馬麗莎，謝文平，尹 怡，單 奇，劉書(shū)貴，李麗春，趙 成，鄭光明

（中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部水產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室，廣東省水產(chǎn)動(dòng)物免疫技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510380）

近年來(lái)，稻漁共作的新型生產(chǎn)方式不僅體現(xiàn)綠色、自然、共生的農(nóng)業(yè)生態(tài)理念，同時(shí)是我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)重點(diǎn)打造的民族品牌，但農(nóng)業(yè)耕作過(guò)程中農(nóng)藥的不合理施用可能影響其產(chǎn)品質(zhì)量安全。氟蟲(chóng)腈是苯基吡唑類(lèi)新型高活性殺蟲(chóng)劑，其可阻礙昆蟲(chóng)氯化物代謝解毒進(jìn)程[1]，曾廣泛用于水稻等多種經(jīng)濟(jì)作物的蟲(chóng)害防治中[2]。但研究表明，氟蟲(chóng)腈對(duì)生物神經(jīng)、消化及循環(huán)等系統(tǒng)有毒副作用[3-5]，嚴(yán)重時(shí)可引發(fā)致畸效應(yīng)，甚至引發(fā)致癌效應(yīng)[6]，其在環(huán)境中可分解成比自身毒性更強(qiáng)的氟蟲(chóng)腈砜、氟蟲(chóng)腈亞砜和氟甲腈共3 種代謝物[7-8]，其結(jié)構(gòu)式如圖1所示。因此歐盟EU 1127/2014[9]及我國(guó)GB 2763—2019《食品中農(nóng)藥最大殘留限量》[10]規(guī)定食品中氟蟲(chóng)腈的殘留量以氟蟲(chóng)腈及其3 種代謝物換算分子質(zhì)量后的總含量計(jì)算，即氟蟲(chóng)腈及氟甲腈、氟蟲(chóng)腈亞砜、氟蟲(chóng)腈砜共4 種毒性物質(zhì)。目前氟蟲(chóng)腈已被歐盟禁止用于人類(lèi)食品產(chǎn)業(yè)鏈的畜禽養(yǎng)殖過(guò)程，我國(guó)也限制了氟蟲(chóng)腈的銷(xiāo)售和使用[11]，但仍存在氟蟲(chóng)腈超范圍使用的問(wèn)題，歐盟食品和飼料快速報(bào)警系統(tǒng)顯示我國(guó)出口的茶葉近年來(lái)曾多次因氟蟲(chóng)腈農(nóng)殘超標(biāo)而被通報(bào)[12]。目前，備受推崇的稻漁共作模式增加了稻田水產(chǎn)品受到農(nóng)田中氟蟲(chóng)腈污染的風(fēng)險(xiǎn)，因此氟蟲(chóng)腈及其代謝物殘留的檢測(cè)方法值得深入探究。

圖1 氟蟲(chóng)腈及其代謝物化學(xué)結(jié)構(gòu)式Fig.1 Chemical structures of fipronil and its metabolites

由于2017年歐盟爆發(fā)的“氟蟲(chóng)腈毒雞蛋”事件，氟蟲(chóng)腈已成為食品中農(nóng)藥殘留檢測(cè)的熱點(diǎn)，為了更好地保障我國(guó)稻田水產(chǎn)品的質(zhì)量安全，維護(hù)品牌形象，規(guī)避貿(mào)易壁壘的風(fēng)險(xiǎn)，建立檢測(cè)稻田水產(chǎn)品中氟蟲(chóng)腈及其代謝物快速篩查方法尤為必要。但目前氟蟲(chóng)腈及其代謝物的檢測(cè)主要針對(duì)植物源性食品、雞蛋及豬肉等樣品[13-15]，檢測(cè)方法有氣相色譜（gas chromatography，GC）[16-18]、氣相色譜-質(zhì)譜（gas chromatography- mass spectrometry，GC-MS）[19-20]及液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）[14-15,21]等，鮮見(jiàn)水產(chǎn)品中氟蟲(chóng)腈及其代謝物殘留檢測(cè)方法的報(bào)道。呂磊等[18]僅報(bào)道了水產(chǎn)品中氟蟲(chóng)腈原藥的分散固相萃取-氣相色譜（solid phase extraction-gas chromatography，SPE-GC）法，Zhang Yun等[21]雖報(bào)道PriME（process, robustness, improvements,matrix effects, ease of use）-超高效液相色譜-質(zhì)譜（ultrahigh performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry，UPLC-MS/MS）聯(lián)用法測(cè)定海產(chǎn)品中氟蟲(chóng)腈及其代謝物殘留的方法，但海產(chǎn)品與稻田水產(chǎn)品的基質(zhì)成分存在較大差異。由于稻田水產(chǎn)品主打綠色品牌，其品質(zhì)受到廣大消費(fèi)者的高度關(guān)注，但目前檢測(cè)稻田水產(chǎn)品中氟蟲(chóng)腈及其代謝物殘留的方法鮮見(jiàn)報(bào)道，因此，為了保障我國(guó)稻田水產(chǎn)品的質(zhì)量安全，本實(shí)驗(yàn)建立檢測(cè)稻田水產(chǎn)品（主要成分為稻花鯉和克氏原螯蝦（Procambarus clarkii））中氟蟲(chóng)腈及其代謝物殘留的QuEChERS-HPLC-MS/MS法，其具有操作簡(jiǎn)便、快速、靈敏、高效、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，適用于檢測(cè)大批量稻田水產(chǎn)品中氟蟲(chóng)腈及其代謝物殘留（簡(jiǎn)稱為目標(biāo)物）。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

