洪克前 谷會(huì) 陳麗

摘 ?要：為了探究香蕉MaWRKY1轉(zhuǎn)錄因子在抗冷誘導(dǎo)過(guò)程中的作用，采用外源過(guò)氧化氫（H2O2）、茉莉酸甲酯（MeJA）、水楊酸（SA）和丙烯（propylene）等處理香蕉果實(shí)，同時(shí)采用外源H2O2、MeJA和脫落酸（ABA）等處理香蕉幼苗，處理結(jié)束后，將實(shí)驗(yàn)材料放置于7?℃下貯藏，通過(guò)Northern blot技術(shù)分析實(shí)驗(yàn)材料中MaWRKY1基因表達(dá)變化。H2O2、MeJA、SA和propylene等處理均使果實(shí)冷害癥狀推遲2?d出現(xiàn);處理組果實(shí)中MaWRKY1 mRNA積累均早且高于對(duì)照組。H2O2、MeJA和ABA等處理也均使幼苗推遲18?h顯現(xiàn)冷害癥狀;處理組幼苗中MaWRKY1基因表達(dá)提前且表達(dá)量相對(duì)較高。相比較這幾種外源性調(diào)節(jié)劑，MeJA和H2O2處理的香蕉果實(shí)和幼苗所獲得的抗冷效果優(yōu)于其他生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，同時(shí)MaWRKY1基因表達(dá)水平也比其他處理組提前或表達(dá)量更高，推測(cè)MaWRKY1可能更加積極響應(yīng)MeJA或H2O2誘導(dǎo)香蕉耐冷性

關(guān)鍵詞：香蕉;WRKY1;轉(zhuǎn)錄因子;耐冷性

Abstract： To investigate the role of MaWRKY1 in induction of chilling resistance of the banana， fruits were treated with H2O2， MeJA， SA and propylene， respectively， and seedlings were treated with H2O2， MeJA and ABA， respectively. Following treatments， fruits and seedlings were stored at 7?℃. Northern blot technique was adopted to analyze the changes of MaWRKY1 in fruits and seedlings inducted by chilling resistance. The results indicated that H2O2， MeJA， SA， and propylene treatments delayed the occurrence of chilling injury symptom of fruits by 2 d at 7?℃. MaWRKY1 mRNA accumulation in the treated fruits was earlier and higher than that of the untreated. The treatment of H2O2， MeJA， and ABA retarded the occurrence of chilling injury symptom of seedlings by 18 h at 7?℃. In addition， MaWRKY1 mRNA accumulation level was significantly earlier and higher in the treated seedlings than that of the untreated. Compared with other exogenous growth regulators， fruits and seedlings treated with MeJA， and H2O2， respectively had a better chilling resistance， and the MaWRKY1 gene expression was earlier or higher than that in other treated groups， MaWRKY1 might be more active in chilling resistance of banana fruits and seedlings inducted by MeJA or H2O2.

Keywords： banana; WRKY1; transcription factor; chilling resistance

香蕉（Musa acuminate）是世界主要水果之一，經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高，也是我國(guó)華南地區(qū)北運(yùn)和出口的主要水果[1-2]。香蕉是典型的呼吸躍變型果實(shí)，常溫下貯藏一周左右即出現(xiàn)呼吸高峰，導(dǎo)致果實(shí)迅速成熟軟化并縮短其貯藏期和貨架期。低溫貯藏可有效地抑制香蕉果實(shí)的成熟軟化，延長(zhǎng)其貯藏壽命，但香蕉果實(shí)對(duì)低溫極其敏感，在溫度低于11?℃時(shí)，即發(fā)生冷害，嚴(yán)重影響果實(shí)的商品價(jià)值[3]。施用植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑如水楊酸（SA）、茉莉酸甲酯（MeJA）、丙烯（propylene，乙烯功能類(lèi)似物）、脫落酸（ABA）和過(guò)氧化氫（H2O2）等均可提高采后香蕉果實(shí)的抗冷性[4-7]，其中許多基因包括MYC、bHLH、PAL、EPX和WRKY等參與了香蕉果實(shí)耐冷過(guò)程[6-9]。

