帕瑞昔布鈉預(yù)給藥可減輕脂多糖誘導(dǎo)的小鼠認(rèn)知功能損傷及神經(jīng)炎癥反應(yīng)*

劉近發(fā)，庹 鵬，謝潔紅，吳亞芬，王壽平

（廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院麻醉科，廣東廣州510150）

在病原微生物感染期間，機(jī)體不僅會(huì)發(fā)熱，還可能表現(xiàn)出一系列行為變化，如活動(dòng)減少、食欲降低、社交退縮、認(rèn)知功能障礙及抑郁樣、焦慮樣的情緒變化，統(tǒng)稱“疾病行為”（sickness behavior）［1］。脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的主要免疫刺激成分，在動(dòng)物身上施用LPS會(huì)觸發(fā)細(xì)胞因子的釋放，從而激活先天性免疫系統(tǒng)，并通過多種途徑將炎癥信號(hào)傳至大腦，誘導(dǎo)中樞神經(jīng)炎癥的發(fā)生，最終導(dǎo)致疾病行為［2-3］。核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3，NLRP3）炎癥小體是一種由NLRP3、含胱天蛋白酶募集結(jié)構(gòu)域的凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain，ASC）和胱天蛋白酶1前體（procaspase-1）組成的細(xì)胞溶質(zhì)蛋白復(fù)合物，在對(duì)微生物感染和內(nèi)源性危險(xiǎn)信號(hào)的反應(yīng)中組裝和激活后，驅(qū)動(dòng)和介導(dǎo)神經(jīng)炎癥反應(yīng)，加速神經(jīng)退行性疾病的進(jìn)展［4-5］。有研究表明，非甾體抗炎藥（nonsteroidal antiinflammatory drugs，NSAIDs）可以通過抑制NLRP3炎癥小體的激活，在一定程度上減輕中樞神經(jīng)炎癥反應(yīng)，降低認(rèn)知功能障礙的嚴(yán)重程度，延緩阿爾茨海默病等神經(jīng)退行性疾病的進(jìn)展［6-7］。帕瑞昔布鈉（parecoxib sodium，PA）是NSAIDs中一種選擇性環(huán)加氧酶2（cyclooxygenase-2，COX-2）抑制劑，通過特異性抑制COX-2轉(zhuǎn)化為前列腺素（prosta‐glandins，PGs）而起到良好的抗炎、解熱和鎮(zhèn)痛作用。PA能透過血腦屏障［8］，已被證實(shí)PA在腦缺血-再灌注損傷動(dòng)物模型中發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)的作用［9］，但關(guān)于PA在炎癥性腦損傷中所介導(dǎo)的保護(hù)機(jī)制缺乏相關(guān)研究。本實(shí)驗(yàn)通過腹腔注射LPS建立小鼠疾病行為模型，預(yù)先給予PA治療，探究其對(duì)小鼠認(rèn)知功能和神經(jīng)炎癥的影響及可能的作用機(jī)制。

材料和方法

1 動(dòng)物

SPF級(jí)C57BL/6J雌性小鼠80只，10～12月齡，20～30 g，均購(gòu)自廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)為SCXK（粵）2013-0002。所有小鼠飼養(yǎng)于12h/12h明暗周期，溫度25°C，濕度30%的環(huán)境中，自由飲水進(jìn)食，使用滅菌飼料和墊料。所有的實(shí)驗(yàn)操作均經(jīng)廣州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并嚴(yán)格按照廣州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心指南進(jìn)行。

2 主要試劑

LPS（大腸桿菌來源，批號(hào)L2880）購(gòu)自Sigma；PA購(gòu)自輝瑞制藥有限公司；白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-6、IL-18、腫瘤壞死因子α（tumor ne‐crosis factor-α，TNF-α）和前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）ELISA試劑盒均購(gòu)自安迪華泰（中國(guó)）生物科技有限公司；兔抗離子鈣接頭蛋白分子1（ionized calcium-binding adaptor molecule-1，Iba-1）抗體（貨號(hào)ab178847）、兔抗膠質(zhì)細(xì)胞原纖維酸性蛋白（glial fi‐brillary acid protein，GFAP）抗體（貨號(hào)ab207165）、兔抗COX-2抗體（貨號(hào)ab15191）和兔抗誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）抗體（貨號(hào)ab15323）購(gòu)自Abcam公司；兔抗NLRP3多克隆抗體（貨號(hào)A12694）、兔抗ASC多克隆抗體（貨號(hào)A11433）和兔抗caspase-1多克隆抗體（貨號(hào)A0964）購(gòu)自ABclonal；Ⅱ抗Alexa Fluor 488（驢抗兔）購(gòu)自Molecular Probes；BCA蛋白定量試劑盒和ECL化學(xué)發(fā)光液購(gòu)自江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司。