按GB/T 30891—2014《水產(chǎn)品抽樣規(guī)范》，于2018年5—9月按稻花鯉（每份不少于3 尾）、克氏原螯蝦（每份蝦不少于10 尾），每份樣品不少于200 g的方式共采集30 份稻花鯉、30 份克氏原螯蝦[22]。

氟蟲(chóng)腈、氟甲腈、氟蟲(chóng)腈亞砜和氟蟲(chóng)腈砜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（純度均大于99%） 德國(guó)Dr.Ehrenstorfor公司；乙腈、體積分?jǐn)?shù)0.10%甲酸、體積分?jǐn)?shù)0.30%的甲酸、丙酮、正己烷（均為色譜純） 美國(guó)Honeywell公司；乙二胺-N-丙基硅烷（primary-secondary amine，PSA，40～60 目）、C18粉、中性氧化鋁粉 美國(guó)Agela公司；去離子水Milli-Q去離子水發(fā)生器制得；質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.02%、0.05%、0.10%的氨水 天津科密歐試劑廠。

1.2 儀器與設(shè)備

6470三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀、1290-6470液相色譜儀、ZORBAX Extend-C18色譜柱及陶瓷均質(zhì)子 美國(guó)Agilent科技公司；IKA MS3 basic旋渦振蕩儀 德國(guó)IKA公司；TDL-5-A飛鴿牌離心機(jī) 上海安亭公司；Milli-Q去離子水發(fā)生器 美國(guó)Millipore公司；電子天平 瑞士Mettler-Toledo公司；FP3010料理機(jī) 德國(guó)博朗公司。

1.3 方法

1.3.1 溶液的配制

1.3.1.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制

準(zhǔn)確稱取各標(biāo)準(zhǔn)品于棕色容量瓶中并用乙腈溶解，配制成1.0 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于－18 ℃避光保存。

1.3.1.2 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別移取0.1 mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10 mL棕色容量瓶中并用乙腈配制成10 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，于－18 ℃避光保存。

1.3.1.3 基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制

根據(jù)準(zhǔn)確定量樣品的需求量取一定體積的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，再用空白基質(zhì)溶液將混合標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋成1 μg/mL質(zhì)量濃度的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.3.2 前處理方法

1.3.2.1 樣品制備

稻花鯉去鱗，帶皮沿背脊取肉部分?？耸显r去頭、殼、腸、腺，取肌肉部分。試樣切成不大于0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm的小塊后均勻混合樣品，并用絞肉機(jī)將其制備成肉糜，密封后標(biāo)記，于－20 ℃冷凍保存，備用。

1.3.2.2 提取

準(zhǔn)確稱取（2±0.02）g肉糜樣品于15 mL具塞離心管中，加入陶瓷均質(zhì)子，加入4 mL體積分?jǐn)?shù)0.10%甲酸-乙腈溶液，旋渦混合2 min，于－4 ℃、5 000 r/min離心5 min，取上清液于10 mL比色管中，重復(fù)加入4 mL 0.10%甲酸-乙腈溶液到取上清液之間的提取步驟1 次，合并上清液并定容至刻度線，混勻，備用。

