王蘭英，孫吉利，蘇家茹

青島市市立醫(yī)院，山東 青島 266011

乳腺癌的發(fā)病率和死亡率在女性惡性腫瘤中位于首位，全球每年約有40多萬人因乳腺癌死亡［1］。我國乳腺癌發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升趨勢，且發(fā)病趨于年輕化［2］。目前對乳腺癌的治療以手術(shù)為主，但乳腺癌細(xì)胞通常通過血液和淋巴結(jié)遷移擴(kuò)散至全身，給治療帶來困難［3］。由于腫瘤具有異質(zhì)性，不同階段乳腺癌患者對藥物選擇存在差別，因此，常存在治療后腫瘤細(xì)胞未完全清除的情況，造成治療失敗。此外，腫瘤細(xì)胞耐藥性也是影響治療效果的重要因素［4］。因此，研發(fā)新的治療方案，提高乳腺癌治療效果顯得尤為重要。雞血藤作為我國傳統(tǒng)藥材，具有補(bǔ)血活血、通絡(luò)強(qiáng)筋等功效。研究發(fā)現(xiàn)，雞血藤總黃酮具有干擾腫瘤細(xì)胞周期、抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的作用，但其作用機(jī)制未完全明確［5］。Wnt/β-catenin通路對細(xì)胞生長發(fā)育嚴(yán)格精準(zhǔn)調(diào)控，但當(dāng)其過度活化時(shí)則會(huì)導(dǎo)致腫瘤的生成。已有研究證實(shí)，Wnt/β-catenin通路的異常調(diào)控可導(dǎo)致肺癌、前列腺癌、直腸癌、肝癌等［6-9］。本實(shí)驗(yàn)基于對Wnt/β-catenin通路的調(diào)控作用研究雞血藤總黃酮對人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7增殖、侵襲、遷移和凋亡的影響。

1 材料

1.1 細(xì)胞人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7（武漢尚恩生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：190351），保存于-80℃冰箱。

1.2 藥物與試劑阿霉素（山東西亞化學(xué)工業(yè)有限公司，純度≥99.0%，貨號(hào)：A16278）；蘆?。ū本┲锌瀑|(zhì)檢生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)：202597）。DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清（美國Gibco公司，貨號(hào)：11054020、16140071）；乳酸脫氫酶染色液（四唑鹽法）（北京百奧萊博科技有限公司，貨號(hào)：GL0510）；吉姆薩染液試劑盒（北京雷根生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)：DM002）；RNA提取試劑盒（上海東寰生物科技有限公司，貨號(hào)：M00501）；Trizol、反轉(zhuǎn)錄試劑盒［賽默飛世爾科技（中國）有限公司，貨號(hào)：15596018、K1691］；RT-qPCR試劑盒（美國賽默飛公司，貨號(hào)：AB4105A）；蛋白裂解試劑盒（上海江林生物科技有限公司，貨號(hào)：P1160）；Wnt1、β-catenin、Cyclin-D1、c-Myc、MMP-7、β-catenin磷酸化一抗（上海信裕生物科技有限公司，貨號(hào)：xy-WNTi-Hu、xy-E11315、xy-E10333、xy-1732R、xy-0423R、xy-2063R）；β-actin一抗、辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記羊抗兔二抗（美國Cell Signaling Technology公司，貨號(hào)：4967S、7074）；TUNEL法試劑盒（德國Merck-Calbiochem公司，貨號(hào)：G3250）；電化學(xué)發(fā)光（Enhanced Chemiluminescent，ECL）顯色試劑盒（北京諾博萊德科技有限公司，貨號(hào)：P1260）；4%多聚甲醛、二甲基亞砜、乙醇（山東西亞化學(xué)工業(yè)有限公司，貨號(hào)：B14435、A296671、A10140）；MTT粉（上海尚寶生物科技有限公司，貨號(hào)：T10182）；引物合成委托北京睿博興科生物技術(shù)有限公司。

1.3 儀器Herocell 240細(xì)胞培養(yǎng)箱（上海潤度生物科技有限公司）；DNM-9602G酶標(biāo)儀（北京普朗新技術(shù)有限公司）；JY300E電泳儀（北京君意東方電泳設(shè)備有限公司）；Axio Imager2光學(xué)顯微鏡（北京普瑞賽司儀器有限公司）；RT-qPCR儀（美國賽默飛公司）。

