曹惠
江蘇省揚州市江都人民醫(yī)院檢驗科 (江蘇揚州 225200)
慢性乙型肝炎是一種常見的傳染性疾病,患者臨床表現(xiàn)為肝區(qū)疼痛、腹脹、惡心、畏食與乏力,病情嚴重者還會有脾大、肝掌、蜘蛛痣及慢性肝病面容伴隨出現(xiàn)[1]。該疾病的傳播途徑包括醫(yī)源性傳染、輸血、母嬰及密切生活接觸等,且疾病病程較長,治愈難度大,隨著病情進展,可發(fā)展為肝硬化,甚至肝癌,對患者生命質(zhì)量與身體健康產(chǎn)生嚴重影響[2-3]。乙肝兩對半即乙肝五項,包括乙肝核心抗體(hepatitis B core antibody,HBcAb)、乙肝e 抗體(hepatitis B e antibody,HBeAb)、乙肝e 抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)、乙肝表面抗體(hepatitis B surface antibody,HBsAb)、乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)[4-5]。乙型肝炎病毒DNA 通常是指乙型肝炎病毒基因,為一般病毒感染最敏感、直接的指標,若檢測結(jié)果為陽性,則提示具有傳染性或存在病毒復(fù)制[6]。為提高慢性乙型肝炎的診斷準確率,改善患者預(yù)后,本研究探究慢性乙型肝炎診斷中乙肝兩對半聯(lián)合乙型肝炎病毒DNA 定量檢測的應(yīng)用價值,現(xiàn)報道如下。
選取2017年3月至2020年3月我院收治的115例慢性乙型肝炎患者,男63例,女52例;年齡24~78歲,平均(47.05±2.38)歲。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準。
納入標準:臨床資料完整;自愿參與本研究并簽署知情同意書。排除標準:合并其他類型傳染?。缓喜⑵渌《拘愿窝?;急性乙型肝炎;中途退出。
乙肝兩對半檢測:抽取患者清晨空腹靜脈血4 ml,于室溫下放置30 min,按照3 000 r/min 的速度離心5 min,取上清液,待用;采用科美化學(xué)發(fā)光儀LICA500,博陽生物科技(上海)有限公司試劑盒檢測乙肝兩對半;正常參考值為,HBcAb ≤15 PEIU/ml,HBeAb ≤3 PEIU/ml,HBeAg ≤0.7 PEIU/ml,HBsAb ≤10 mIU/ml,HBsAg ≤0.20 mIU/ml[7]。
乙型肝炎病毒DNA 定量檢測:采用7500型定量PCR儀(AB Applied Bio systems 公司)及乙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒(圣湘公司)進行檢測;從-20 ℃冰箱取出核酸釋放劑、內(nèi)標、酶混合液、PCR 反應(yīng)液及定量參考品A、B、C、D 和陰、陽性對照平衡并恢復(fù)至室溫后混勻,3 000 r/min 瞬時離心10~15 s 后待用;根據(jù)待測樣本、陰性對照、陽性對照及定量參考品A~D 數(shù)量,按比例取相應(yīng)量的反應(yīng)液、酶混合液及內(nèi)標,充分混勻成PCR-mix,3 000 r/min 瞬時離心后備用;每個PCR 反應(yīng)管中加入核酸釋放劑5 μl,并依次加入待測樣本、陰性對照、陽性對照及定量參考品A~D各5 μl 混勻,每管加入PCR-mix 40 μl,混勻后離心30 s,上機檢測。
分析乙肝兩對半聯(lián)合乙型肝炎病毒DNA定量檢測的結(jié)果。
HBcAb、HBeAg、HBsAg 均為陽性,即大三陽患者共有33例,構(gòu)成比為28.70%;HBcAb、HBeAb、HBsAg 均為陽性,即小三陽患者共有40例,構(gòu)成比為34.78%,見表1。
表1 乙肝兩對半檢測結(jié)果
所有患者乙型肝炎病毒DNA 定量檢測結(jié)果平均值為(3.27±0.42)×106IU/ml;大、小三陽患者的乙型肝炎病毒DNA 定量測定值均高于其他類型患者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表2。
表2 乙型肝炎病毒DNA 定量檢測結(jié)果分析(IU/ml,±s)
表2 乙型肝炎病毒DNA 定量檢測結(jié)果分析(IU/ml,±s)
模式 例數(shù) DNA 定量檢測結(jié)果1 33 (3.58±0.23)×107 21 (1.33±0.12)×106 3 40 (1.41±0.15)×107 4 10 (1.46±0.18)×103 5 6(1.23±0.11)×104 2(1.79±0.48)×103 F 236.589 P<0.001 6 5
現(xiàn)階段,乙型肝炎病毒感染已經(jīng)發(fā)展成為一個全球公共衛(wèi)生問題[8]。我國為慢性乙型肝炎大國,且近年來患者數(shù)量明顯增多,雖然疫苗的廣泛推廣使感染率有所降低,但該病依舊屬于需要被重視的嚴峻健康衛(wèi)生問題[9]。流行病學(xué)研究顯示,我國約有3千萬慢性乙型肝炎患者,并且隨著病情進展,最終演變成為肝硬化的患者占15%[10]。臨床診斷肝炎時,通常會將血清轉(zhuǎn)氨酶水平升高作為一個重要評價依據(jù),但臨床實踐顯示,部分非肝炎的肝臟疾病患者也存在血清轉(zhuǎn)氨酶水平升高的現(xiàn)象,故該項指標水平升高在肝炎診斷中的應(yīng)用受到了一定限制。隨著免疫學(xué)、生物學(xué)技術(shù)水平的提高,臨床發(fā)現(xiàn)了越來越多新型肝炎病毒,這為慢性乙型肝炎的診斷創(chuàng)造了有利條件[11-12]。
本研究結(jié)果顯示,115例慢性乙型肝炎患者中,大三陽患者共有33例,構(gòu)成比為28.70%;小三陽患者共有40例,構(gòu)成比為34.78%;所有患者乙型肝炎病毒DNA 定量檢測結(jié)果平均值為(3.27±0.42)106IU/ml;大、小三陽患者的乙型肝炎病毒DNA 定量測定值高于其他類型患者(P<0.05)。究其原因,乙肝兩對半為臨床測定血液內(nèi)乙型肝炎病毒的血清學(xué)標志,大三陽提示為急性或慢性乙型肝炎,具有較強傳染性;而小三陽提示為傳染性相對較弱的急性或慢性乙型肝炎[13]。乙肝兩對半檢測不僅操作簡單,且檢測結(jié)果能準確反映機體的病毒免疫反應(yīng)狀態(tài),可為疾病治療、預(yù)后評價提供重要參考依據(jù)。乙型肝炎病毒DNA 定量檢測是一種利用DNA 對乙型肝炎病毒進行檢測的技術(shù),可用來判斷乙型肝炎病毒的復(fù)制情況[14]。通常情況下,臨床將乙型肝炎病毒DNA定量檢測結(jié)果超過103判定為陽性,將103~105判定為低量復(fù)制,將≥107判定為大量復(fù)制。乙肝兩對半難以對病毒復(fù)制情況進行判斷,而乙型肝炎病毒DNA 定量檢測則能有效彌補該缺陷,故兩者聯(lián)合檢測的應(yīng)用價值更加明顯。
綜上所述,乙肝兩對半聯(lián)合乙型肝炎病毒DNA 定量檢測在慢性乙型肝炎診斷中具有一定臨床價值。