1.3.2.3 凈化

取5 mL上清液于10 mL玻璃離心管中，35 ℃水浴氮吹至干，2 mL乙腈定容，取1 mL定容液于2 mL塑料離心管中，加入0.15 g PSA，旋渦振蕩1 min，于25 ℃、10 000 r/min離心5 min，取上清液過(guò)0.22 μm尼龍濾膜，供HPLC-MS/MS檢測(cè)。

1.3.3 儀器條件

1.3.3.1 HPLC條件

色譜柱：安捷倫ZORBAX Extend-C18柱（2.1 mm×100.0 mm，1.8 μm）；柱溫：35 ℃；流動(dòng)相：A液為0.05%的氨水、B液為乙腈；勻速梯度洗脫條件：0～1 min，70% A、30% B；1～15 min，70%～40% A、30%～60% B；15～17 min，40%～70% A、60%～30% B。進(jìn)樣量：5 μL；流速：0.4 mL/min。

1.3.3.2 質(zhì)譜條件

電噴霧負(fù)離子源；毛細(xì)管電壓為3.5 kV；掃描模式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（multiple reation monitoring，MRM）模式；離子源溫度為325 ℃；干燥氣流量為10 L/min；霧化氣壓力為45 psi；鞘氣溫度為350 ℃；鞘氣流量為12 L/min；毛細(xì)管電壓為3 500 V。氟蟲(chóng)腈及其代謝物的詳細(xì)質(zhì)譜參數(shù)如表1所示。

表1 檢測(cè)氟蟲(chóng)腈及其代謝物的質(zhì)譜參數(shù)Table 1 Mass spectrometric parameters for the detection of fipronil and its metabolites

1.3.4 基質(zhì)效應(yīng)的計(jì)算

運(yùn)用HPLC-MS/MS進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，基質(zhì)效應(yīng)（matrix effect，ME）的影響可導(dǎo)致目標(biāo)物發(fā)生離子增強(qiáng)或抑制，從而影響定量分析的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。因此實(shí)驗(yàn)采用提取凈化后添加標(biāo)樣法建立的數(shù)學(xué)模型評(píng)定ME，按照下式計(jì)算ME：

式中：ME為基質(zhì)效應(yīng)/%；A為建立溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線后獲得的線性方程斜率；B為建立基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線后獲得的線性方程斜率。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的優(yōu)化

以靈敏度和重復(fù)性為目標(biāo)采用安捷倫ZORBAX Extend-C18（2.1 mm×100.0 mm，1.8 μm）色譜柱分離氟蟲(chóng)腈及其代謝物，實(shí)驗(yàn)考察了水-甲醇-乙腈體系對(duì)化合物峰形及質(zhì)譜強(qiáng)度的影響，發(fā)現(xiàn)水-甲醇體系反壓高，且色譜峰分離度及化合物響應(yīng)重復(fù)性均差于水-乙腈體系，因此初步選擇水-乙腈體系為流動(dòng)相。

質(zhì)譜檢測(cè)以電噴霧負(fù)離子電離源檢測(cè)作為酸性物質(zhì)的氟蟲(chóng)腈及其代謝物，向流動(dòng)相中加入氨水可促進(jìn)化合物的電離，以增強(qiáng)質(zhì)譜響應(yīng)從而提高儀器靈敏度，但賀敏等[23]在檢測(cè)韭菜與土壤中氟蟲(chóng)腈及其代謝物殘留時(shí)，發(fā)現(xiàn)待測(cè)物用酸性流動(dòng)相檢測(cè)出的色譜峰形及靈敏度均優(yōu)于堿性流動(dòng)相，因此實(shí)驗(yàn)分別采用水-乙腈溶液、0.10%甲酸-乙腈及0.10%、0.02%、0.05%的氨水-乙腈溶液作為流動(dòng)相以考察pH值對(duì)樣品響應(yīng)值的影響，所得結(jié)果與賀敏等[23]相反，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)樣品在水-乙腈溶液的條件下響應(yīng)最低，其次是0.10%甲酸-乙腈溶液，在氨水-乙腈溶液條件的響應(yīng)最高、穩(wěn)定性最好，且其響應(yīng)強(qiáng)度應(yīng)隨氨水濃度的增加而升高，這可能與ME有關(guān)，實(shí)驗(yàn)所用基質(zhì)為魚(yú)，而賀敏等[23]所用基質(zhì)為韭菜和土壤。由于0.10%氨水-乙腈溶液流動(dòng)相的pH值高達(dá)10.8，而流動(dòng)相中過(guò)高的氨水濃度會(huì)降低儀器轉(zhuǎn)子密封圈及色譜柱等儀器的使用壽命，因此，在滿足分析需求與保護(hù)實(shí)驗(yàn)器材的前提下，實(shí)驗(yàn)確定了檢測(cè)目標(biāo)物的最佳條件為0.05%氨水-乙腈溶液為流動(dòng)相。