2 方法

2.1 藥物制備雞血藤總黃酮的提?。喝‰u血藤5.0 g，粉碎成粗粉，加入50%乙醇100 mL，加熱回流提取2.5 h，重復(fù)1次，過濾合并濾液，減壓回收乙醇，得到雞血藤總黃酮；以蘆丁為對照品，測得其中雞血藤總黃酮的含量＞80%。

2.2 細(xì)胞培養(yǎng)與干預(yù)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7培養(yǎng)基由10%胎牛血清和90%DMEM培養(yǎng)基配置，細(xì)胞培養(yǎng)在5%CO2、37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中，當(dāng)細(xì)胞生長至對數(shù)期時(shí)，按照每孔1×105個(gè)細(xì)胞加入96孔板中培養(yǎng)，并將其分為5組，陰性對照組、陽性對照組、雞血藤總黃酮高、中、低劑量組。陽性對照組培養(yǎng)基中加入阿霉素至終濃度為5μmol·L-1，陰性對照組加入等體積的PBS溶液，雞血藤總黃酮高、中、低劑量組培養(yǎng)基中加入雞血藤總黃酮使其終濃度分別為80 mg·L-1、40 mg·L-1、20 mg·L-1，培養(yǎng)48 h。

2.3 MCF-7細(xì)胞增殖能力檢測分別在培養(yǎng)24 h和48 h時(shí)，每孔加入5 g·L-1MTT溶液20μL，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4 h后，棄上清，每孔加入200μL二甲基亞砜，室溫避光置于水平搖床上10 min，使用酶標(biāo)儀讀取樣品在490 nm處光吸收值，計(jì)算增殖抑制率。

增殖抑制率＝（1-實(shí)驗(yàn)組OD值/陰性對照組OD值）×100%

2.4 MCF-7細(xì)胞侵襲能力檢測藥物干預(yù)48 h后，取1×105個(gè)·mL-1的MCF-7細(xì)胞懸液200μL接種在Transwell小室上室中，小室底部有一層基質(zhì)膠，小室下加20%胎牛血清和80%DMEM培養(yǎng)基。將MCF-7細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，擦去上室內(nèi)的細(xì)胞和基質(zhì)膠，使用吉姆薩染液試劑盒對附著在上室底部的細(xì)胞染色，光鏡下觀察并統(tǒng)計(jì)每個(gè)視野下細(xì)胞的數(shù)量。

2.5 MCF-7細(xì)胞遷移能力檢測藥物干預(yù)48 h后，將細(xì)胞接種在96孔板中，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到90%以上時(shí)，用滅菌槍頭在有貼壁細(xì)胞的96孔板底部劃出一道劃痕，清除劃痕附近破碎的細(xì)胞，將96孔板置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，光鏡下觀察并計(jì)算細(xì)胞遷移率。

細(xì)胞遷移率＝（1-培養(yǎng)48 h后的間距/起始劃痕間距）×100%

2.6 MCF-7細(xì)胞凋亡情況檢測藥物干預(yù)48 h后，收集細(xì)胞，用約1×106個(gè)細(xì)胞均勻鋪在蓋玻片上，自然晾干后使用4%多聚甲醛將細(xì)胞固定在載玻片，用PBS清洗2次后加TUNEL混合液并嚴(yán)格按照TUNEL試劑盒說明書進(jìn)行操作。顯色后封片，光鏡下觀察并統(tǒng)計(jì)每個(gè)視野中凋亡細(xì)胞數(shù)和總細(xì)胞數(shù)。

細(xì)胞凋亡指數(shù)＝細(xì)胞凋亡數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%

2.7Wnt1、β-catenin、cyclinD1、c-Myc和MMP-7的mRNA相對表達(dá)量檢測使用RT-qPCR檢測Wnt1、β-catenin、cyclinD1、c-Myc和MMP-7的mRNA相對表達(dá)量。藥物干預(yù)48 h后，收集細(xì)胞于離心管中，加入Trizol，按照RNA提取試劑盒操作說明書對細(xì)胞總RNA進(jìn)行提取，使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將細(xì)胞總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，按照NCBI基因庫中查找的目的基因序列，設(shè)計(jì)目的基因上下游引物，引物序列見表1。按照RT-qPCR試劑盒說明書將PCR程序設(shè)置為：95℃10 s，58℃30 s，72℃20 s，35個(gè)循環(huán)后，60℃5 min。GAPDH為內(nèi)參基因，通過2-△△Ct計(jì)算各目的基因mRNA相對表達(dá)量。