3 主要方法

3.1 動(dòng)物分組和給藥 采用隨機(jī)數(shù)字法將80只C57BL/6J小鼠分為4組：空白對(duì)照（control，CON）組、PA組、LPS組和PA預(yù)處理組（P+L組），每組20只。LPS組和P+L組參照文獻(xiàn)［10］腹腔注射LPS（250μg·kg-1·d-1），持續(xù)7 d；P+L組每天在注射LPS前1 h參照文獻(xiàn)［11］按10 mg/kg劑量腹腔注射PA；CON組和PA組則分別腹腔注射等量的生理鹽水和PA。

3.2 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) 包括定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)。Morris水迷宮是一個(gè)直徑120 cm，高100 cm，內(nèi)壁為黑色的圓形水池，直徑10 cm的圓形黑色平臺(tái)置于水面下1 cm，水溫控制在（22±1）℃。小鼠前5 d先進(jìn)行定位航行實(shí)驗(yàn)，將小鼠面向池壁分別從4個(gè)象限放入水中，記錄其尋找到隱藏在水面下平臺(tái)的時(shí)間（逃避潛伏期，escape latency）。如果時(shí)間超過60 s，則引導(dǎo)引導(dǎo)小鼠到平臺(tái)上，讓其停留10 s。每只小鼠結(jié)束實(shí)驗(yàn)后擦干，在暖風(fēng)下烘干5 min，放回鼠籠。小鼠于第6天進(jìn)行空間探索實(shí)驗(yàn)，平臺(tái)所在象限為目標(biāo)象限，把平臺(tái)撤離，將小鼠由目標(biāo)象限的對(duì)側(cè)放入水中，記錄其逃避潛伏期、60 s內(nèi)在目標(biāo)象限的停留時(shí)間及穿越平臺(tái)的次數(shù)。

3.3 ELISA檢測(cè)血液和海馬區(qū)炎癥因子水平 每組小鼠于實(shí)驗(yàn)第7天水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后選取8只，按20 mL/kg的麻醉劑量腹腔注射3%三溴乙醇，剪開胸腔暴露心臟，經(jīng)左心室采血收集血液1mL于EP管中，室溫放置2 h后以3 000 r/min離心10 min，取上清液。將小鼠迅速斷頭取腦，冰面上剝離海馬組織并稱重，按重量體積比（1∶9）向組織中加入預(yù)冷PBS制備組織勻漿，在4℃、12 000 r/min離心10 min，取上清液。嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書提供的步驟分別檢測(cè)各樣本血液和海馬區(qū)IL-1β、IL-6、IL-18、TNFα和PGE2的水平。

3.4 肺組織和海馬組織的形態(tài)學(xué)觀察 第7天水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后每組小鼠選取3只，麻醉后用預(yù)冷的生理鹽水和4%多聚甲醛經(jīng)左心室依次灌注5 min至流出液澄清，取肺組織和大腦海馬組織，經(jīng)Bouin氏液固定，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，制成5μm切片。切片經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度酒精復(fù)水，行HE染色，蘇木精染細(xì)胞核，伊紅染細(xì)胞質(zhì)，最后脫水封片，在顯微鏡下觀察肺組織和海馬的形態(tài)改變。

3.5 免疫熒光染色法 第7天水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后每組小鼠選取4只，按上述方法取大腦組織，浸泡在PFA中固定過夜，行蔗糖梯度脫水后連續(xù)冰凍切片，切片厚度為20μm，加入5%BSA于室溫下封閉1h，加入已稀釋至濃度1∶1 000的Ⅰ抗，放入4℃冷室中孵育過夜。次日棄去Ⅰ抗，PBST清洗1次、PBS清洗2次后加入相應(yīng)的Ⅱ抗，于室溫下孵育2 h，再次用PBST清洗1次、PBS清洗2次，用含DAPI的熒光封片劑進(jìn)行封片，最后在蔡司熒光顯微鏡下觀察并拍照。