2.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

實(shí)驗(yàn)采用流動(dòng)注射單次標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的方式將質(zhì)量濃度1 mg/L氟蟲(chóng)腈及其代謝物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液注入質(zhì)譜儀中，在負(fù)離子模式下對(duì)噴霧電壓源的碰撞誘導(dǎo)解離電壓、離子傳輸管溫度、鞘氣和輔助氣等離子源參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，進(jìn)而確定測(cè)定離子源的最佳條件。以化合物的離子峰為母離子，通過(guò)優(yōu)化質(zhì)譜的最佳碰撞能，進(jìn)而確定化合物的定量離子和定性離子。

2.3 前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

2.3.1 提取溶劑的選擇

乙腈、0.10%甲酸-乙腈、正己烷與丙酮溶液是檢測(cè)食品中氟蟲(chóng)腈及其代謝物殘留常用的提取劑[17,24-25]，實(shí)驗(yàn)比較了乙腈、0.10%甲酸-乙腈、0.30%甲酸-乙腈及正己烷-丙酮（1∶1，V/V）的提取效率。結(jié)果顯示酸化乙腈提取效率最高，其次是乙腈，正己烷-丙酮（1∶1）混合液的提取效率最低，酸化乙腈的提取效率隨甲酸濃度的增加而下降，結(jié)果如圖2所示，其原因可能與水產(chǎn)品中脂肪和蛋白含量較高有關(guān)，正己烷-丙酮（1∶1）提取液極性較低、脂溶性強(qiáng)，易將水產(chǎn)品的脂類(lèi)等干擾物萃取出來(lái)，因此共萃干擾物多，提取液較渾濁，影響了目標(biāo)物的離子化，因此回收率偏低且相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）大于50.0%。而乙腈具有較有較理想的徹底溶解目標(biāo)提取物的能力、提取效率高，對(duì)水產(chǎn)品中脂肪等非極性成分的提取能力弱、可沉淀蛋白質(zhì)，其提取液清澈透明，其中引入的甲酸可抑制作為酸性化合物的氟蟲(chóng)腈及其代謝物解離以提高溶解度，但實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)乙腈中甲酸體積分?jǐn)?shù)過(guò)高會(huì)影響回收率，因此選擇0.10%甲酸-乙腈為提取溶劑。

圖2 不同提取劑對(duì)氟蟲(chóng)腈及其代謝物回收率的影響Fig.2 Effects of different extraction solvents on the recoveries of fipronil and its metabolites

2.3.2 提取方法的選擇

乙腈可使水產(chǎn)品的蛋白質(zhì)變性，酸化乙腈提取樣品時(shí)發(fā)現(xiàn)結(jié)團(tuán)嚴(yán)重，樣品表面形成的包覆結(jié)構(gòu)阻礙了酸化乙腈與樣品的接觸，因此回收率低于30.0%。為了解決樣品結(jié)團(tuán)的問(wèn)題，實(shí)驗(yàn)比較了均質(zhì)分散溶劑法和陶瓷均質(zhì)子旋渦振蕩法的提取效率，發(fā)現(xiàn)兩者回收率均較好，均質(zhì)分散溶劑法所用的高速均質(zhì)器的強(qiáng)大剪切力可徹底粉碎提取劑中的結(jié)團(tuán)樣品，但均質(zhì)分散溶劑法1 次只能處理1 個(gè)樣品，且均質(zhì)機(jī)刀頭清洗不當(dāng)易造成樣品的交叉污染。陶瓷均質(zhì)子旋渦振蕩法是在振蕩樣品的過(guò)程中，加入陶瓷均質(zhì)子，并高速旋轉(zhuǎn)以充分?jǐn)嚢瑁瑫r(shí)打碎結(jié)團(tuán)樣品，其不僅增強(qiáng)了樣品的均勻性、分散性，還提高了目標(biāo)物回收率、重復(fù)性分別至90.1%、8.4%，可見(jiàn)陶瓷均質(zhì)子旋渦振蕩法比法均質(zhì)分散溶劑法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果更理想。陶瓷均質(zhì)子旋渦振蕩法僅需1 min完成1 次萃取，可批量處理樣品，極大地提高了工作效率，因此選陶瓷均質(zhì)子旋渦振蕩法為本實(shí)驗(yàn)的萃取方法。