表1 引物序列

2.8 Wnt1、β-catenin、cyclinD1、c-Myc和MMP-7蛋白表達(dá)量和β-catenin磷酸化水平檢測采用Western blot檢測Wnt1、β-catenin、cyclinD1、c-Myc和MMP-7蛋白表達(dá)量和β-catenin磷酸化水平。藥物干預(yù)48 h后，將細(xì)胞收集到離心管中，加入細(xì)胞裂解液，提取細(xì)胞總蛋白。按照Western blot試劑盒說明書進(jìn)行操作，加一抗（1∶1 000）、二抗（1∶1 000）后使用ECL顯色試劑盒顯色，以β-actin蛋白為內(nèi)參，計(jì)算各目的蛋白的相對表達(dá)量。

2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法研究結(jié)果使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，使用SPSS 16.0對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，多組樣本間比較使用單因素方差分析，兩兩比較使用SNK-q檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05表示結(jié)果有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

3 結(jié)果

3.1 雞血藤總黃酮對MCF-7細(xì)胞增殖抑制率的影響藥物干預(yù)24 h和48 h后，與陰性對照組比較，雞血藤總黃酮可明顯升高M(jìn)CF-7細(xì)胞的增殖抑制率（P＜0.05），且呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴性；與藥物干預(yù)24 h相比，不同劑量的雞血藤總黃酮干預(yù)48 h后MCF-7細(xì)胞的增殖抑制率均顯著升高（P＜0.05）。提示雞血藤總黃酮可明顯抑制MCF-7細(xì)胞增殖。見表2。

表2 雞血藤總黃酮對MCF-7細(xì)胞增殖抑制率的影響 （±s，%）

表2 雞血藤總黃酮對MCF-7細(xì)胞增殖抑制率的影響 （±s，%）

注：與24 h相比，*P＜0.05；與陰性對照組相比，a P＜0.05；與陽性對照組相比，b P＜0.05；與雞血藤總黃酮高劑量組相比，c P＜0.05；與雞血藤總黃酮中劑量組相比，d P＜0.05

24 h 48 h陰性對照組組別0 0陽性對照組 32.50±2.14a 51.28±6.06*a雞血藤總黃酮高劑量組 44.62±5.33ab 69.34±5.27*ab雞血藤總黃酮中劑量組 30.43±3.75ac 49.75±6.33*ac雞血藤總黃酮低劑量組 21.19±2.47abcd 34.57±4.69*abcd

3.2 雞血藤總黃酮對MCF-7細(xì)胞凋亡的影響藥物干預(yù)48 h后，TUNEL法觀察MCF-7細(xì)胞凋亡情況。與陰性對照組比較，雞血藤總黃酮顯著升高M(jìn)CF-7細(xì)胞的凋亡指數(shù)（P＜0.05），且呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴性。提示雞血藤總黃酮可促進(jìn)MCF-7細(xì)胞凋亡。見圖1，表3。

圖1 雞血藤總黃酮對MCF-7細(xì)胞凋亡的影響（×200）

表3 雞血藤總黃酮對MCF-7細(xì)胞凋亡的影響 （±s）

表3 雞血藤總黃酮對MCF-7細(xì)胞凋亡的影響 （±s）

注：與24 h相比，*P＜0.05；與陰性對照組相比，a P＜0.05；與陽性對照組相比，b P＜0.05；與雞血藤總黃酮高劑量組相比，c P＜0.05；與雞血藤總黃酮中劑量組相比，d P＜0.05

/%陰性對照組組別 凋亡指數(shù)5.12±1.02陽性對照組 34.50±5.18a雞血藤總黃酮高劑量組 45.47±6.22ab雞血藤總黃酮中劑量組 30.91±4.15ac雞血藤總黃酮低劑量組 22.14±3.38 abcd