抗冷反應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子中，WRKY是植物特有的一類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子家族。自WRKY轉(zhuǎn)錄因子最早在甜薯中發(fā)現(xiàn)以來(lái)[10]，目前許多WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族成員從多種植物中被分離出來(lái)，如擬南芥和水稻中分別有72和109個(gè)成員被鑒定出來(lái)[11-12]。WRKY轉(zhuǎn)錄因子在生物脅迫中扮演著重要角色，同時(shí)在非生物耐受性包括抗冷性方面起著重要作用[13-15]。如大豆GmWRKY21和大麥TaWRKY10轉(zhuǎn)錄因子分別在擬南芥中超表達(dá)，提高了擬南芥植株的耐冷性[15-16]，而擬南芥AtWRKY34在抗冷過(guò)程中呈現(xiàn)負(fù)調(diào)控作用[17]。目前，模式植物如擬南芥和水稻中有許多脅迫反應(yīng)相關(guān)WRKY被鑒定和研究，而非模式植物，如蔬菜和果實(shí)中有關(guān)WRKY功能方面也有相關(guān)研究[18-20]。筆者前期研究結(jié)果表明，香蕉MaWRKY1轉(zhuǎn)錄因子參與了果實(shí)抗病性[21]，而其在果實(shí)耐冷性中作用尚未見(jiàn)報(bào)道?；诖耍緦?shí)驗(yàn)通過(guò)Northern blot技術(shù)，研究誘導(dǎo)香蕉果實(shí)耐冷害響應(yīng)中MaWRKY1基因表達(dá)變化，以期進(jìn)一步了解該基因的生理功能。

1 ?材料與方法

1.1 ?材料

供試香蕉品種為‘巴西（Musa acuminate， AAA group‘Brazil），果實(shí)和幼苗分別購(gòu)自廣東省番禺香蕉果園和廣東省果樹(shù)研究所香蕉組培中心。

1.2 ?方法

1.2.1 ?材料處理 ?（1）香蕉果實(shí)抗冷性處理：采收成熟度七至八成的香蕉果實(shí)，落梳后立即運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室。每梳香蕉分成單個(gè)蕉指后，挑選果實(shí)大小相近、無(wú)病蟲(chóng)害、無(wú)機(jī)械損傷的果實(shí)300個(gè)，用0.05%（W/V）施保功進(jìn)行表面殺菌，沖洗干凈后晾干備用，然后室溫下晾30?min后裝入不封口的聚乙烯塑料袋（厚度為0.04?mm）中，每袋6個(gè)，10袋一組，共5組。第1組為對(duì)照組，果實(shí)用聚乙烯塑料袋包裝置于7?℃恒溫箱中貯藏。第2組至第5組為處理組，第2組、第3組和第4組處理參考Chen等[3]的方法進(jìn)行，分別采用1.0?mmol/L過(guò)氧化氫（H2O2）、0.1?mmol/L茉莉酸甲酯（MeJA）和1.0?mmol/L水楊酸（SA）在0.1 MPa負(fù)壓下，浸泡果實(shí)30?min。第5組處理參考Wang等[5]的方法進(jìn)行，采用1000?μL/L丙烯（propylene）處理約12?h，取出后開(kāi)蓋暴露于空氣中2?h，釋放殘留的丙烯，然后用聚乙烯薄膜袋包裝放入7?℃恒溫箱。處理結(jié)束后，果實(shí)置室溫下晾干，然后分別用聚乙烯薄膜袋包裝放入7?℃恒溫箱中貯藏。上述對(duì)照和處理材料分別在貯藏0、1、3、5、7、9、11、13?d時(shí)取樣。取樣時(shí)將香蕉的果皮與果肉分離后分別用液氮速凍并儲(chǔ)存于?80?℃?zhèn)溆谩?/p>

