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      HPLC法同時測定麻黃-桂枝藥對水煎液中5種成分的含量

      2021-07-01 14:32:45王迎春王夢曹文利田宇柔康立英李軍山牛麗穎
      河北工業(yè)科技 2021年3期
      關(guān)鍵詞:高效液相色譜含量測定麻黃

      王迎春 王夢 曹文利 田宇柔 康立英 李軍山 牛麗穎

      摘要:為了進(jìn)一步完善麻黃-桂枝藥對的質(zhì)量評價方法,利用HPLC法,分別在2種波長條件下,同時測定麻黃-桂枝水煎液中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、香豆素、肉桂酸、桂皮醛5種成分的含量。采用Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色譜柱,以乙腈-0.1%磷酸溶液為流動相,梯度洗脫,流速為1.0 mL/min,柱溫為35 ℃,波長分別為210,280 nm。結(jié)果表明,鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、香豆素、肉桂酸和桂皮醛的進(jìn)樣量分別為0.292 6~2.926 0,0.205 6~2.056 0,0.016 2~0.162 0 ,0.021 8~0.218 0,0.052 6~0.526 0 μg時,均呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系(r≥0.999 1);平均加樣回收率為96.24%~104.03%(RSD<3%,n=9)。建立的檢測方法準(zhǔn)確、可靠,可為麻黃-桂枝藥對的質(zhì)量控制及配伍研究提供參考。

      關(guān)鍵詞:中藥化學(xué);高效液相色譜;波長切換;含量測定;麻黃;桂枝;藥對

      中圖分類號:R284.1文獻(xiàn)標(biāo)識碼:ADOI: 10.7535/hbgykj.2021yx03005

      Abstract:In order to further improve the quality evaluation method of Ephedra-Cinnamomi Ramulus drug pair, the contents of ephedrine hydrochloride, pseudoephedrine hydrochloride, coumarin, cinnamic acid and cinnamaldehyde in the decoction of Ephedra-Cinnamomi Ramulus were determined by HPLC at two wavelengths. The analysis was carried out on a Diamonsil C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm) by gradient elution with acetonitrile-0.1% phosphoric acid aqueous solution at a flow rate of 1.0 mL/min. The column temperature was controlled at 35 ℃.The detection wavelength was 210 nm and 280 nm respectively. The results show that it has a good linearity in the ranges of 0.292 6~2.926 0, 0.205 6~2.056 0, 0.016 2~0.162 0, 0.021 8~0.218 0 ?and 0.052 6~0.526 0 μg for ephedrine hydrochloride, pseudoephedrine hydrochloride, coumarin, cinnamic acid and cinnamaldehyde, respectively (r≥0.999 1). The average recovery rates are 96.24%~104.03% (RSD<3%, n=9). The established detection method is accurate and reliable, which can provide reference for the quality control and compatibility research of Ephedra-Cinnamomi Ramulus drug pair.

      Keywords:chemistry of Chinese material medical; HPLC; wavelength switching; content determination; Ephedra; Cinnamomi Ramulus; drug pair

      麻黃-桂枝藥對出自《傷寒論》麻黃湯,為辛溫解表的常用組合[1]。麻黃味辛、微苦,性溫,具有發(fā)汗散寒,宣肺平喘,利水消腫之功效;桂枝味辛、甘,性溫,具有發(fā)汗解肌,溫通經(jīng)脈,助陽化氣,平?jīng)_降氣之功效[2]。麻黃善行肌表衛(wèi)分,乃發(fā)汗之要藥,桂枝透營達(dá)衛(wèi),助麻黃解表散邪,麻黃、桂枝相須為用[3-5]。麻黃的化學(xué)成分主要包括生物堿類、揮發(fā)油類等[6],桂枝主要含有揮發(fā)油類、有機酸類等[7-8]。查閱文獻(xiàn),對麻黃-桂枝藥對的研究多集中在藥理活性等方面[9-12],對其化學(xué)成分研究較少。徐文杰等[13]研究不同配伍配比對麻黃-桂枝藥對有效成分含量的影響,分別采用GC-MS測定水煎液中麻黃類生物堿含量,采用HPLC測定水煎液中香豆素、桂皮醇、桂皮醛的含量。李曉如等[14]利用氣相色譜-質(zhì)譜對麻黃-桂枝的揮發(fā)油成分進(jìn)行測定。目前未見HPLC法同時測定麻黃-桂枝水煎液中麻黃類生物堿和肉桂酸、桂皮醛等主要成分的報道。本實驗建立HPLC法同時測定麻黃-桂枝藥對水煎液中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、香豆素、肉桂酸和桂皮醛5種成分的含量,為麻黃-桂枝藥對的質(zhì)量控制及配伍的研究提供參考。第3期王迎春,等:HPLC法同時測定麻黃-桂枝藥對水煎液中5種成分的含量河北工業(yè)科技第38卷

