǔn)不符的基因。

運用網(wǎng)絡(luò)圖像化軟件 Cytoscape3.7.2(http：//www.cytoscape.org/)將查詢到的化合物成分及其作用靶基因構(gòu)建相關(guān)的網(wǎng)絡(luò)圖，其節(jié)點大小和顏色深淺與Degree值呈正比關(guān)系。

1.2 慢性乙型肝炎靶點的篩選 在OMIM數(shù)據(jù)庫(http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/omim)、Drugbank 數(shù) 據(jù)庫(http：//www.drugbank.ca/) 和 GeneCards數(shù)據(jù)庫(http：//www.genecards.org)中，以“chronic hepatitic B”為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索，查詢到與CHB相關(guān)的靶點基因。將得到的基因合并、去重，得到CHB的靶點基因。

1.3 獲取“柴胡-丹參”藥對與CHB共同靶點及PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 運用 venny 2.1(https：//bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/)將“柴胡-丹參”藥對化合物成分中潛在靶點與疾病靶點取交集，得到共同的靶基因。將靶點導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(https：//string-db.org/)，設(shè)置物種為“Homo Sapiens”，置信度“highest confidence(0.9)”，獲取相對應(yīng)的PPI網(wǎng)絡(luò)圖，保存TSV格式，應(yīng)用R語言繪制“柴胡-丹參藥對-CHB-靶點柱狀圖”，可直觀反映基因在PPI網(wǎng)絡(luò)中的連接節(jié)點，連接節(jié)點的數(shù)目越多，代表該基因在藥物與疾病中發(fā)揮的作用越重要。

1.4 “柴胡-丹參”藥對與CHB-有效成分-靶點網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建 通過共同核心靶點反向找到相應(yīng)的有效成分，刪除重復(fù)成分，得到共有活性成分。將其導(dǎo)入Cytoscape3.7.1軟件繪制相互作用網(wǎng)絡(luò)，并分析結(jié)果，圖中節(jié)點的大小與度值呈正比關(guān)系，獲得最終“柴胡-丹參藥對與CHB-有效成分-靶點圖”。

1.5 靶點富集通路分析及可視化處理 為了闡明“柴胡—丹參”藥對靶點蛋白的基因功能以及中藥化合物對于治療CHB的潛在作用靶點在信號通路中的具體作用，應(yīng)用R語言中的ClusterProfiler對核心靶點進(jìn)行GO分析和KEGG通路分析，并對富集分析結(jié)果進(jìn)行可視化處理，以及GO功能和KEGG代謝通路圖作具體分析。

1.6 核心有效成分與慢性乙型肝炎HBcAg、HBeAg、HBsAg分子對接 HBV是一個小的圓形的部分雙鏈、有包膜的脫氧核糖核酸病毒，屬嗜肝DNA病毒科，包括核心抗原(HBcAg)、包膜抗原(HBeAg)和表面抗原(HBsAg)。這3種抗原存在于基因組中的編碼蛋白，也是導(dǎo)致和維持CHB在病毒與宿主細(xì)胞結(jié)合中發(fā)揮免疫耐受的重要原因之一[11]。故將HBsAg、HBcAg、HBeAg作為CHB的主要基因蛋白，在PDB(http：//www.rcsb.org/)數(shù)據(jù)庫中找到對應(yīng)的蛋白結(jié)構(gòu)。從1.4的條件中找到度值最高的有效成分，在Pubchem(https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)數(shù)據(jù)庫中找到其相對應(yīng)的2D結(jié)構(gòu)，導(dǎo)入chem3D 16.0軟件對結(jié)構(gòu)優(yōu)化轉(zhuǎn)為mol2結(jié)構(gòu)。將蛋白與小分子結(jié)構(gòu)導(dǎo)入Autodocks 4.2.6軟件中進(jìn)行相互作用，在cmd中運用vina系統(tǒng)得到有效成分與靶蛋白的結(jié)合能，在Pymol軟件中對其可視化處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 “柴胡-丹參”藥對主要活性成分 使用TCMSP數(shù)據(jù)庫在1.1的條件下，篩選出符合條件的化合物成分柴胡17個，丹參65個，查閱相關(guān)文獻(xiàn)[12]發(fā)現(xiàn)丹參中丹參素(danshensu)、丹酚酸A(salvianolic acid A)不在其中，可能因不符篩選OB值與DL值的條件被系統(tǒng)刪除，但考慮在治療疾病中發(fā)揮積極作用，故納入這2個化合物。然后在TCMSP數(shù)據(jù)庫進(jìn)行靶點檢索，部分化合物未匹配到相對應(yīng)的靶點蛋白，將其刪除，共得到“柴胡-丹參”有效成分73個。如表1所示，為便構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)分析圖，有效成分由簡字母代替，如表1。