2.3.3 QuEChERS凈化方法的優(yōu)化

QuEChERS凈化方法具有便捷、成本低、高效等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用于水產(chǎn)品中多種藥物殘留的測(cè)定[26-28]。鑒于水產(chǎn)品的脂肪、蛋白含量豐富，作為提取劑的酸化乙腈易將水產(chǎn)品中極性較大的雜質(zhì)提取出來(lái)，因此實(shí)驗(yàn)比較了可吸附脂類(lèi)等非極性干擾物的弗羅里硅土、中性氧化鋁、C18粉及可吸附有機(jī)酸、脂肪酸等極性雜質(zhì)的乙二胺?N?丙基硅烷共4 種吸附劑的凈化效果。結(jié)果顯示，弗羅里硅土對(duì)雜質(zhì)去除能力最差、背景干擾大，其次是中性氧化鋁粉、PSA與C18粉凈化效果最好，凈化液色澤澄清、基線平整、無(wú)明顯干擾峰，如圖3所示。在上述實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，進(jìn)一步考察了不同用量的C18粉、PSA對(duì)目標(biāo)物的影響。如圖4所示，氟蟲(chóng)腈及其代謝物回收率隨吸附劑用量的增加而降低，當(dāng)吸附劑為150 mg PSA時(shí)，4 種目標(biāo)物的回收率均達(dá)到了在100%左右的最佳水平，且RSD小于15.0%，因此選擇PSA作為凈化吸附劑，其最佳用量為150 mg。

圖3 不同凈化劑對(duì)提取液的凈化效果Fig.3 Effect of different purificants on purification efficiency

圖4 C18及PSA不同用量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響Fig.4 Effects of different amounts of C18 and PSA on experimental results

2.4 ME結(jié)果

|ME|＜10%時(shí)，ME可忽略，用溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線定量即可；10%＜|ME|＜50%時(shí)，出現(xiàn)ME增強(qiáng)或減弱現(xiàn)象，用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量可適當(dāng)消除ME對(duì)定量的影響；|ME|＞50%時(shí)，ME對(duì)定量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果干擾較大，應(yīng)優(yōu)化樣品預(yù)處理方法使ME＜50%。實(shí)驗(yàn)考察了4 種農(nóng)藥在稻花鯉、克氏原螯蝦中的ME，由表2可知，氟蟲(chóng)腈及其代謝物的|ME|均＜50%，2 種水產(chǎn)品基質(zhì)對(duì)目標(biāo)物信號(hào)影響除氟蟲(chóng)腈砜呈增強(qiáng)作用外，其余均呈抑制作用，因此實(shí)驗(yàn)采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法進(jìn)行定量計(jì)算以降低ME。

表2 基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線與溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線的比較Table 2Comparison of matrix-matched calibration with solvent calibration

2.5 方法學(xué)評(píng)價(jià)

2.5.1 線性范圍、檢出限和定量限

基于已優(yōu)化的分析條件，用空白稻花鯉及克氏原螯蝦的萃取基質(zhì)分別配制質(zhì)量濃度分別為0.5、1.0、2.0、5.0、20.0、100.0 μg/L的氟蟲(chóng)腈及其代謝物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)HPLC-MS/MS測(cè)定后，以農(nóng)藥定量離子峰面積為縱坐標(biāo)，農(nóng)藥基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以添加回收樣品信噪比為3得方法檢出限（limit of detection，LOD），以信噪比為10得方法定量限（limit of quantitation，LOQ）。4 種樣品基質(zhì)的檢測(cè)結(jié)果如表2所示，氟蟲(chóng)腈及其代謝物在質(zhì)量濃度0.5～100.0 ng/mL范圍內(nèi)線性良好，線性相關(guān)系數(shù)均大于0.999，檢出限為1.0～1.5 μg/kg，定量限為3.0～5.0 μg/kg，低于歐盟EU 1127/2014[9]對(duì)肉類(lèi)中氟蟲(chóng)腈最大殘留限量15 μg/kg及我國(guó)GB 2763—2019[10]對(duì)禽肉中氟蟲(chóng)腈最大殘留限量10 μg/kg的規(guī)定。