（2）香蕉幼苗抗冷性處理：選擇香蕉幼苗高度約30～35?cm，帶有6～7葉和1心，且心葉尚未展開(kāi)，生長(zhǎng)良好的植株。上述所選香蕉幼苗共200株，分成4組，每組50株。第1組為對(duì)照組，采用蒸餾水對(duì)幼苗進(jìn)行葉面噴施;第2組分別采用1.0?mmol/L H2O2﹑0.1?mmol/L MeJA和0.1?mmol/L ABA對(duì)香蕉幼苗進(jìn)行葉面噴施。上述2組處理完后，常溫下晾干，然后放置在7?℃恒溫箱中。分別在貯藏0、2﹑6﹑12﹑18﹑24﹑36﹑48、60?h時(shí)取樣，取樣時(shí)選取香蕉幼苗心葉下的第1葉，用液氮速凍并儲(chǔ)存于?80?℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 ?冷害指數(shù)測(cè)定 ?香蕉果實(shí)冷害指數(shù)測(cè)定參照J(rèn)iang等[22]的方法，按照香蕉果實(shí)遭受冷害嚴(yán)重程度分為5級(jí)。0級(jí)為果皮全為綠色或成熟時(shí)為黃色;2級(jí)為果皮稍顯灰色;3級(jí)為出現(xiàn)輕微的褐色凹陷小斑點(diǎn)（面積<0.3?cm2）;4級(jí)為出現(xiàn)中度褐色凹陷斑點(diǎn)（面積0.3～0.8?cm2）;5級(jí)為出現(xiàn)嚴(yán)重褐色凹陷斑點(diǎn)（面積>0.8?cm2）。統(tǒng)計(jì)9個(gè)蕉指，冷害指數(shù)=Σ（冷害級(jí)別×該級(jí)別果數(shù)所占比例）。

香蕉幼苗冷害指數(shù)測(cè)定參照韓冬芳[23]的方法，按照香蕉幼苗遭受冷害嚴(yán)重程度分為5級(jí)進(jìn)行測(cè)定。0級(jí)為葉色正常，葉片無(wú)冷害癥狀;1級(jí)為冷害輕度，葉片冷害部分僅限于葉緣，冷害面積小于整個(gè)葉面積的5%;2級(jí)為冷害中度，葉片冷害部分較少，冷害面積小于整個(gè)葉面積的40%;3級(jí)為冷害嚴(yán)重，葉片冷害部分較多，冷害面積小于整個(gè)葉面積的70%;4級(jí)為冷害極嚴(yán)重，冷害面積大于整個(gè)葉面積的70%，或整片枯死。統(tǒng)計(jì)9盆香蕉苗，冷害指數(shù)=Σ（冷害級(jí)別×該級(jí)別果數(shù)所占比例）。

1.2.3 ?總RNA提取 ?香蕉果皮（肉）及幼苗組織中總RNA的提取方法為熱硼酸法，參照Wan等[24]的方法進(jìn)行。

1.2.4 ?RNA印跡 ?取香蕉果皮（肉）及幼苗組織總RNA約10?g，在瓊脂糖凝膠（含1.2%甲醛）上進(jìn)行變性凝膠電泳。電泳后的凝膠放置2×SSC的溶液中浸洗2次，每次20?min。浸洗結(jié)束后，采用上行毛細(xì)管轉(zhuǎn)移法將變性RNA從凝膠轉(zhuǎn)移到尼龍膜（Biodyne?B 0.45?m，PALL）上，轉(zhuǎn)移完成后，將尼龍膜置于恒溫箱中80?℃烘烤約2?h，最后將含有RNA尼龍膜經(jīng)紫外交聯(lián)后存放于4?℃冰箱備用。

1.2.5 ?Northern blot ?Northern blot參考賀立紅等[25]的方法進(jìn)行，具體步驟如下：將結(jié)合有RNA的尼龍膜置于預(yù)雜交液中預(yù)雜交3?h。預(yù)雜交結(jié)束后，在雜交液中加入DIG標(biāo)記的探針，于45?℃雜交箱中雜交過(guò)夜。雜交后的尼龍膜用含有0.1% SDS的2SSC漂洗2次，每次10?min。然后再用同樣濃度的SSC在62?℃下洗2次，每次30?min，漂洗結(jié)束后用Tween-20洗去膜上未結(jié)合的抗體，最后通過(guò)化學(xué)發(fā)光原理檢測(cè)雜交信號(hào)的強(qiáng)弱。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?香蕉果實(shí)誘導(dǎo)抗冷性中冷害指數(shù)變化

