文/DR.Stavros Kromidas

超聲波制備HPLC試樣時(shí)的小貼士// HPLC高效液相色譜試樣的正確制備對檢驗(yàn)分析的結(jié)果有著決定性的影響。本期HPLC小貼士告訴你使用超聲波制備試樣時(shí)的影響因素有哪些？

在實(shí)驗(yàn)室中，超聲波洗滌技術(shù)不僅適用于玻璃器皿的清洗、乳化液和懸浮液的分離，還可用于制備HPLC的試驗(yàn)樣本。而HPLC試樣的正確制備對檢驗(yàn)分析的結(jié)果有著決定性影響，故不可小覷超聲波的后期影響。那超聲波制備HPLC試樣時(shí)的影響因素有哪些呢？

1.物理因素

（1）使用的是自來水還是蒸餾水？水位、水溫的高低？例如：水位低時(shí)，能量大、洗滌能力強(qiáng)；水位高時(shí)，能量小、但分布均勻。一般情況下，當(dāng)水溫較高時(shí)樣本的水解、重排或者成分發(fā)生改變的風(fēng)險(xiǎn)更大，這種情況在某些活性成分的檢測中都能看到，如乙酰氨基酚、維生素、氨基酸和著色劑等。

（2）超聲波洗浴池的材料、大小、幾何形狀（圓形還是方形）、壁厚及放置位置，如直接放在試驗(yàn)臺上還是有橡膠墊減震隔離等。

（3）洗滌時(shí)器皿的材料（燒杯還是實(shí)驗(yàn)室器皿架）、放置位置？例如，燒杯是直接放在洗浴池中與其底部接觸還是距底部有5~20 cm的高度。

2.不同的實(shí)驗(yàn)手法

（1）當(dāng)樣本比較復(fù)雜時(shí)（如淀粉），在超聲波洗滌過程中是否搖動樣本溶液。

（2）當(dāng)達(dá)到超聲波洗滌時(shí)間后，是否讓樣本在洗滌液中停留一段時(shí)間再將其拿出？例如，到了規(guī)定的5分鐘洗滌時(shí)間，立即將樣本取出還是停留15分鐘后再將其取出。

（3）超聲波洗滌池中的水是否長時(shí)間沒有更換或者是否有在洗滌液中加入少量的異丙醇，以減緩藻類的形成等。

作為“穩(wěn)健”的實(shí)驗(yàn)分析，最好對超聲波制備HPLC試樣帶來的影響進(jìn)行全面的檢查。如果對樣本的穩(wěn)定性和重復(fù)再現(xiàn)性產(chǎn)生了影響，一般是上面提到的因素之一。