何夢(mèng)杰，劉瑩瑩，任瑞華，董玉倩，甘廣玉，黃鎖義

(1.右江民族醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院，廣西壯族自治區(qū) 百色 533000；2.右江民族醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)影像學(xué)院，廣西壯族自治區(qū) 百色 533000；3.右江民族醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，廣西壯族自治區(qū) 百色 533000；4.右江民族醫(yī)學(xué)院廣西高校右江流域特色民族藥研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西壯族自治區(qū) 百色 533000)

益母草是唇形科益母草屬植物益母草(LeonurusjaponicusHoutt.)，又名茺蔚、坤草，為唇形科。益母草屬植物益母草的全草，夏季開花。其干燥的上部分，其味苦，性微寒，為常用中藥，生用或熬膏用[1]。益母草具有抗氧化、抗血小板聚集[2]、促進(jìn)子宮收縮、活血，化瘀，調(diào)經(jīng)等多種生物學(xué)作用。益母草的有效成分已被證明對(duì)子宮平滑肌有影響[3]?，F(xiàn)代藥理研究表明益母草有效成分對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦梗死小鼠血腦屏障的保護(hù)作用與其體內(nèi)的抗氧化活性有關(guān)，在世界范圍內(nèi)，疾病負(fù)擔(dān)、傷害及危險(xiǎn)因素評(píng)估顯示，腦梗死是至死的第二大常見原因，致殘的第三大常見原因[4]。益母草在此方面具有很大的應(yīng)用潛能。

雞血藤為豆科植物密花豆(SpatholobussuberectusDunn)的干燥藤莖。雞血藤具有活血補(bǔ)血、調(diào)經(jīng)止痛、抗炎、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、抗病毒、抗腫瘤等多種藥理活性。黃酮類化合物是雞血藤的主要活性成分，具有很強(qiáng)的抗氧化和自由基清除活性[5]。研究表明，雞血藤能夠降低血漿中總膽固醇量、高密度脂蛋白-膽固醇量,還能夠升高高密度脂蛋白膽固醇亞組分(HDL2-C/HDL3-C)的量,同時(shí),還可以延緩動(dòng)脈粥樣的硬化[6]。雞血藤黃酮的強(qiáng)抗氧能力及廣泛的藥理活性，使它在減輕氧化應(yīng)激、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、提高抗病能力方面有著很大的應(yīng)用潛能[5]。但目前還少有文獻(xiàn)對(duì)其抗氧化活性進(jìn)行報(bào)道。表明益母草與雞血藤可能還具有其他藥理作用值得我們?nèi)ラ_發(fā)。為此，本實(shí)驗(yàn)探究益母草與雞血藤提取物及其配伍體外抗氧化活性的比較。

1 材料與試劑

1.1 儀器 紫外可見分光光度計(jì)(儀器型號(hào)：N4S,上海儀電分析儀器有限公司)；KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；FK1204B電子天平(上海天美天平儀器有限公司)。

1.2 材料 益母草、雞血藤均購自廣西百色市藥店。

1.3 試劑 95%的乙醇(成都市科隆化學(xué)品有限公司)；1，1-二苯基-2-苦基肼自由基(批號(hào)：D4313，東京化成工業(yè)株式會(huì)社)。

2 方法

2.1 DPPH·溶液的制備 精密稱取0.04 g DPPH·,用300 mL無水乙醇溶解，移至500 mL 量瓶進(jìn)行定容,所得DPPH·溶液的濃度為20 mol·L-14 ℃避光保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 益母草雞血藤的提取與溶液的配制

2.2.1 醇提取物制備 益母草20 g粉碎成細(xì)末,將葉、莖碎粉混合均勻,取8 g樣品粉末置入250 mL錐形瓶中，加入80 mL 95%乙醇超聲提取45 min,真空抽濾，棄殘?jiān)?再用20 mL 95%乙醇溶解后,4 ℃避光保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2.2 水提取物制備 益母草20 g 粉碎成細(xì)末,將葉、莖碎粉混合均勻,取8 g 樣品粉末置入250 mL錐形瓶中，加入80 mL 蒸餾水超聲提取60 min,真空抽濾，棄殘?jiān)?再用20 mL蒸餾水溶解后,4 ℃避光保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 益母草與雞血藤配伍 取益母草與雞血藤按1∶1、1∶2、1∶3、1∶4及2∶1、3∶1、4∶1配制，混合溶液的配置操作同益母草。

2.4 DPPH·清除能力的測定 將配制成的益母草、雞血藤樣品溶液按表1加樣于試管中混勻，避光反應(yīng)30 min,取液在517 nm波長處測定吸光度(A)。

表1 加樣方法與加樣量

清除率計(jì)算(P)公式:P=[1-(Ai-Aj)/Ac]×100%。

2.5 提取液對(duì)鐵離子螯合能力的影響 取樣品溶液1.0 mL后依次加入5 mmol·L-1FeCl20.002 mL,再加入5 mmol·L-1菲咯嗪0.2 mL室溫下靜置10 min,隨后加入等體積的蒸餾水，振蕩混合均勻后，于562 nm下測量光密度，BHT作為陽性對(duì)照。Ao:空白對(duì)照的光密度；As:樣品液或陽性對(duì)照品的光密度。

鐵離子螯合率(%)=(Ao-As)/Ao×100%。

3 結(jié)果

3.1 提取液對(duì)DPPH·清除能力影響 采用醇提的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示，益母草與雞血藤及其配伍對(duì)DPPH·清除率中益母草-雞血藤(1∶3)時(shí)清除率最高，按順序排列可為益母草-雞血藤(1∶3)>雞血藤>益母草-雞血藤(1∶4)>益母草-雞血藤(1∶2)>益母草-雞血藤(1∶1)>益母草-雞血藤(3∶1)>益母草-雞血藤(2∶1)>益母草-雞血藤(4∶1)>益母草,益母草-雞血藤(1∶3)為最佳配比，陽性對(duì)照維生素C抗氧化能力最高。

圖1 醇提取液DPPH自由基清除率

采用水提的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示，益母草與雞血藤及其配伍對(duì)DPPH·清除率中益母草-雞血藤(1∶3)時(shí)清除率最高，按順序排列可為益母草-雞血藤(1∶3)>維生素C>益母草-雞血藤(1∶1)>益母草-雞血藤(3∶1)>益母草-雞血藤(1∶2)>益母草-雞血藤(2∶1)>益母草-雞血藤(4∶1)>益母草-雞血藤(1∶4)>雞血藤>益母草,益母草-雞血藤(1∶3)為最佳配比，益母草-雞血藤(1∶3)抗氧化能力最高。

圖2 水提取液DPPH自由基清除率

3.2 螯合鐵離子的測定結(jié)果 采用醇提的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示，益母草與雞血藤及其配伍對(duì)鐵離子螯合能力測定中益母草-雞血藤(1∶4)時(shí)清除率最高，按順序排列可為益母草-雞血藤(1∶4)>益母草-雞血藤(2∶1)>益母草-雞血藤(1∶3)>益母草-雞血藤(3∶1)>益母草-雞血藤(1∶2)>益母草-雞血藤(1∶1)>雞血藤>益母草-雞血藤(4∶1)>益母草,益母草-雞血藤(1∶4)為最佳配比，陽性對(duì)照抗氧化能力最高。

圖3 醇提取液鐵離子螯合能力的測定

采用水提的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖4所示，益母草與雞血藤及其配伍對(duì)鐵離子螯合能力測定中益母草-雞血藤(1∶3)時(shí)清除率最高，按順序排列可為益母草-雞血藤(1∶3)>雞血藤>益母草-雞血藤(1∶1)>益母草-雞血藤(2∶1)>益母草-雞血藤(1∶4)>益母草-雞血藤(1∶2)>益母草-雞血藤(4∶1)>益母草>益母草-雞血藤(3∶1),益母草-雞血藤(1∶3)為最佳配比，陽性對(duì)照維生素C抗氧化能力最高。

圖4 水提取液鐵離子螯合能力的測定

4 討論

益母草的主要成分有生物堿類、黃酮類、酚酸類、苯丙素類、環(huán)烯醚萜苷類等。李承平等在探究益母草有效成分配伍在抗大鼠心肌缺血再灌注損傷作用的研究中提到益母草具有活血調(diào)經(jīng)，利尿消腫，清熱解毒之功效[7]。雞血藤的化學(xué)成分主要有黃酮類、蒽醌類、三萜類、酚酸類、木脂素類、甾醇類及苷類等化合物，且黃酮類化合物為其主要活性成分[8]。官杰等[9]在研究雞血藤防治動(dòng)脈硬化相關(guān)藥理作用的研究進(jìn)展中，藥理學(xué)表明，雞血藤及其有效成分具有抗血小板聚集、調(diào)節(jié)血脂、抗炎、抗氧化等與抗動(dòng)脈硬化相關(guān)的藥理活性。雞血藤與益母草及其提取物有廣泛的藥理活性。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，益母草-雞血藤(1∶3)為最優(yōu)對(duì)象，通過抗氧化能力比較，在DPPH·清除能力的測定時(shí)顯示，95%的乙醇提取液的抗氧化能力比蒸餾水提取液的抗氧化能力高。而鐵離子螯合能力測定時(shí)醇提和水提未發(fā)現(xiàn)明顯差異。在益母草-雞血藤(1∶1)，益母草-雞血藤(1∶2)，益母草-雞血藤(1∶3)抗氧化能力呈現(xiàn)上升趨勢，在益母草-雞血藤(2∶1)，益母草-雞血藤(3∶1)及益母草-雞血藤(4∶1)抗氧化能力呈現(xiàn)下降趨勢，本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明雞血藤與益母草均有抗氧化作用，且不同比例配伍還有明顯的協(xié)同作用。