蔣澤敏

（貴州省平塘縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 558300）

小反芻獸疫是由小反芻獸疫病毒引起的一種急性病毒性傳染病，主要感染小反芻動物，以發(fā)熱、口炎、腹瀉、肺炎為特征。由于小反芻獸疫發(fā)病率高、死亡率高，暴發(fā)后傳播迅速，如不采取有效措施，能造成巨大經(jīng)濟(jì)損失，使防治工作更加復(fù)雜，因此，小反芻獸疫已成為世界各國重視的疫病之一。筆者通過ELISA方法對2020年5月至11月期間當(dāng)?shù)爻闄z的羊免疫血清進(jìn)行了小反芻獸疫抗體檢測和分析。

1 材料與方法

1.1 被檢血清

2020年4月至12月由當(dāng)?shù)爻闄z的305份羊免疫血清，其中200份來自10個規(guī)模養(yǎng)羊場，105份來自10個散養(yǎng)戶，被檢血清按規(guī)模場和散養(yǎng)戶進(jìn)行小反芻獸疫免疫抗體檢測。

1.2 檢測試劑

小反芻獸疫病毒抗體檢測ELISA試劑盒（間接法），試劑盒為無錫優(yōu)聯(lián)生物科技有限公司產(chǎn)品。

1.3 操作方法

（1）取出抗原包被板加洗滌液洗滌拍干，記錄好樣本的位置。（2）在血清稀釋板中按1∶40稀釋待檢樣品、1∶4稀釋對照血清。（3）將稀釋好的待檢血清、陽性對照、陰性對照按每孔100μL加入抗原包被板中。（4）每次試驗(yàn)均設(shè)置陽性對2孔、陰性對照2孔。（5）輕微震蕩混勻，蓋上封板膜，置37℃溫育30min。（6）甩掉板孔中的溶液，每孔加入洗滌液200μL，甩去孔內(nèi)溶液，以上步驟重復(fù)5次，最后在干凈吸水紙上拍干。（7）每孔加酶標(biāo)抗體100μL，蓋上封板膜，置37℃溫育30min。（8）甩掉板孔中的溶液，洗滌5次，洗滌方法同（6）。（9）每孔加顯色液A 50μL,再加顯色液B 50μL，室溫（20℃～25℃）閉光反應(yīng)10min。（10）每孔加終止液50μL，10min內(nèi)測定結(jié)果（對照的吸光度OD630nm）

1.4 結(jié)果判定

檢測結(jié)果判定：陽性對照孔OD630nm值均應(yīng)≥0.6，陰性對照孔OD630nm值均應(yīng)≤0.3,實(shí)驗(yàn)成立，否者實(shí)驗(yàn)不成立。小反芻獸疫免疫抗體檢測結(jié)果根據(jù)S/P=樣品OD630nm值/陽性對照OD630nm平均值≥03時被檢樣品判為陽性；當(dāng)S/P<03時被檢樣品則判為陰性。

2 結(jié)果與分析

2.1 規(guī)?；B(yǎng)羊場抗體檢測結(jié)果

對當(dāng)?shù)厮蜋z的規(guī)?；驁鲅暹M(jìn)行小反芻獸疫抗體檢測。檢測結(jié)果表明，規(guī)模羊場送檢 200份血清，陽性血清176份，合格率88%，其中有7個規(guī)模化羊場的合格率達(dá)90%以上。

表1 規(guī)?；驁鲂》雌c獸疫抗體檢測結(jié)果

2.2 散養(yǎng)戶抗體檢測結(jié)果

對抽檢的散養(yǎng)戶羊血清進(jìn)行小反芻獸疫抗體檢測。檢測結(jié)果表明，散養(yǎng)戶抽檢的105份血清，陽性血清67份，合格率64.5%，其中只有6戶的合格率達(dá)70%以上。

表2 養(yǎng)羊散養(yǎng)戶小反芻獸疫抗體檢測結(jié)果

3 小結(jié)與討論

此次試驗(yàn)采用的ELISA試劑盒，靈敏性高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性良好，使檢測結(jié)果更加可靠準(zhǔn)確，真實(shí)的反應(yīng)了當(dāng)?shù)匦》雌c獸疫免疫抗體水平高低，為動物防疫工作提供可靠的依據(jù)。

通過對送檢的10個規(guī)模場，10個散養(yǎng)戶的305份血清進(jìn)行了檢測，小反芻獸疫免疫抗體合格率為79.67%，總體達(dá)到農(nóng)業(yè)部規(guī)定的70%以上。雖然規(guī)模養(yǎng)殖場的免疫合格率為88%，但散養(yǎng)戶的免疫合格率只為64.5%，規(guī)模養(yǎng)殖場高于散養(yǎng)戶?？梢娨?guī)模養(yǎng)殖場對防疫比較重視，免疫規(guī)范，科學(xué)養(yǎng)殖。散養(yǎng)戶免疫不理想，養(yǎng)殖方式傳統(tǒng)，對防疫不夠重視。

此次血清學(xué)免疫抗體的檢測調(diào)查，準(zhǔn)確地掌握了當(dāng)?shù)馗黟B(yǎng)羊場（戶）的免疫效果，然后對疫情進(jìn)行預(yù)警預(yù)報和風(fēng)險評估，最后對免疫效果不佳的養(yǎng)羊場（戶）制定科學(xué)的補(bǔ)免程序，有效的指導(dǎo)了當(dāng)?shù)仞B(yǎng)羊場（戶）科學(xué)的養(yǎng)殖。