      1儀器與材料

      1.1儀器

      LC-15C高效液相色譜儀(SPD-15C型紫外檢測器,日本島津公司提供);TB-215D電子分析天平(十萬分之一)、BSA224S-CW電子分析天平(萬分之一)(德國賽多利斯集團提供);KQ-250E型超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司提供)。

      1.2材料

      鹽酸麻黃堿(批號為171241-201508,純度為99.8%)、鹽酸偽麻黃堿(批號為171237-201510,純度為99.8%)、肉桂酸(批號為110786-201604,純度為98.8%),中國食品藥品檢定研究院提供;香豆素(批號為MUST-18040901,純度為99.99%),成都曼思特生物科技有限公司提供;桂皮醛(批號為151119,純度大于等于98.0%),成都普菲德生物技術(shù)有限公司提供。甲醇、乙腈(色譜純),F(xiàn)isher公司提供;磷酸(分析純),天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠提供;水為超純水。實驗所用中藥飲片均為市售中藥飲片,3批麻黃、桂枝飲片分別購自石家莊樂仁堂(麻黃批號為19111001,桂枝批號為20022101)、神威大藥房(麻黃批號為19050101,桂枝批號為19031617)和新興大藥房(麻黃批號為2002121,桂枝批號為190902cp256),經(jīng)河北省藥品檢驗院孫寶惠(主任)鑒定,麻黃為麻黃科植物草麻黃Ephedra sinica Stapf.的干燥草質(zhì)莖,桂枝為樟科植物肉桂Cinnamomum cassia Presl.的干燥嫩枝。

      2方法與結(jié)果

      2.1麻黃-桂枝水煎液制備

      稱取麻黃飲片12.0 g,桂枝飲片8.0 g,加10倍量水,麻黃浸泡30 min,先煎煮20 min,加入桂枝繼續(xù)煎煮,煮沸后保持微沸30 min,過濾;藥渣加8倍量水,煮沸后保持微沸20 min,過濾;合并2次濾液,定容至300 mL,得麻黃-桂枝水煎液。

      2.2溶液制備

      2.2.1對照品溶液

      分別精密稱取鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、香豆素、肉桂酸、桂皮醛對照品適量,加甲醇制成質(zhì)量濃度分別為1.219,0.514,1.017,0.546,0.526 mg/mL的單一對照品儲備液。分別精密量取一定量的上述儲備液,置于同一量瓶中,加甲醇制成每1 mL含鹽酸麻黃堿146.3 μg、鹽酸偽麻黃堿102.8 μg、香豆素8.1 μg、肉桂酸10.9 μg、桂皮醛28.4 μg的混合對照品溶液。

      2.2.2供試品溶液

      精密吸取2.1項中麻黃-桂枝水煎液4 mL,置于10 mL量瓶中,加甲醇定容至刻度,超聲處理(功率250 W,頻率35 kHz)20 min,放冷,加甲醇至刻度,搖勻,0.45 μm微孔濾膜過濾,取續(xù)濾液作為供試品溶液。

      2.3色譜條件

      色譜柱:Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),流動相為乙腈(A)-0.1%磷酸(B),梯度洗脫,梯度洗脫程序見表1,檢測波長分別為210 nm(0~20 min)、280 nm(20~60 min),流速為1.0 mL/min,柱溫為35 ℃,進(jìn)樣量為10 μL?;旌蠈φ掌泛凸┰嚻啡芤旱腍PLC色譜圖如圖1所示。

      2.4方法學(xué)考察

      2.4.1線性關(guān)系考察

      分別精密吸取混合對照品溶液2,4,6,10,15,20 μL,按2.3項中色譜條件測定。以峰面積為縱坐標(biāo),進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸,回歸方程與線性范圍結(jié)果見表2。

      2.4.2精密度試驗

      精密吸取混合對照品溶液10 μL,按2.3項中色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次,計算各成分峰面積的RSD,依次為0.51%,0.63%,0.78%,0.52%,0.47%。結(jié)果表明儀器的精密度良好。