2.5.2 回收率與精密度

彭婕等[29]研究顯示，稻花鯉、克氏原螯蝦是我國(guó)稻田養(yǎng)殖的主要品種，蝦肉中色素含量較高，稻花鯉中脂肪含量相對(duì)較高，因此其肌肉成分差異較大，具有較好代表性。實(shí)驗(yàn)選擇稻花鯉、克氏原螯蝦進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，添加C1～C4共4 組含量分別為5.0、15.0、25.0、50.0 μg/kg的標(biāo)準(zhǔn)液，每組含量設(shè)置6 個(gè)平行實(shí)驗(yàn)的同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)，用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線后，運(yùn)用外標(biāo)法定量分析，結(jié)果見(jiàn)表3。4 種化合物的平均加標(biāo)回收率在85.2%～112.6%之間，RSD在1.2%～12.4%之間，其均小于15.0%，因此實(shí)驗(yàn)方法具有較好的回收率和重復(fù)性，符合藥物殘留檢測(cè)方法的要求，氟蟲(chóng)腈及其代謝物加標(biāo)回收色譜如圖5所示。

表3 稻花鯉和克氏原螯蝦肌肉中4 種農(nóng)藥的回收率和RSD（n=6)Table 3 Average recoveries and RSD for four pesticides in muscles of common carp and Procambarus clarkii cultured in paddy field (n= 6)

圖5 加標(biāo)稻花鯉樣品的提取離子色譜圖Fig.5 Extracted ion chromatograms of fipronil and its metabolites

2.6 實(shí)際樣品檢測(cè)結(jié)果

按實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)60 份稻田養(yǎng)殖水產(chǎn)品中氟蟲(chóng)腈及其代謝物殘留，結(jié)果如圖6所示。2 份稻花鯉樣品中檢出氟蟲(chóng)腈含量分別為16.9、14.3 μg/kg，克氏原螯蝦中無(wú)氟蟲(chóng)腈檢出，4 份稻花鯉檢出含量在3.54～4.59 μg/kg范圍內(nèi)的氟蟲(chóng)腈砜，1 份克氏原螯蝦檢出含量為10.2 μg/kg的氟蟲(chóng)腈砜，氟甲腈、氟蟲(chóng)腈亞砜在稻花鯉及克氏原螯蝦中均無(wú)檢出。而Zhang Yun等[21]也在浙江省280 份海產(chǎn)品中檢出了氟蟲(chóng)腈及氟蟲(chóng)腈砜殘留，可見(jiàn)我國(guó)水產(chǎn)品存在氟蟲(chóng)腈污染的風(fēng)險(xiǎn)。

圖6 實(shí)測(cè)樣品的氟蟲(chóng)氰提取離子色譜圖Fig.6 Extracted ion chromatogram of the measured sample of fipronil

3 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)建立了檢測(cè)稻田水產(chǎn)品中氟蟲(chóng)腈及其代謝物殘留的QuEChERS-HPLC-MS/MS法，其在樣品提取時(shí)引入陶瓷均質(zhì)子，有效解決了乙腈導(dǎo)致的樣品結(jié)塊及分散性差的問(wèn)題，并采用分散劑PSA去除樣品雜質(zhì)，與PRiME-UHPLC-MSMS法及傳統(tǒng)前處理方法相比，具有快速、簡(jiǎn)便、高效、經(jīng)濟(jì)、環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)，其涵蓋了歐盟限量規(guī)定EU 1127/2014[9]及GB 2763—2019[10]中有關(guān)氟蟲(chóng)腈的全部殘留物質(zhì)的檢測(cè)需求，可實(shí)現(xiàn)稻田水產(chǎn)品中氟蟲(chóng)腈及其代謝物殘留的快速分析，為檢測(cè)與監(jiān)管稻田水產(chǎn)品中氟蟲(chóng)腈及其代謝物殘留提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐。