劉連為，隋宥珍，蔣日進(jìn)，徐開(kāi)達(dá)，朱文斌，周永東

（浙江海洋大學(xué)海洋與漁業(yè)研究所，浙江省海洋水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部重點(diǎn)漁場(chǎng)漁業(yè)資源科學(xué)觀測(cè)實(shí)驗(yàn)站，浙江省海洋漁業(yè)資源可持續(xù)利用技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江舟山 316021）

舟山漁場(chǎng)自然環(huán)境優(yōu)良，魚(yú)類物種豐富，是我國(guó)重要的天然近海漁場(chǎng)。江河徑流的注入及沿岸流與臺(tái)灣暖流的交匯帶來(lái)豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，使該海域水質(zhì)肥沃、餌料生物豐富，成為多種水生生物的復(fù)合產(chǎn)卵場(chǎng)與育幼場(chǎng)。分布于產(chǎn)卵場(chǎng)、育幼場(chǎng)的魚(yú)卵、仔稚魚(yú)作為魚(yú)類資源的補(bǔ)充群體，是魚(yú)類資源可持續(xù)發(fā)展的根本，其種類組成和數(shù)量分布是評(píng)估該海域親魚(yú)資源量、魚(yú)類資源補(bǔ)充量最直接有效的數(shù)據(jù)資料。近幾十年來(lái)，隨著海洋捕撈強(qiáng)度的增大及產(chǎn)卵場(chǎng)、育幼場(chǎng)生態(tài)環(huán)境的破壞，舟山漁場(chǎng)重要經(jīng)濟(jì)魚(yú)類資源已經(jīng)嚴(yán)重衰退，幼魚(yú)資源破壞嚴(yán)重[1]。因此，開(kāi)展產(chǎn)卵場(chǎng)、育幼場(chǎng)保護(hù)與重建、產(chǎn)卵親體及幼魚(yú)資源保護(hù)與恢復(fù)工作迫在眉睫，這也是舟山漁場(chǎng)修復(fù)振興的重要舉措，而摸清該海域魚(yú)卵、仔稚魚(yú)的種類組成及其數(shù)量分布是保障其順利實(shí)施的研究基礎(chǔ)。

目前，舟山漁場(chǎng)局部海域魚(yú)卵、仔稚魚(yú)群落結(jié)構(gòu)特征已有報(bào)道[2-5]，而魚(yú)卵、仔稚魚(yú)大范圍面上調(diào)查距今已有十多年[6]。為全面掌握舟山漁場(chǎng)魚(yú)卵、仔稚魚(yú)種類組成與數(shù)量分布現(xiàn)狀，本研究通過(guò)魚(yú)類產(chǎn)卵高峰期（春季）連續(xù)采集魚(yú)卵、仔稚魚(yú)樣本，采用DNA條形碼（DNA barcode）技術(shù)[7-9]，結(jié)合形態(tài)學(xué)方法及歷史調(diào)查資料對(duì)其鑒定，從而更加科學(xué)地評(píng)估該海域產(chǎn)卵親體與幼魚(yú)的現(xiàn)有資源量，為舟山漁場(chǎng)修復(fù)振興提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 調(diào)查站位及樣品采集

在舟山漁場(chǎng)4 個(gè)典型海域各設(shè)置3 個(gè)調(diào)查站位（表1、圖1），于2017-2019 年4-5 月進(jìn)行魚(yú)卵、仔稚魚(yú)調(diào)查，樣品采集及固定保存根據(jù)《海洋生物生態(tài)調(diào)查技術(shù)規(guī)程》進(jìn)行。采用口徑80 cm、長(zhǎng)280 cm 的大型浮游生物網(wǎng)，在海域表層水平拖網(wǎng)10 min，拖速2 kn，網(wǎng)口系流量計(jì)以計(jì)算濾水量。

圖1 調(diào)查站位圖Fig.1 Sampling station of ichthyoplankton

表1 調(diào)查站位經(jīng)緯度Tab.1 Longitude and latitude of sampling station

1.2 樣品鑒定

樣品帶回實(shí)驗(yàn)室后分揀出魚(yú)卵、仔稚魚(yú)，在解剖鏡下根據(jù)魚(yú)卵、仔稚魚(yú)的形態(tài)特征進(jìn)行初步鑒定和計(jì)數(shù)，種類盡可能鑒定到最低分類等級(jí)。仔稚魚(yú)參考《日本產(chǎn)稚魚(yú)圖鑒》[10]進(jìn)行鑒定，魚(yú)卵及不確定種類的仔稚魚(yú)采用DNA 條形碼技術(shù)鑒定，PCR 引物為國(guó)際上通用的線粒體DNA CO I 基因片段擴(kuò)增引物，COIF：5'-TCAACCAACCACAAAGACATTGGCAC-3'；COIR：5'-TAGACTTCTGGGTGGCCAAAGAATCA-3'[7]。PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系參照陳永久等[11]，退火溫度為59 ℃，以ddH2O 代替模板DNA 做陰性對(duì)照。PCR 產(chǎn)物純化后連接到載體，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中，采用PCR 擴(kuò)增法篩選陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序。通過(guò)BioEdit 軟件對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行人工校對(duì)后與NCBI 數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，結(jié)合形態(tài)學(xué)方法及歷史調(diào)查資料確定種類。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

（1）相對(duì)重要性指數(shù)

魚(yú)卵與仔稚魚(yú)的優(yōu)勢(shì)種根據(jù)各個(gè)種的相對(duì)重要性指數(shù)IRI（index of relative importance）來(lái)確定：IRI=N%×F%×10 000。式中，N%為某一種魚(yú)卵與仔稚魚(yú)豐度占總豐度的百分比；F%為某一種魚(yú)卵與仔稚魚(yú)出現(xiàn)的站位數(shù)占總調(diào)查站位的百分比。定義IRI＞1 000 為優(yōu)勢(shì)種，100＜IRI＜1 000 為重要種。

（2）群落多樣性分析

采用馬格利夫多樣性指數(shù)（margalef diversity index，D）、香農(nóng)-維納多樣性指數(shù)（Shannon-Wiener Index，H′）、皮諾均勻度指數(shù)（pielou′s evenness index，J′）計(jì)算魚(yú)卵、仔稚魚(yú)群落多樣性，計(jì)算公式為：

式中：

S——為魚(yú)卵、仔稚魚(yú)種類總數(shù)；

N——為魚(yú)卵、仔稚魚(yú)總個(gè)體數(shù)；

ni——為第i 種魚(yú)卵、仔稚魚(yú)的個(gè)體數(shù)占群落中總個(gè)體數(shù)的比例。

2 結(jié)果

2.1 魚(yú)卵、仔稚魚(yú)種類組成

2017-2019 年4-5 月共采集魚(yú)卵4 144 粒，仔稚魚(yú)785 尾。共鑒定出魚(yú)卵、仔稚魚(yú)40 種，隸屬于10 目27 科，有1 種鑒定到目，1 種鑒定到科，9 種鑒定到屬（表2、表3）。其中，鱸形目種類最多，為12 科19 種，占47.50%；鰈形目次之，為3 科5 種，占12.50%；鯡形目為3 科4 種，鲉形目為2 科4 種，均占10.00%；鰻鱺目為2 科2 種，鯔形目為1 科2 種，均占5.00%；燈籠魚(yú)目、仙女魚(yú)目、鲀形目與鲀形目均為1 科1 種。鑒定出魚(yú)卵25 種，隸屬于7 目19 科，有5 種鑒定到屬；鑒定出仔稚魚(yú)21 種，隸屬于8 目16 科，有1 種鑒定到目，1 種鑒定到科，3 種鑒定到屬。

表2 2017-2019 年4-5 月舟山漁場(chǎng)魚(yú)卵、仔稚魚(yú)采集數(shù)量及鑒定種類數(shù)Tab.2 Abundance and species number of ichthyoplankton in Zhoushan fishing ground from April to May among 2017 and 2019

表3 2017-2019 年4-5 月舟山漁場(chǎng)魚(yú)卵、仔稚魚(yú)的種類組成Tab.3 Species composition of ichthyoplankton in Zhoushan fishing ground from April to May among 2017 and 2019

續(xù)表

2017 年4 月，共采集魚(yú)卵39 粒，仔稚魚(yú)473 尾。鑒定出魚(yú)卵、仔稚魚(yú)14 種，隸屬于6 目12 科，有2 種鑒定到屬。其中，魚(yú)卵6 種，隸屬于5 目6 科，2 種鑒定到屬；仔稚魚(yú)9 種，隸屬于5 目8 科。5 月，共采集魚(yú)卵355 粒、仔稚魚(yú)27 尾。鑒定出魚(yú)卵、仔稚魚(yú)13 種，隸屬于7 目12 科，有3 種鑒定到屬。其中，魚(yú)卵10 種，隸屬于6 目10 科，2 種鑒定到屬；仔稚魚(yú)3 種，隸屬于3 目3 科，有1 種鑒定到屬。

2018 年4 月，共采集魚(yú)卵12 粒、仔稚魚(yú)67 尾。鑒定出魚(yú)卵、仔稚魚(yú)12 種，隸屬于5 目11 科。其中，魚(yú)卵4 種，隸屬于3 目4 科；仔稚魚(yú)8 種，隸屬于5 目8 科。5 月，共采集魚(yú)卵1 641 粒、仔稚魚(yú)41 尾。鑒定出魚(yú)卵、仔稚魚(yú)18 種，隸屬于7 目15 科，有1 種鑒定到科，2 種鑒定到屬。其中，魚(yú)卵12 種，隸屬于5 目11科，有2 種鑒定到屬；鑒定出仔稚魚(yú)8 種，隸屬于5 目8 科，有1 種鑒定到科。

2019 年4 月，共采集魚(yú)卵38 粒、仔稚魚(yú)46 尾。鑒定出魚(yú)卵、仔稚魚(yú)16 種，隸屬于6 目12 科。其中，魚(yú)卵7 種，隸屬于4 目6 科；仔稚魚(yú)9 種，隸屬于4 目6 科。5 月，共采集魚(yú)卵2 059 粒、仔稚魚(yú)131 尾。鑒定出魚(yú)卵、仔稚魚(yú)22 種，隸屬于9 目16 科，有1 種鑒定到目，5 種鑒定到屬。其中，魚(yú)卵16 種，隸屬于7 目13科，3 種鑒定到屬；仔稚魚(yú)9 種，隸屬于6 目7 科，有1 種鑒定到目，2 種鑒定到屬。

2.2 魚(yú)卵、仔稚魚(yú)豐度時(shí)空分布

2017 年4 月，各站位魚(yú)卵豐度為0～3.15 ind·100-1·m-3，最高值出現(xiàn)在D3 站位，平均值為0.84 ind·100-1·m-3。各站位仔稚魚(yú)豐度為0.16～96.18 ind·100-1·m-3，最高值出現(xiàn)在C3 站位，平均值為9.04 ind·100-1·m-3。5月，各站位魚(yú)卵豐度為2.19～42.10 ind·100-1·m-3，最高值出現(xiàn)在C2 站位，平均值為11.68 ind·100-1·m-3。各站位仔稚魚(yú)豐度為0～4.13 ind·100-1·m-3，最高值出現(xiàn)在D2 站位，平均值為0.76 ind·100-1·m-3。

2018 年4 月，各站位魚(yú)卵豐度為0～0.79 ind·100-1·m-3，最高值出現(xiàn)在D3 站位，平均值為0.23 ind·100-1·m-3。各站位仔稚魚(yú)豐度為0～4.55 ind·100-1·m-3，最高值出現(xiàn)在C3 站位，平均值為1.02 ind·100-1·m-3。5月，各站位魚(yú)卵豐度為0～166.56 ind·100-1·m-3，最高值出現(xiàn)在B2 站位，平均值為28.39 ind·100-1·m-3。各站位仔稚魚(yú)豐度為0～4.37 ind·100-1·m-3，最高值出現(xiàn)在A1 站位，平均值為0.86 ind·100-1·m-3。

2019 年4 月，各站位魚(yú)卵豐度為0～4.46 ind·100-1·m-3，最高值出現(xiàn)在C1 站位，平均值為1.20 ind·100-1·m-3。各站位仔稚魚(yú)豐度為0～3.89 ind·100-1·m-3，最高值出現(xiàn)在A3 站位，平均值為1.06 ind·100-1·m-3。5月，各站位魚(yú)卵豐度為2.29～223.71 ind·100-1·m-3，最高值出現(xiàn)在C2 站位，平均值為47.85 ind·100-1·m-3。各站位仔稚魚(yú)豐度為0～12.08 ind·100-1·m-3，最高值出現(xiàn)在A3 站位，平均值為3.02 ind·100-1·m-3。