3.3 雞血藤總黃酮對MCF-7細(xì)胞侵襲活性的影響與陰性對照組比較，雞血藤總黃酮顯著降低Transwell小室上室底部MCF-7細(xì)胞數(shù)（P＜0.05），且呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴性。提示雞血藤總黃酮可抑制MCF-7細(xì)胞侵襲活性。見圖2，表4。

表4 雞血藤總黃酮對MCF-7細(xì)胞侵襲活性的影響 （±s）

表4 雞血藤總黃酮對MCF-7細(xì)胞侵襲活性的影響 （±s）

注：與陰性對照組相比，a P＜0.05；與陽性對照組相比，b P＜0.05；與雞血藤總黃酮高劑量組相比，c P＜0.05；與雞血藤總黃酮中劑量組相比，d P＜0.05

組別 陽性細(xì)胞數(shù)（個(gè)/視野）168.40±10.05陽性對照組 93.80±6.43a雞血藤總黃酮高劑量組 42.60±5.28ab雞血藤總黃酮中劑量組 96.20±7.75ac雞血藤總黃酮低劑量組 119.6±12.60陰性對照組abcd

圖2 雞血藤總黃酮對MCF-7細(xì)胞侵襲活性的影響（×100）

3.4 雞血藤總黃酮對MCF-7細(xì)胞遷移能力的影響與陰性對照組比較，雞血藤總黃酮顯著降低MCF-7細(xì)胞的遷移率（P＜0.05），且呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴性。提示雞血藤總黃酮可抑制MCF-7細(xì)胞的遷移能力。見圖3，表5。

表5 雞血藤總黃酮對MCF-7細(xì)胞遷移能力的影響 （±s）

表5 雞血藤總黃酮對MCF-7細(xì)胞遷移能力的影響 （±s）

注：與陰性對照組相比，a P＜0.05；與陽性對照組相比，b P＜0.05；與雞血藤總黃酮高劑量組相比，c P＜0.05；與雞血藤總黃酮中劑量組相比，d P＜0.05

組別 遷移率/%陰性對照組abcd 89.96±6.58陽性對照組 61.41±5.30a雞血藤總黃酮高劑量組 30.52±4.23ab雞血藤總黃酮中劑量組 62.35±6.08ac雞血藤總黃酮低劑量組 73.20±5.91

圖3 雞血藤總黃酮對MCF-7細(xì)胞遷移能力的影響（×400）

3.5 雞血藤總黃酮對MCF-7細(xì)胞中Wnt/β-catenin通路相關(guān)基因相對表達(dá)量的影響RT-qPCR檢測MCF-7細(xì)胞中Wnt1、β-catenin、cyclinD1、c-Myc和MMP-7的mRNA相對表達(dá)量。與陰性對照組比較，雞血藤總黃酮顯著降低Wnt1、βcatenin、cyclinD1、c-Myc和MMP-7的mRNA表達(dá)（P＜0.05），且呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴性。見表6。

表6 雞血藤總黃酮對MCF-7細(xì)胞中Wnt/β-catenin通路相關(guān)基因相對表達(dá)量的影響 （±s）

表6 雞血藤總黃酮對MCF-7細(xì)胞中Wnt/β-catenin通路相關(guān)基因相對表達(dá)量的影響 （±s）

注：與陰性對照組相比，a P＜0.05；與陽性對照組相比，b P＜0.05；與雞血藤總黃酮高劑量組相比，c P＜0.05；與雞血藤總黃酮中劑量組相比，d P＜0.05

mRNA陰性對照組 1.78±0.26 0.65±0.05 1.25±0.15 1.50±0.22 0.8組別 Wnt1 mRNA β-catenin mRNA cyclinD1 mRNA c-Myc mRNA MMP-7 5±0.06陽性對照組 1.05±0.12a 0.42±0.09a 0.83±0.06a 0.96±0.14a 0.44±0.04a雞血藤總黃酮高劑量組 0.66±0.07ab 0.28±0.07ab 0.41±0.09ab 0.65±0.07ab 0.29±0.03ab雞血藤總黃酮中劑量組 1.10±0.12ac 0.41±0.10ac 0.85±0.10ac 0.98±0.13ac 0.42±0.04ac雞血藤總黃酮低劑量組 1.36±0.15abcd 0.55±0.08abcd 0.99±0.08abcd 1.21±0.16abcd 0.63±0.08 abcd

3.6 雞血藤總黃酮對MCF-7細(xì)胞中Wnt/β-catenin通路相關(guān)蛋白表達(dá)量及其磷酸化水平的影響Western blot檢測MCF-7細(xì)胞中Wnt1、β-catenin、cyclinD1、c-Myc和MMP-7蛋白表達(dá)水平和β-catenin磷酸化水平。與陰性對照組比較，雞血藤總黃酮顯著降低Wnt1、β-catenin、cyclinD1、c-Myc和MMP-7的蛋白表達(dá)水平（P＜0.05），顯著升高β-catenin磷酸化水平（P＜0.05），且呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴性。見圖4，表7。

圖4 雞血藤總黃酮對MCF-7細(xì)胞中Wnt/β-catenin通路相關(guān)蛋白表達(dá)量及其磷酸化水平的影響

表7 雞血藤總黃酮對MCF-7細(xì)胞中Wnt/β-catenin通路相關(guān)蛋白表達(dá)量及其磷酸化水平的影響 （±s）

表7 雞血藤總黃酮對MCF-7細(xì)胞中Wnt/β-catenin通路相關(guān)蛋白表達(dá)量及其磷酸化水平的影響 （±s）

注：與陰性對照組相比，a P＜0.05；與陽性對照組相比，b P＜0.05；與雞血藤總黃酮高劑量組相比，c P＜0.05；與雞血藤總黃酮中劑量組相比，d P＜0.05

組別 Wnt1/β-actin β-catenin/β-actin β-catenin磷酸化/β-actin cyclinD1/β-actin c-Myc/β-actin MMP-7/β-actin陰性對照組 2.08±0.32 0.56±0.05 0.14±0.01 1.05±0.12 1.3 5±0.11 1.03±0.14陽性對照組 1.45±0.21a 0.35±0.05a 0.36±0.06a 0.74±0.04a 0.88±0.13a 0.66±0.12a雞血藤總黃酮高劑量組 0.87±0.14ab 0.19±0.07ab 0.50±0.07ab 0.38±0.05ab 0.49±0.07ab 0.48±0.07ab雞血藤總黃酮中劑量組 1.48±0.18ac 0.30±0.06ac 0.33±0.05ac 0.76±0.07ac 0.90±0.12ac 0.65±0.09ac雞血藤總黃酮低劑量組 1.63±0.21abcd 0.43±0.04abcd 0.25±0.03abcd 0.89±0.04abcd 1.13±0.14abcd 0.81±0.10 abcd

4 討論

乳腺癌作為女性高發(fā)惡性腫瘤嚴(yán)重危害女性健康。雖然人們對乳腺癌發(fā)病機(jī)制的研究不斷深入，但是目前仍未完全明確［10］?；熓窃摬≈委煹闹匾侄危腔熞鸬哪[瘤耐藥性不可忽視。研究報(bào)道，90%以上的化療失敗均為腫瘤細(xì)胞耐藥所致，且此類藥物不良癥狀較多，也使得患者預(yù)后不佳［11］。因此，尋找新型治療方案顯得尤為重要。乳腺癌在中醫(yī)上被認(rèn)為是肝氣郁結(jié)、正氣不足所致，癌變過程被認(rèn)為是毒邪停留、氣滯血瘀［12］。因此，治療需以活血化瘀、散節(jié)理氣為主。雞血藤為我國傳統(tǒng)中藥之一，其性味溫、苦、甘，具有補(bǔ)血活血、通絡(luò)活筋、調(diào)經(jīng)止痛的功效［13］。研究表明，雞血藤總黃酮為雞血藤的主要成分，具有調(diào)節(jié)免疫、清除自由基、抗氧化、抗腫瘤等作用［14-15］，且雞血藤總黃酮在抑制腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，對正常細(xì)胞毒性較小，安全性較高［16］?；诖?，本研究探討雞血藤總黃酮對乳腺癌細(xì)胞的抑制作用。

阿霉素是廣譜類抗腫瘤藥物，對乳腺癌具有較強(qiáng)抗癌活性，常見于乳腺癌的臨床治療，但因其不良反應(yīng)及耐藥性導(dǎo)致該藥物在臨床治療中無法長期大量使用［17］。因此本研究使用阿霉素作為雞血藤總黃酮的陽性對照藥物具有可行性。本研究使用雞血藤總黃酮處理人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7發(fā)現(xiàn)，MCF-7細(xì)胞增殖抑制率升高，侵襲和轉(zhuǎn)移能力降低，該結(jié)果與已有研究結(jié)果一致。此外，雞血藤總黃酮處理組與陽性對照組均表現(xiàn)出對MCF-7細(xì)胞抑制作用，但是高劑量雞血藤總黃酮效果優(yōu)于阿霉素。癌細(xì)胞除了能夠增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移以外，細(xì)胞周期被改變，細(xì)胞凋亡被抑制，也是腫瘤發(fā)生發(fā)展的原因之一。研究證明，雞血藤可干擾細(xì)胞周期，促進(jìn)人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞凋亡［18］。本研究通過TUNEL法檢測人乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡指數(shù)發(fā)現(xiàn)，雞血藤總黃酮和阿霉素均可促進(jìn)MCF-7細(xì)胞凋亡，高劑量雞血藤總黃酮效果優(yōu)于阿霉素。Wnt/β-catenin信號(hào)通路最初發(fā)現(xiàn)在胚胎發(fā)育形成中起重要作用，隨著研究的深入又被證實(shí)與腫瘤的形成、發(fā)展密切相關(guān)［19］。當(dāng)該信號(hào)通路未被激活時(shí)，存在細(xì)胞質(zhì)中的β-catenin會(huì)與GSK-3β等蛋白結(jié)合形成復(fù)合物，并發(fā)生磷酸化，磷酸化的β-catenin會(huì)進(jìn)入泛素化-蛋白酶體途徑發(fā)生降解，使得細(xì)胞質(zhì)中βcatenin維持較低水平，Wnt通路下游靶基因表達(dá)被抑制，維持正常細(xì)胞調(diào)控［20］。當(dāng)細(xì)胞質(zhì)中存在Wnt配體時(shí)，GSK-3β被磷酸化，復(fù)合物無法形成導(dǎo)致β-catenin無法被磷酸化，在細(xì)胞質(zhì)中大量累積并處于游離狀態(tài)，游離的β-catenin可進(jìn)入細(xì)胞核并和細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，激活下游靶基因cyclinD1、c-Myc和MMP-7等［21］。cyclinD1是細(xì)胞周期蛋白家族成員，其過表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞從G1期快速進(jìn)入S期，導(dǎo)致細(xì)胞生長失控，進(jìn)行惡性增殖，引起腫瘤的生成，因此，在癌細(xì)胞中cyclinD1的表達(dá)常表現(xiàn)為異常增多［22］。研究表明，乳腺癌的高侵襲轉(zhuǎn)移性和cyclinD1的陽性表達(dá)有關(guān)［23］。c-Myc是癌基因家族成員，在細(xì)胞生長、增殖、分化、凋亡等過程中具有重要作用，由于其在多種腫瘤組織中均可檢測出異常高表達(dá)量，因此，常作為部分腫瘤診斷的標(biāo)志物［24］。研究表明，下調(diào)乳腺癌細(xì)胞中c-Myc基因表達(dá)水平可抑制細(xì)胞生長和侵襲轉(zhuǎn)移能力［25］。MMP-7是基質(zhì)金屬蛋白酶家族成員，具有降解細(xì)胞外基質(zhì)、促進(jìn)血管生成、調(diào)節(jié)細(xì)胞間黏附程度等功能。研究發(fā)現(xiàn)，MMP-7在腫瘤組織中呈現(xiàn)出較高表達(dá)量，并且與腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系［26］。本研究結(jié)果顯示，雞血藤總黃酮處理的MCF-7細(xì)胞中Wnt1、β-catenin、cyclinD1、c-Myc和MMP-7的mRNA和蛋白表達(dá)水平降低，β-catenin磷酸化水平提高，表明MCF-7細(xì)胞中Wnt/β-catenin信號(hào)通路異常激活被抑制，且抑制效果具有劑量依賴性。綜上所述，雞血藤總黃酮可抑制人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7增殖、侵襲和遷移，促進(jìn)其凋亡，推測其作用機(jī)制與抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路激活有關(guān)。本研究僅從體外實(shí)驗(yàn)方面進(jìn)行探討，雞血藤總黃酮能否作為乳腺癌治療藥物應(yīng)用于臨床還需要進(jìn)一步深入研究。