表1 “柴胡-丹參”有效成分匯總

續(xù)表1

續(xù)表1

2.2 藥對活性成分對應(yīng)的靶點及網(wǎng)絡(luò)分析 在U－niprot和Drugbank數(shù)據(jù)庫中，設(shè)置物種為“Homo Sapiens”，將“柴胡-丹參”藥對中有效蛋白靶點轉(zhuǎn)化為對應(yīng)基因名，刪除重復(fù)靶點，共得到239個靶基因。使用Cytoscape3.7.1繪制“柴胡-丹參藥對有效成分-靶點”網(wǎng)絡(luò)圖，如圖2所示，圖中包含316個節(jié)點和1343條邊，其節(jié)點大小、顏色深淺與Degree值呈正比關(guān)系。從圖中可以看出柴胡-丹參藥對中的有效成分能夠與多個靶點相關(guān)聯(lián)，而某些靶點又可作用于多個有效成分，從而反映出該藥對多靶點、多成分特。

圖2 柴胡-丹參藥對有效成分-靶點

2.3 疾病對應(yīng)的靶點 分別在OMIM數(shù)據(jù)庫、Drugbank數(shù)據(jù)庫和GeneCards數(shù)據(jù)庫取中位數(shù)獲得與CHB密切相關(guān)的基因靶點，將3個數(shù)據(jù)庫的基因合并去重得到985個。

2.4 中藥-疾病核心靶點與PPI網(wǎng)絡(luò)圖分析 應(yīng)用venny 2.1將柴胡-丹參化合物成分中潛在靶點與CHB靶點進(jìn)行匹配，得到“柴胡-丹參”藥對與CHB交集靶點韋恩圖，如圖3所示，圖中柴胡-丹參藥對和CHB三者共同交集靶點48個，“柴胡-丹參”藥對與CHB交集靶點88個。

圖3 “柴胡-丹參”藥對-CHB-靶點韋恩圖

將共有的88個靶點導(dǎo)入string數(shù)據(jù)庫中獲取相對應(yīng)的PPI網(wǎng)絡(luò)圖，保存為TSV結(jié)構(gòu)，應(yīng)用R語言篩選前30個靶點繪制“柴胡-丹參藥對-CHB-靶點柱狀圖”，如圖4所示。根據(jù)數(shù)值篩選前10的靶點分別是：STAT3、JUN、TP53、AKT1、TNF、RELA、MAPK1、IL6、MAPK14、MAPK8，表明柴胡-丹參藥對治療CHB中這些核心靶點發(fā)揮了重要意義。

圖4 “柴胡-丹參”藥對-CHB-靶點柱狀圖

在HBV感染中，信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3[13-14](signal transducer and activator of transcription 3，STAT3)通過調(diào)節(jié)細(xì)胞介導(dǎo)因子HBV增強(qiáng)反應(yīng)以及影響肝臟生長因子和表皮生長因子在CD-95介導(dǎo)細(xì)胞凋亡和T細(xì)胞毒性的細(xì)胞保護(hù)作用，參與抑制HBV和肝臟疾病的免疫反應(yīng)；STAT3也被證明在HBV感染相關(guān)的急慢性肝衰竭中使得Th17反應(yīng)增強(qiáng)[15]。轉(zhuǎn)錄因子AP-1[16](transcription factor AP-1，JUN)被激活后可促進(jìn)細(xì)胞遷移，參與細(xì)胞內(nèi)HBV感染和轉(zhuǎn)移。細(xì)胞腫瘤抗原P53(cellular tumor antigen p53，TP53)、鉀通道 AKT1(potassium channel AKT1，AKT1)、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF)均參與CHB病變進(jìn)展過程。