      2.4.3穩(wěn)定性試驗

      取同一份供試品溶液,分別在0,4,8,12,16,24 h按2.3項中色譜條件測定,計算各成分峰面積的RSD,依次為1.23%,0.82%,0.94%,0.59%,1.60%。結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

      2.4.4重復(fù)性試驗

      取同一批麻黃-桂枝水煎液,按2.2.2制備6份供試品溶液,按2.3中色譜條件測定,計算各成分的平均質(zhì)量濃度,分別為0.319 2,0.246 8,0.020 1,0.029 4,0.054 1 mg/mL,RSD分別為2.08%,1.75%,1.83%,1.68%,1.82%。結(jié)果表明該方法的重復(fù)性良好。

      2.4.5加樣回收試驗

      精密吸取已測得含量的麻黃-桂枝水煎液2.0 mL,平行吸取9份,分別精密加入等同于樣品中各成分含有量50%,100%,150%的各單一對照品儲備液,按照2.2.2項制備供試品溶液,按2.3項中色譜條件測定,計算加樣回收率及RSD,結(jié)果見表3。

      2.5樣品測定

      取3批次麻黃、桂枝飲片,按2.1項中制備麻黃-桂枝水煎液,按2.2.2項制備供試品溶液,按2.3項中色譜條件測定,平行3次,計算3批水煎液樣品中各成分的含量,結(jié)果見表4。

      3討論

      麻黃-桂枝為臨床上常用的藥對,是《傷寒論》中辛溫發(fā)汗的常用組合?!秱摗分猩婕奥辄S-桂枝配伍的方劑有9方,分別是麻黃湯(3∶2)、葛根湯(3∶2)、葛根加半夏湯(3∶2)、大青龍湯(3∶1)、小青龍湯(1∶1)、桂枝二越婢一湯(1∶1)、桂枝麻黃各半湯(8∶13)、桂枝二麻黃一湯(5∶13)、麻黃升麻湯(10∶1),各方中麻黃-桂枝的配伍比例以3∶2居多[15]。本實驗參考《傷寒論》中涉及麻黃-桂枝配伍方劑的煎煮方法,查閱相關(guān)文獻(xiàn)[16-17],結(jié)合《醫(yī)療機構(gòu)中藥煎藥室管理規(guī)范》要求,確定了2.1項中樣品溶液制備方法。

      本實驗分別考察了乙腈-1%醋酸、甲醇-0.1%磷酸、乙腈-0.1%磷酸3種流動相系統(tǒng),以各色譜峰的分離度和峰形為指標(biāo)進(jìn)行比較,結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙腈-0.1%磷酸作為流動相梯度洗脫時,各色譜峰的分離度及峰形較好,故選擇乙腈-0.1%磷酸為流動相。

      采用PDA檢測器在200~400 nm進(jìn)行紫外吸收光譜掃描,結(jié)果鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、香豆素、肉桂酸、桂皮醛5種化學(xué)成分的最大吸收波長分別為205,205,276,276,288 nm,由此選擇210 nm作為檢測鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的波長,選擇280 nm作為檢測香豆素、肉桂酸、桂皮醛的波長。

      4結(jié)語

      本實驗通過切換波長,建立了HPLC法同時測定麻黃-桂枝藥對水煎液中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、香豆素、肉桂酸、桂皮醛5種化學(xué)成分含量的分析方法,共測定了3批麻黃-桂枝水煎液中上述5種成分的含量。結(jié)果顯示,不同批次麻黃-桂枝水煎液中上述5種成分的含量波動較大,特別是鹽酸偽麻黃堿和桂皮醛的含量。這可能與實驗用的3批麻黃、桂枝的廠家、采收時間及存放時間不同有關(guān)。本實驗所建立的方法操作簡便,重復(fù)性好,可為麻黃-桂枝藥對的質(zhì)量控制與評價及后續(xù)研究提供參考。

      本實驗僅對市售的3批不同廠家的麻黃和桂枝飲片按3∶2配比制備的水煎液進(jìn)行了5種成分的含量測定,后續(xù)將會增加樣本數(shù)目,分別測定麻黃、桂枝單煎液和麻黃-桂枝合煎液中主要成分的含量,考察麻黃、桂枝配伍前后各成分含量變化情況。不同配伍配比的麻黃-桂枝水煎液中各成分的含量變化規(guī)律及藥效學(xué)考察有待進(jìn)一步研究。

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