2017-2019 年4 月，魚(yú)卵、仔稚魚(yú)平均豐度差異均不顯著，呈現(xiàn)先降低而后略有回升。2017-2019 年5月，魚(yú)卵、仔稚魚(yú)平均豐度差異均不顯著，呈現(xiàn)逐年遞增趨勢(shì)。2017-2019 年4 月魚(yú)卵平均豐度明顯低于5月，差異顯著（P＜0.01），仔稚魚(yú)平均豐度與5 月相比差異不顯著（P＞0.05）。

表4 2017-2019 年4-5 月舟山漁場(chǎng)魚(yú)卵、仔稚魚(yú)平均豐度（ind·100-1·m-3）Tab.4 Average density of ichthyoplankton in Zhoushan fishing ground from April to May among 2017 and 2019

2.3 魚(yú)卵與仔稚魚(yú)優(yōu)勢(shì)種及其年度變化

2017-2019 年4-5 月魚(yú)卵與仔稚魚(yú)優(yōu)勢(shì)種和重要種組成見(jiàn)表5。2017 年4 月，魚(yú)卵與仔稚魚(yú)優(yōu)勢(shì)種為小黃魚(yú)Larimichthy spolyactis，重要種為六絲鈍尾蝦虎魚(yú)Amblychaeturichthys hexanema。5 月，魚(yú)卵與仔稚魚(yú)優(yōu)勢(shì)種為龍頭魚(yú)Harpodon nehereus，重要種為黃姑魚(yú)Nibea albiflora和鳀Engraulis japonicus；2018 年4月，魚(yú)卵與仔稚魚(yú)優(yōu)勢(shì)種為六絲鈍尾蝦虎魚(yú)，重要種為棱鮻Liza carinatus。5 月，魚(yú)卵與仔稚魚(yú)優(yōu)勢(shì)種為舌鰨屬未定種，重要種為黃姑魚(yú)和短吻紅舌鰨Cynoglossus joyneri；2019 年4 月，魚(yú)卵與仔稚魚(yú)重要種為六絲鈍尾蝦虎魚(yú)和鮻L.haematocheilus。5 月，魚(yú)卵與仔稚魚(yú)優(yōu)勢(shì)種為鳀和短吻紅舌鰨，重要種為黃姑魚(yú)和龍頭魚(yú)。六絲鈍尾蝦虎魚(yú)為2017-2019 年4 月共有重要種（優(yōu)勢(shì)種），黃姑魚(yú)為2017-2019 年5 月共有重要種，龍頭魚(yú)和鳀為2017 年與2019 年5 月共有重要種（優(yōu)勢(shì)種）。

表5 2017-2019 年4-5 月舟山漁場(chǎng)魚(yú)卵與仔稚魚(yú)優(yōu)勢(shì)種和重要種組成（IRI）Tab.5 Dominant and important species composition of ichthyoplankton in Zhoushan fishing ground from April to May among 2017 and 2019

2.4 魚(yú)卵與仔稚魚(yú)群落多樣性

2017-2019 年4-5 月魚(yú)卵與仔稚魚(yú)群落多樣性指數(shù)見(jiàn)表6。2017-2019 年4 月，物種豐富度指數(shù)、多樣性指數(shù)、均勻度指數(shù)呈逐年增長(zhǎng)趨勢(shì)。2017-2019 年5 月，物種豐富度指數(shù)呈逐年增長(zhǎng)趨勢(shì)，多樣性指數(shù)與均勻度指數(shù)呈先降低再回升趨勢(shì)。

表6 舟山漁場(chǎng)魚(yú)卵與仔稚魚(yú)群落多樣性指數(shù)Tab.6 Community diversity index of ichthyoplankton in Zhoushan fishing ground