3.6 Western blot實(shí)驗(yàn) 取每組剩余的5只小鼠，按上述方法提取海馬組織，稱重，加入蛋白裂解液勻漿，靜置30 min后在4℃、15 000 r/min離心1 h，取上清液，用BCA法進(jìn)行蛋白定量，取上樣量為20μg，進(jìn)行SDS-PAGE，將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，加入5%脫脂奶粉TBS溶液室溫封閉2 h后加入Ⅰ抗（除GADPH抗體以1∶8 000稀釋外，其余抗體以1∶1 000稀釋），4℃孵育過夜。次日用TBST溶液洗膜10 min×3次，將膜浸入辣根過氧化物酶標(biāo)記的Ⅱ抗溶液（1∶5 000）中室溫震蕩孵育2 h，TBST溶液洗膜10 min×3次。隨后ECL化學(xué)發(fā)光法顯色，在熒光凝膠成像系統(tǒng)中顯影，攝片，再用ImageJ軟件分析灰度值。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示。多組間比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），組間兩兩比較采用Bonferroni校正的t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果

在定位航行實(shí)驗(yàn)中，第1～3天各組小鼠的逃避潛伏期無顯著差異，在第4～5天的訓(xùn)練中，LPS組小鼠到達(dá)平臺(tái)的逃避潛伏期顯著長(zhǎng)于CON組（P<0.05），而PA治療改善了這一情況，P+L組與LPS組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見圖1。

Figure 1.The spatial learning ability of mice in the place navi‐gation test of Morris water maze.Mean±SD.n=20.*P<0.05 vs CONgroup；#P<0.05 vs P+L group.圖1 各組小鼠在Morris水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)中的空間學(xué)習(xí)能力

在第6天的空間探索實(shí)驗(yàn)中，撤去平臺(tái)，各組小鼠之間游泳速度的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性；與CON組相比，LPS組小鼠的逃避潛伏期顯著延長(zhǎng)（P<0.01），60 s內(nèi)目標(biāo)象限停留時(shí)間及穿越平臺(tái)次數(shù)顯著減少（P<0.01）；與LPS組相比，P+L組小鼠的逃避潛伏期顯著縮短（P<0.05），60 s內(nèi)目標(biāo)象限停留時(shí)間及穿越平臺(tái)次數(shù)顯著增加（P<0.05），見表1。

表1 各組小鼠在Morris水迷宮空間探索實(shí)驗(yàn)中的結(jié)果Table 1.The results of each group in the spatial probe test of Morris water maze（Mean±SD.n=20）

2 小 鼠 血 清及 海馬 組織 中IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α和PGE2的檢測(cè)結(jié)果

ELISA結(jié)果顯示，LPS組小鼠血清及海馬區(qū)IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α和PGE2的含量明顯高于CON組（P<0.01），而與LPS組相比，P+L組小鼠血清及海馬區(qū)IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α和PGE2的含量顯著減少（P<0.01），結(jié)果見表2、3。

表2 各組小鼠血清炎癥因子的表達(dá)水平Table 2.The serumlevels of inflammatory factors in the mice of each group（ng/L.Mean±SD.n=8）

表3 各組小鼠海馬區(qū)炎癥因子的表達(dá)水平Table 3.Expression levels of inflammatory factors in the mouse hippocampus of each group（ng/L.Mean±SD.n=8）

3 小鼠肺組織和海馬組織形態(tài)學(xué)觀察

如圖2所示，各組小鼠肺組織整體結(jié)構(gòu)正常，肺泡結(jié)構(gòu)清晰，肺泡壁無明顯增厚，未見明顯的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，提示小劑量腹腔注射LPS并未引起肺部的明顯炎癥。如圖3所示，與對(duì)照組相比，PA組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài)正常，結(jié)構(gòu)完整，無明顯病理性損傷，提示PA對(duì)海馬神經(jīng)元本身無損傷作用；而LPS組神經(jīng)元細(xì)胞間結(jié)構(gòu)松散，排列紊亂，胞體縮小、胞核固縮、細(xì)胞深染，出現(xiàn)大量變性神經(jīng)元；與LPS組相比，P+L組神經(jīng)元形態(tài)較完整，排列較規(guī)整緊密，著色均勻，胞核固縮濃染減輕，損傷較輕。

Figure 2.Representative photographs of HEstaining for lung tissuesin different groups（×200）.圖2 各組小鼠肺組織HE染色的病理觀察

Figure 3.Representative photographs of HEstaining for hippocampus CA1 region in different groups.圖3 各組小鼠海馬組織CA1區(qū)HE染色的病理觀察