2.5 中藥疾病共同有效成分及靶點網(wǎng)絡(luò)圖分析 通過共同靶點找到67個有效成分，將其導(dǎo)入Cytoscape 3.7.1軟件構(gòu)建“柴胡-丹參藥對-CHB-有效成分-靶點圖”。如圖5所示，得到的網(wǎng)絡(luò)圖中包含159個節(jié)點和527條邊，圖中節(jié)點的大小與Degree值呈正比，節(jié)點在網(wǎng)絡(luò)中作用越強(qiáng)，其Degree值越大。圖中粉色正方形為丹參有效成分，肉粉色為柴胡有效成分，綠色六邊形為交集靶點，黃色箭頭表示中藥，藍(lán)色圓形表示CHB，可以看出靶點間相互聯(lián)系的關(guān)系，可以看出柴胡-丹參藥對通過多靶點、多成分之間的相互作用共同治療CHB。

圖5 柴胡-丹參藥對-CHB-有效成分-靶點圖

2.6 GO功能和KEGG代謝分析及可視化結(jié)果 借助R軟件中ClusterProfiler包，對柴胡-丹參藥對治療CHB的88個共同靶點進(jìn)行GO功能和KEGG代謝分析，設(shè)置P≤0.05，篩選前20個在治療疾病中發(fā)揮顯著作用的通路進(jìn)行可視化處理，得到GO分析氣泡圖，如圖6所示。從圖中可以看出，在柴胡-丹參藥對治療慢性乙型肝炎的GO功能分析中，包括細(xì)胞因子受體結(jié)合(cytokine recept binding)、受體配體活動(receptor ligand activity)、信號受體激活器的活性(signaling receptor activator activity)、細(xì)胞因子活性(cytokine activity)、DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合(DNA-binding transcription factor binding)等生物過程。

圖6 共同潛在靶點的GO功能富集分析

柴胡-丹參藥對治療CHB的KEGG代謝通路，篩選前20條通路進(jìn)行可視化處理，得到KEGG分析氣泡圖，如圖7所示。從圖中可以看出，柴胡-丹參藥對有多重通路可能與CHB有關(guān)，主要包括乙型肝炎通路(hepatitis B)、P13k-akt信號通路(P13k-akt signaling pathway)、人類巨細(xì)胞病毒感染通路(human cytomegalovirus infection)、卡波西肉瘤相關(guān)皰疹病毒感染通路(kaposi sarcoma-associated herpesvirus infection)、Epstein-Barr病毒感染通路(epstein-Barr virus infection)、在糖尿病并發(fā)癥中AGE-RAGE信號通路(AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications)等信號通路。

圖7 共同潛在靶點的KEGG通路富集分析

2.7 代謝通路圖分析 觀察圖6可知，乙型肝炎通路與P13k-akt信號通路在所有通路中P值最高，與CHB聯(lián)系最為緊密，在1.5的條件下，借助R軟件繪制KEGG代謝通路圖，如圖8、圖9所示。從圖8可知，柴胡-丹參藥物成分能夠調(diào)控乙型肝炎通路中多種蛋白的表達(dá)，減緩HBV病程的進(jìn)展。促進(jìn)MMP-9、Bcl2表達(dá)參與肝細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移和抗凋亡；對STAT、STAT3磷酸化后，作用于胞核，參與肝細(xì)胞增殖；可通過激活I(lǐng)L-8促進(jìn)HCC發(fā)展；可調(diào)控c-Myc、STAT3基因等途徑參與細(xì)胞增殖和分化。從圖9可知，有效成分在P13k-akt信號通路中通過多途徑控制細(xì)胞分化以及調(diào)節(jié)與其他通路的連接。通路中AKT對于p21磷酸化，從而抑制CDK和Cyclin控制細(xì)胞的周期；可抑制Bcl-xL和Bcl-2促進(jìn)細(xì)胞凋亡；可誘導(dǎo)PRK磷酸化等途徑參與細(xì)胞增殖和修復(fù)DNA。P13kakt信號通路被認(rèn)為是肝癌侵襲轉(zhuǎn)移的診斷和預(yù)后指標(biāo)，也是治療肝癌的靶點[17]。

圖8 乙型肝炎通路圖

圖9 P13k-akt信號通路圖

2.8 中藥核心成分與疾病靶蛋白分子對接結(jié)果分析 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，配體與受體結(jié)合的結(jié)合能與活性呈反比，結(jié)合能越低其活性越好，藥物治療疾病的作用可能越大。根據(jù)圖4的Degree值篩選度值最大的有效成分別為槲皮素(quercetin)、木樨草素(luteolin)，將其與CHB中靶蛋白HBcAg、HBeAg、HBsAg進(jìn)行對接，結(jié)果見表2，可知槲皮素、木樨草素與HBcAg、HBeAg、HBsAg靶蛋白的結(jié)合能數(shù)值較小，具有較好的親和力。

表2 有效成分與靶蛋白對接結(jié)果

其對接構(gòu)像，如圖10所示，具有較好的結(jié)合活性，分子的構(gòu)像比較穩(wěn)定。表明有效活性成分可以抑制HBV，阻斷其與宿主細(xì)胞的相互作用，因此，“柴胡-丹參”藥對治療CHB具有潛在的作用機(jī)制。

圖10 槲皮素、木樨草素與靶蛋白HBcAg、HBeAg、HBsAg的對接構(gòu)像

3 討論

CHB治療的主要方案是抑制HBV復(fù)制以及提高人體免疫能力，該疾病治療的主要目標(biāo)是阻止疾病進(jìn)展，從而防止發(fā)展為肝纖維化和肝癌來提高存活率和生活質(zhì)量[18]。中醫(yī)治療疾病采用辨證論治的基本方法，認(rèn)為CHB主要與人體正氣虧虛及外感濕熱疫毒侵襲有關(guān)，病理產(chǎn)物濕熱貫穿于整個疾病階段；同時本病長期代謝的病理產(chǎn)物淤血，是影響著CHB病情發(fā)展變化的重要因素，故常使用清熱利濕解毒、活血祛瘀藥物。查閱CHB用藥規(guī)律分析文獻(xiàn)顯示[6-7]，治療CHB各證型的常用方劑中，均引入柴胡-丹參藥對，選用頻率較高；柴胡-丹參藥對相配伍共奏疏肝理氣、清熱利濕、養(yǎng)血柔肝之效[19]。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析后顯示，“柴胡-丹參”藥對治療CHB發(fā)揮作用的有效活性成分73個，對應(yīng)的潛在靶點985個。經(jīng)柴胡-丹參藥對-CHB-有效成分-靶點圖網(wǎng)絡(luò)篩選后159個節(jié)點，527條邊，體現(xiàn)出本藥對的化學(xué)成分與靶點間具有復(fù)雜的相互作用；分析Degree值，得到藥對治療CHB的核心靶點88個，其中主要包括 PTGS2、ADRB2、HSP90AA1、ESR1、PPARG等。有文獻(xiàn)報道表明[20]，PTGS2能夠通過介質(zhì)對HBV產(chǎn)生抑制作用，參與病毒表達(dá)和轉(zhuǎn)錄過程。ADRB2在小細(xì)胞富集的轉(zhuǎn)錄簇中表達(dá)，其表達(dá)的高低與神經(jīng)內(nèi)分泌分化程度有關(guān)，并與縮短病人生存周期有關(guān)[21]。HSP90AA1屬于熱蛋白家族，在肝細(xì)胞癌變和病毒活性下進(jìn)行差異表達(dá)，作用于該位點，可有效阻斷病情進(jìn)一步惡化[22]。

臨床實驗研究表明[23-25]，柴胡調(diào)節(jié)機(jī)體的巨噬細(xì)胞，不影響細(xì)胞活性但刺激細(xì)胞代謝MTT和積累NR的能力，抑制炎性因子的生成，表明細(xì)胞的免疫功能增強(qiáng)和發(fā)揮抗炎作用；同時柴胡成分直接參與了與α-對苯二甲酸類似的活性氧引起的氧化細(xì)胞過程，減少肝損傷程度。丹參中的有效成分可以激活酶的活性，抑制病毒在細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移，減少肝臟的病理損傷，延緩疾病進(jìn)展以及提高機(jī)體免疫能力[26-27]。

通過GO功能分析和KEGG代謝富集通路對共同88個靶點分析，顯示生物過程包括細(xì)胞因子受體結(jié)合(cytokine recept binding)、受體配體活動(receptor ligand activity)、信號受體激活器的活性(signaling receptor activator activity)等，抑制了病毒與宿主細(xì)胞表面受體相結(jié)合、抑制細(xì)胞間復(fù)制、阻斷信號傳遞、抑制病毒活性等生物活性。信號通路包括乙型肝炎通路(hepatitis B)、P13k-akt信號通路(P13k-akt signaling pathway)、人類巨細(xì)胞病毒感染通路(human cytomegalovirus infection)等，在細(xì)胞生長、增殖及凋亡中起關(guān)鍵作用。其中柴胡-丹參藥物成分能夠調(diào)控乙型肝炎通路中多種蛋白的表達(dá)，參與肝細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等過程，減緩HBV病程的進(jìn)展。P13k-akt信號通路是調(diào)控細(xì)胞信號傳導(dǎo)過程的重要通路，參與乳腺癌、膀胱癌和非小細(xì)胞肺癌的進(jìn)展[17]。通路中PI3K可以激活蛋白激酶AKT，促進(jìn)細(xì)胞的生長和增殖，PTEN和活化的AKT與肝內(nèi)轉(zhuǎn)移、腫瘤分級和高增殖指數(shù)相關(guān)，通過多種途徑參與代謝、凋亡、細(xì)胞生長和增殖，P13k-akt的表達(dá)與疾病臨床分期呈正相關(guān)，表明該通路可抑制病毒復(fù)制、細(xì)胞周期進(jìn)程、遷移和侵襲降低[28]。

HBV與肝細(xì)胞表面受體結(jié)合，入侵細(xì)胞后通過復(fù)制引起免疫應(yīng)答，導(dǎo)致細(xì)胞損傷、炎癥進(jìn)而導(dǎo)致壞死[29]。血清中大量存在的HBsAg是導(dǎo)致免疫耐受的主要原因，能夠反應(yīng)患者清除HBV的情況，也是臨床上判斷CHB得到控制的重要指標(biāo)之一[30]。HBcAg與HBeAg都是HBV復(fù)制過程中同步產(chǎn)生的翻譯蛋白，將其作為觀察HBV復(fù)制的指標(biāo)。HBcAg是HBV內(nèi)衣殼的成分之一，經(jīng)過內(nèi)源性抗體途徑在肝細(xì)胞表面表達(dá)，參與免疫反應(yīng)，進(jìn)一步造成肝損傷[31]。HBeAg在細(xì)胞內(nèi)加工后，分泌至胞外，能夠在血清中檢測，并且血清學(xué)表達(dá)陽性與患者停藥后復(fù)發(fā)率相關(guān)[32-33]。HBV基因組中的編碼蛋白HBsAg、HBcAg、HBeAg，參與患者病毒學(xué)應(yīng)答和疾病預(yù)后，也是導(dǎo)致和維持CHB在感染過程中免疫耐受的重要原因[34]。其中，故將HBsAg、HBcAg、HBeAg作為CHB的主要基因蛋白，根據(jù)圖4度值篩選有效活性成分槲皮素(quercetin)、木樨草素(luteolin)與CHB中靶蛋白HBcAg、HBeAg、HBsAg分子對接，結(jié)合能數(shù)值較小，則親和力較好。有效成分與病毒表面抗原結(jié)合，能夠減少HBV對肝細(xì)胞的吸附，并且抑制HBcAg、HBeAg、HBsAg的分泌，減少患者的耐藥性、抗病毒效應(yīng)[35-36]。槲皮素是一種分布廣泛的植物黃酮醇，據(jù)報道對腦膜炎病毒、HSV、HIV、副流感病毒3型、偽狂犬病病毒具有體外抗病毒活性，體外實驗表明[37]槲皮素具有較高的抗HBV潛力。

本研究運用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接相結(jié)合的方法，預(yù)測了“柴胡-丹參”藥對治療CHB的有效蛋白成分、關(guān)鍵靶點和生物活性通路，闡明了其抑制肝纖維化、抑制病毒活性、減少肝損傷、提高免疫力等作用機(jī)制，具有一定的預(yù)測性和準(zhǔn)確性，后續(xù)還可以通過在體、離體實驗研究獲得更可靠的實驗依據(jù)。