3 討論

從2017-2019 年4-5 月優(yōu)勢(shì)種分布情況來(lái)看，春季舟山漁場(chǎng)魚(yú)卵與仔稚魚(yú)優(yōu)勢(shì)種主要為小黃魚(yú)、六絲鈍尾蝦虎魚(yú)、鳀、龍頭魚(yú)、舌鰨屬未定種及短吻紅舌鰨。通過(guò)對(duì)舟山漁場(chǎng)及其鄰近海域漁業(yè)資源調(diào)查，結(jié)果表明，與20 年代60 年代初相比，該海域魚(yú)類種類組成發(fā)生了很大的變化。春季，該海域魚(yú)類優(yōu)勢(shì)種為小黃魚(yú)、六絲鈍尾蝦虎魚(yú)、鳀、龍頭魚(yú)、七星底燈魚(yú)Benthosema pterotum 等種類[12-14]，這與本研究中魚(yú)卵與仔稚魚(yú)優(yōu)勢(shì)種基本一致。七星底燈魚(yú)魚(yú)卵、仔稚魚(yú)在東海分布水深主要為20～200 m，其中以40～80 m 較多[15]，本研究于2019 年5 月在表層調(diào)查水域僅采集到3 粒魚(yú)卵。

周永東等[6]于2008 年4-6 月對(duì)浙江中北部沿岸魚(yú)卵和仔稚魚(yú)進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果表明，春季舟山漁場(chǎng)魚(yú)卵主要種類有小黃魚(yú)、銀鯧Pampus argenteus、黃姑魚(yú)，仔稚魚(yú)主要種類有鯔科未定種和蝦虎魚(yú)科未定種，但小黃魚(yú)、銀鯧的魚(yú)卵數(shù)量百分比較1960 年同期下降明顯，而本研究中銀鯧的魚(yú)卵數(shù)量百分比（1.00%）較2008 年同期亦下降明顯。調(diào)查海域所在的4 個(gè)典型海域均為銀鯧的產(chǎn)卵場(chǎng)，因此，舟山漁場(chǎng)銀鯧資源尤其產(chǎn)卵親體亟待加強(qiáng)保護(hù)。樊紫薇等[2]對(duì)岱衢洋產(chǎn)卵場(chǎng)的魚(yú)卵、仔稚魚(yú)群落結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究，認(rèn)為春季（2010-2011 年）該海域魚(yú)卵優(yōu)勢(shì)種為小帶魚(yú)Eupleurogrammus muticus 與舌鰨科未定種，仔稚魚(yú)優(yōu)勢(shì)種為鮻、絲鰭Callionymus virgis、鳀、矛尾蝦虎魚(yú)Chaeturichthys stigmatias，本研究中岱衢洋海域仔稚魚(yú)優(yōu)勢(shì)種為小黃魚(yú)、六絲鈍尾蝦虎魚(yú)（魚(yú)卵數(shù)量較少，未分析）。印瑞等[3]對(duì)馬鞍列島人工魚(yú)礁區(qū)的魚(yú)卵、仔稚魚(yú)群落結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究，認(rèn)為春季（2018 年）馬鞍列島人工魚(yú)礁區(qū)魚(yú)卵優(yōu)勢(shì)種為小黃魚(yú)，仔稚魚(yú)優(yōu)勢(shì)種為褐菖鲉Sebastiscus marmoratus 和花鱸Lateolabrax japonicus，本研究中嵊山洋海域魚(yú)卵優(yōu)勢(shì)種為舌鰨屬未定種（仔稚魚(yú)數(shù)量較少，未分析）。這可能與調(diào)查海域選擇的范圍大小不同有關(guān)。

本研究基本掌握了舟山漁場(chǎng)典型海域魚(yú)卵、仔稚魚(yú)的種類組成及數(shù)量時(shí)空分布，下一步應(yīng)繼續(xù)加強(qiáng)該海域魚(yú)卵、仔稚魚(yú)的調(diào)查，以期不斷豐富舟山漁場(chǎng)DNA 條形碼資源庫(kù)。同時(shí)，基于現(xiàn)有研究結(jié)果，不斷探索疑難種類鑒定方法，積極構(gòu)建主要種類魚(yú)卵、仔稚魚(yú)形態(tài)分類檢索表，為魚(yú)類早期補(bǔ)充機(jī)制、資源量評(píng)估、資源可持續(xù)利用等研究提供基礎(chǔ)資料。

致謝：本研究在魚(yú)卵、仔稚魚(yú)樣本采集過(guò)程中得到浙江省海洋水產(chǎn)研究所張洪亮、陳峰、畢遠(yuǎn)新、張亞洲、盧占暉、李振華、李德偉、王好學(xué)等同志給予的協(xié)助，特此表示感謝。