4 小鼠海馬組織免疫熒光染色結(jié)果

如圖4、5所示，與CON組相比，經(jīng)LPS處理小鼠海馬區(qū)Iba1（小膠質(zhì)細(xì)胞特異性標(biāo)志物）陽(yáng)性細(xì)胞明顯增多（P<0.05），GFAP（星形膠質(zhì)細(xì)胞特異性標(biāo)志物）陽(yáng)性細(xì)胞分布密集（P<0.05），提示在炎癥刺激條件下海馬活化的小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞增多；而與LPS組相比，P+L組小鼠Iba1陽(yáng)性細(xì)胞和GFAP陽(yáng)性細(xì)胞均顯著減少（P<0.05），提示PA通過抑制LPS對(duì)海馬小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活，從而抑制中樞炎癥反應(yīng)，減輕小鼠的認(rèn)知功能障礙。

Figure 4.Immunofluorescence staining of Iba-1 in the mouse hippocampus（×20）.Mean±SD.n=4.*P<0.05 vs CON group；#P<0.05 vs LPSgroup.圖4 各組小鼠海馬組織中Iba-1免疫熒光染色情況

5 Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

如圖6所示，與CON組相比，LPS組小鼠海馬區(qū)COX-2、iNOS、NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白表達(dá)量顯著上調(diào)（P<0.01）；與LPS組相比，P+L組小鼠海馬區(qū)COX-2、iNOS、NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白表達(dá)量顯著下降（P<0.05），提示PA預(yù)給藥能降低小鼠海馬區(qū)炎癥相關(guān)蛋白的表達(dá)，從而抑制中樞炎癥。

討 論

Figure 5.Immunofluorescence staining of GFAP in the mouse hippocampus（×20）.Mean±SD.n=4.*P<0.05 vs CON group；#P<0.05 vs LPSgroup.圖5 各組小鼠海馬組織中GFAP免疫熒光染色情況

Figure 6.Western blot analysis of inflammatory proteins COX-2，iNOS，NLRP3，ASC and caspase-1 in the mouse hippocampus.Mean±SD.n=5.**P<0.01 vs CONgroup；#P<0.05，##P<0.01 vs LPSgroup.圖6 小鼠海馬組織中COX-2，iNOS，NLRP3，ASC和caspase-1的蛋白表達(dá)

目前，許多神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機(jī)制尚不明確，并且缺乏對(duì)這些疾病的有效治療。因此，建立合適的動(dòng)物模型對(duì)于研究神經(jīng)炎癥相關(guān)的認(rèn)知障礙和神經(jīng)退行性疾病非常重要。作為革蘭氏陰性菌的主要成分，LPS被廣泛用于研究全身內(nèi)毒素血癥和炎癥反應(yīng)對(duì)組織的影響，施用LPS會(huì)導(dǎo)致血腦屏障的損傷和神經(jīng)炎癥的發(fā)生［12］。本研究選擇外周少量多次注射LPS誘導(dǎo)小鼠中樞神經(jīng)炎癥，通過觀察肺組織病理切片，排除了肺部明顯炎癥，避免了大劑量LPS所造成的肺損傷導(dǎo)致的低氧血癥對(duì)認(rèn)知功能的干擾。

小鼠全身注射LPS會(huì)導(dǎo)致認(rèn)知功能缺陷，包括空間學(xué)習(xí)和記憶障礙［13］。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)是目前用來評(píng)價(jià)小鼠空間學(xué)習(xí)記憶功能最為經(jīng)典和廣泛的行為學(xué)測(cè)試方法。有研究表明使用NASIDs治療可減輕小鼠的神經(jīng)炎癥從而改善認(rèn)知功能［14］。水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，LPS組小鼠的逃避潛伏期顯著延長(zhǎng)，目標(biāo)象限停留時(shí)間及穿越平臺(tái)次數(shù)顯著減少，提示腹腔注射LPS使小鼠海馬依賴性的學(xué)習(xí)與記憶功能受損。而經(jīng)PA干預(yù)后改善了小鼠的學(xué)習(xí)記憶功能，降低了認(rèn)知功能障礙的程度。

小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中主要的先天免疫細(xì)胞，在免疫監(jiān)視、維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)、清除受損神經(jīng)元和碎片以及組織修復(fù)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。在病理狀態(tài)下，小膠質(zhì)細(xì)胞的異常激活可通過釋放神經(jīng)毒性物質(zhì)引發(fā)過度的神經(jīng)炎癥反應(yīng)，從而導(dǎo)致神經(jīng)元損傷和認(rèn)知功能障礙［15］。LPS與小膠質(zhì)細(xì)胞膜表面的Toll樣受體4結(jié)合，相互作用激活核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）和絲裂原活化蛋白激酶信號(hào)通路，從而觸進(jìn)促炎細(xì)胞因子的表達(dá)和釋放，包括IL-1β、IL-6和TNF-α［16］?；罨男∧z質(zhì)細(xì)胞還可以通過分泌IL-1β、TNF和C1q誘導(dǎo)反應(yīng)型星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化，兩者相互協(xié)作，共同發(fā)揮促炎作用，從而產(chǎn)生瀑布式炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致疾病行為的發(fā)生［17］。研究表明，COX-2的表達(dá)增加參與調(diào)控神經(jīng)炎癥性疾病的發(fā)生發(fā)展過程，在機(jī)體感染的情況下COX-2過表達(dá)催化PGs特別是PGE2產(chǎn)生增加的過程中，一方面刺激膠質(zhì)細(xì)胞釋放更多的細(xì)胞毒性因子加重全身炎癥反應(yīng)，另一方面產(chǎn)生大量的氧自由基，通過介導(dǎo)興奮神經(jīng)毒性作用和氧化應(yīng)激機(jī)制造成神經(jīng)元的損傷［18］。NOS是合成一氧化氮（ni‐tric oxide，NO）的關(guān)鍵酶，其中iNOS亞型在正常情況下極少表達(dá)，但在炎癥損傷的刺激下被誘導(dǎo)合成增加，催化產(chǎn)生大量NO，導(dǎo)致細(xì)胞死亡和組織損傷，進(jìn)而加重神經(jīng)炎癥反應(yīng)。通過本研究，我們發(fā)現(xiàn)在LPS誘導(dǎo)的炎癥模型小鼠中，海馬區(qū)活化的小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞明顯增多，COX-2、PGE2和iNOS等促炎介質(zhì)的蛋白表達(dá)量顯著增多，中樞和外周的IL-1β、IL-6和TNF-α炎癥因子水平明顯增加，HE染色顯示海馬神經(jīng)元細(xì)胞出現(xiàn)過度變性壞死的病理?yè)p傷；而經(jīng)PA預(yù)處理后，小鼠的神經(jīng)炎癥得到了改善，海馬區(qū)活化的膠質(zhì)細(xì)胞減少，炎癥因子和促炎介質(zhì)的表達(dá)水平降低，海馬體的病理?yè)p傷減輕，表明PA在LPS誘導(dǎo)的中樞神經(jīng)炎癥中發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。

炎癥小體是一種主要位于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的多蛋白復(fù)合物，已在神經(jīng)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)［19］。其中，NLRP3炎癥小體是目前被研究最為廣泛和最具特征的炎癥小體，已被證實(shí)在阿爾茲海默病、帕金森病、膿毒癥腦病等神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起關(guān)鍵作用［20-22］。NLRP3炎癥小體是由NLRP3、ASC和procaspase-1三部分組成。由病原相關(guān)分子模式（pathogen-associated molecular pattern，PAMP）或微生物相關(guān)分子模式（microbe-as‐sociated molecular pattern，MAMP）刺激介導(dǎo)的信號(hào)促進(jìn)NLRP3寡聚化并激活，NLRP3蛋白激活后與接頭蛋白ASC結(jié)合并募集procaspase-1組裝形成NLRP3炎癥小體，隨后發(fā)生剪切形成有活性的cas‐pase-1，后者切割不成熟的IL-1β前體（pro-IL-1β）和IL-18前體（pro-IL-18），使其活化成IL-1β和IL-18并分泌到胞外，啟動(dòng)多個(gè)信號(hào)通路并驅(qū)動(dòng)炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)［23］。我們發(fā)現(xiàn)經(jīng)LPS組小鼠海馬組織中NLRP3炎癥小體各組成蛋白的表達(dá)水平明顯升高，中樞和外周炎癥因子IL-1β和IL-18顯著增多，提示LPS誘導(dǎo)了NLRP3炎癥小體的激活。有研究報(bào)道COX-2可以通過增加NF-κB的激活和受損線粒體活性氧簇的產(chǎn)生，介導(dǎo)NLRP3炎癥小體的激活增加，而抑制COX-2/NF-κB/NLRP3信號(hào)通路對(duì)急性肺損傷小鼠起保護(hù)作用［24-25］。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)PA預(yù)給藥后海馬區(qū)NLRP3炎癥小體激活減少，炎癥因子IL-1β和IL-18水平降低，疾病行為樣癥狀減輕，學(xué)習(xí)記憶能力改善。

綜上所述，PA預(yù)先給藥通過抑制小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化及炎癥因子和促炎介質(zhì)的釋放，減少NLPR3炎癥小體的激活，減輕海馬組織的病理?yè)p傷，最終抑制LPS誘導(dǎo)的認(rèn)知功能損傷及神經(jīng)炎癥反應(yīng)，在體內(nèi)發(fā)揮抗炎和神經(jīng)保護(hù)作用。