如圖1所示，對(duì)照果實(shí)在7?℃下貯藏第3天開(kāi)始出現(xiàn)冷害癥狀，果皮開(kāi)始變灰色或出現(xiàn)凹陷小斑點(diǎn)，冷害指數(shù)隨貯藏時(shí)間增加顯著上升，貯藏至第11天時(shí)達(dá)最大值即5級(jí)。H2O2、MeJA、SA和propylene等處理延緩冷害癥狀出現(xiàn)且推遲冷害指數(shù)上升，處理組果實(shí)均貯藏至第5天開(kāi)始出現(xiàn)冷害癥狀，冷害指數(shù)上升較緩慢。H2O2、MeJA、SA和propylene等處理果實(shí)，貯藏至第11天時(shí)，冷害指數(shù)分別約是對(duì)照果實(shí)的60%、58%、68%和66%;經(jīng)過(guò)這些外源性生長(zhǎng)性調(diào)節(jié)劑處理，提高了果實(shí)抗冷性，延緩了冷害癥狀的發(fā)生，綜合整個(gè)貯藏期冷害指數(shù)的變化，MeJA處理組比其他處理組抗冷效果更好。

2.2 ?果皮中MaWRKY1基因表達(dá)分析

外源H2O2、MeJA、SA和propylene處理香蕉果實(shí)后置于7?℃低溫貯藏，以Northern blot檢測(cè)果實(shí)中MaWRKY1基因表達(dá)。結(jié)果表明，對(duì)照組果皮第3天即有MaWRKY1基因表達(dá)，至第5天表達(dá)量最高，之后逐漸下降;H2O2、MeJA、SA和propylene等處理組果皮中，MaWRKY1第1天均被誘導(dǎo)表達(dá)，MeJA處理組基因表達(dá)明顯高于其他處理組;處理組MaWRKY1表達(dá)量峰值均在第3天，隨后呈下降模式，但在第11天和第13天，MeJA處理基因表達(dá)依然高于其他處理組（圖2）。綜合以上結(jié)果，與對(duì)照和其他處理組相比，MeJA處理組更能快速、持久地誘導(dǎo)MaWRKY1基因的表達(dá)。

2.3 ?果肉中MaWRKY1基因表達(dá)分析

如圖3所示，對(duì)照組果肉中MaWRKY1基因第5天開(kāi)始表達(dá)，表達(dá)趨勢(shì)較為平穩(wěn)。盡管H2O2處理組與對(duì)照組相比，MaWRKY1初始表達(dá)時(shí)間基本一致，但其基因表達(dá)量明顯高于對(duì)照組。MeJA、SA和propylene等處理組果肉中，MaWRKY1基因表達(dá)分別出現(xiàn)在第3天、第3天和第1天，明顯早于對(duì)照組MaWRKY1基因表達(dá);并且，處理組中基因表達(dá)量顯著高于對(duì)照組。

2.4 ?香蕉幼苗誘導(dǎo)抗冷性中冷害指數(shù)變化

由圖4可知，對(duì)照組幼苗在7?℃低溫貯藏18?h時(shí)出現(xiàn)冷害癥狀，H2O2、MeJA和ABA等處理組低溫貯藏36?h時(shí)顯現(xiàn)輕微冷害癥狀，冷害指數(shù)均約為0.2，而對(duì)照組冷害指數(shù)則接近0.6，差異顯著。低溫貯藏至60?h，對(duì)照組幼苗已死亡（冷害指數(shù)達(dá)1.0級(jí)），H2O2、MeJA和ABA等處理組冷害指數(shù)僅為0.4～0.6。經(jīng)H2O2、MeJA和ABA等處理，延緩了香蕉幼苗冷害癥狀的出現(xiàn)，減輕了冷害程度的發(fā)生，相比較而言，H2O2和MeJA處理組幼苗具有較低的冷害指數(shù)，暗示這2個(gè)處理組抗冷效果較好。

2.5 ?香蕉幼苗組織中MaWRKY1基因表達(dá)分析

Northern-blot檢測(cè)結(jié)果表明，對(duì)照葉片中MaWRKY1在7?℃低溫貯藏12?h有微弱表達(dá)，之后表達(dá)量基本恒定，低溫貯藏48?h表達(dá)量達(dá)到峰值，隨后其表達(dá)量下降。外源H2O2、MeJA和ABA處理組葉片中MaWRKY1在低溫貯藏2?h均有表達(dá)，低溫貯藏18、24、24?h，其表達(dá)量開(kāi)始逐漸升高，低溫貯藏48?h表達(dá)量均達(dá)到峰值（圖5）;與對(duì)照相比，H2O2等處理組MaWRKY1基因表達(dá)提前，且表達(dá)量顯著增加。說(shuō)明在外源H2O2、MeJA和ABA處理提高香蕉葉片抗冷性過(guò)程中，誘導(dǎo)了MaWRKY1表達(dá)。

3 ?討論

采后香蕉果實(shí)對(duì)低溫敏感，容易遭受冷害，嚴(yán)重制約果實(shí)的貯藏、運(yùn)輸和銷(xiāo)售等。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑包括過(guò)氧化氫（H2O2）、茉莉酸甲酯（MeJA）、水楊酸（SA）、和丙烯（propylene，乙烯類(lèi)似物）等在香蕉果實(shí)抗冷性方面發(fā)揮重要作用[4-5]。本實(shí)驗(yàn)中未經(jīng)處理的對(duì)照組果實(shí)放置在7?℃下貯藏，第3天出現(xiàn)冷害癥狀，經(jīng)H2O2、MeJA、SA和丙烯等處理的果實(shí)均比對(duì)照組推遲2?d出現(xiàn)冷害癥狀。龐學(xué)群等[4]報(bào)道，采用外源H2O2、SA和MeJA等處理香蕉果實(shí)放置7?℃下貯藏，對(duì)照果實(shí)也是貯藏第3天出現(xiàn)冷害癥狀，但處理組比對(duì)照果實(shí)延緩2～5?d出現(xiàn)冷害癥狀。Wang等[5]報(bào)道丙烯處理香蕉果實(shí)放置7?℃下貯藏，對(duì)照果實(shí)第4天出現(xiàn)冷害癥狀，處理比對(duì)照果實(shí)延緩3?d出現(xiàn)冷害癥狀。本研究采用H2O2、MeJA、SA和丙烯等處理香蕉果實(shí)，誘導(dǎo)果實(shí)抗冷性效果與龐學(xué)群等[4]和Wang等[5]報(bào)道的并非完全一致。筆者分析認(rèn)為，可能香蕉果實(shí)成熟度、產(chǎn)地、采收季節(jié)和采前管理措施等因素不同，導(dǎo)致不同研究者所得結(jié)果稍有不同。但本研究與龐學(xué)群等[4]和Wang等[5]所得結(jié)果也有相同點(diǎn)，即H2O2、SA、丙烯和MeJA等處理香蕉果實(shí)均延緩了冷害癥狀的出現(xiàn)，提高了果實(shí)的抗冷性。

為了應(yīng)對(duì)低溫，植物進(jìn)化出復(fù)雜的生理和生物化學(xué)機(jī)制以適應(yīng)低溫脅迫，在分子水平上誘導(dǎo)脅迫響應(yīng)基因包括低溫調(diào)節(jié)基因和低溫功能基因的表達(dá)[26]。轉(zhuǎn)錄因子作為一種重要的調(diào)節(jié)基因，在響應(yīng)脅迫信號(hào)和調(diào)節(jié)功能基因的表達(dá)方面發(fā)揮重要作用[27]。誘導(dǎo)基因轉(zhuǎn)錄是植物對(duì)低溫脅迫的反應(yīng)，目前已從香蕉果實(shí)鑒定出多個(gè)響應(yīng)低溫誘導(dǎo)WRKY轉(zhuǎn)錄因子，其中包括MaWRKY11[2]、MaWRKY26[28]和MaWRKY31、MaWRKY33、MaWRKY60、MaWRKY71[7]。本研究中，7?℃下貯藏，幼嫩的香蕉葉片中MaWRKY1轉(zhuǎn)錄因子mRNA積累在貯藏12?h便顯現(xiàn)出來(lái)，果皮中MaWRKY1 mRNA積累在第3天開(kāi)始顯現(xiàn)，果肉中mRNA積累稍慢，在貯藏5?d時(shí)開(kāi)始出現(xiàn)。表明MaWRKY1響應(yīng)了低溫脅迫，但不同組織對(duì)低溫響應(yīng)所需時(shí)間不同，呈誘導(dǎo)型表達(dá);同時(shí)該研究拓展了MaWRKY家族響應(yīng)低溫的新成員。

WRKY轉(zhuǎn)錄因子在植物應(yīng)答逆境脅迫中發(fā)揮重要作用，很多WRKY轉(zhuǎn)錄因子能被逆境信號(hào)誘導(dǎo)表達(dá)，參與多種信號(hào)途徑的傳導(dǎo)，其中包括JA、SA、ABA和ET等信號(hào)通路[29]。因此，WRKY轉(zhuǎn)錄因子受多種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑調(diào)控，包括MeJA、SA、乙烯和ABA[6]。逆境脅迫所激活激素信號(hào)途徑，相關(guān)基因表達(dá)水平進(jìn)而發(fā)生變化。例如，擬南芥AtWRKY70轉(zhuǎn)錄因子參與抗病中可以分別被外源SA和JA誘導(dǎo)和抑制[30]，煙草NtWRKY4在抗煙草花葉病毒中被SA誘導(dǎo)表達(dá)[31]。MeJA作為JA的甲酯衍生物，參與植物信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，調(diào)節(jié)低溫脅迫防御反應(yīng)，從而提高植物對(duì)低溫的耐受性[32]。施用外源MeJA能提高多種果蔬的耐冷性和減輕冷害的發(fā)生率[28， 33]。

本研究中，H2O2、MeJA和SA等誘導(dǎo)香蕉果實(shí)耐冷性過(guò)程中，MaWRKY1轉(zhuǎn)錄因子呈現(xiàn)類(lèi)似的表達(dá)模式，這些信號(hào)分子均使MaWRKY1表達(dá)提前且表達(dá)量顯著上調(diào)，果皮和果肉中MaWRKY1基因表達(dá)峰值均在第3天和第7天出現(xiàn);但香蕉幼苗中MaWRKY1響應(yīng)H2O2和MeJA誘導(dǎo)模式不同，前者中MaWRKY1表達(dá)時(shí)間更早且表達(dá)量（貯藏36?h前）明顯高于后者。MaWRKY1響應(yīng)ET誘導(dǎo)香蕉果實(shí)耐冷性過(guò)程中，盡管貯藏第5天處理組果皮中MaWRKY1基因表達(dá)稍微低于對(duì)照，但其他時(shí)間點(diǎn)前者基因表達(dá)量明顯高于后者，推測(cè)MaWRKY1作為轉(zhuǎn)錄因子，主要在貯藏前期（第3天前）通過(guò)高量表達(dá)，調(diào)節(jié)抗冷相關(guān)基因，進(jìn)而提高香蕉耐冷性。

ABA作為一種重要的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，調(diào)控WRKY轉(zhuǎn)錄因子參與的抗逆反應(yīng)。如小麥中的TaWRKY1和TaWRKY33轉(zhuǎn)錄因子參與了ABA誘導(dǎo)的耐旱性[34];香蕉MaWRKY31、MaWRKY33、MaWRKY60和MaWRKY71等轉(zhuǎn)錄因子在ABA調(diào)控果實(shí)抗冷性中具有重要作用[7]。本研究中，ABA處理減輕香蕉幼苗冷害發(fā)生的同時(shí)，誘導(dǎo)了MaWRKY1基因表達(dá)量增加，可能MaWRKY1參與了ABA誘導(dǎo)的幼苗耐冷性。

綜上所述，外源H2O2、MeJA、SA、ABA和propylene等誘導(dǎo)了香蕉耐冷性，這些外源生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑可能通過(guò)不同的信號(hào)途徑，如SA、ABA和JA/ET等激活了MaWRKY1 mRNA的積累，MaWRKY1進(jìn)一步調(diào)節(jié)下游的功能基因的表達(dá)，進(jìn)而提高了香蕉耐冷性;綜合分析H2O2等處理對(duì)香蕉冷害指數(shù)和MaWRKY1 mRNA積累時(shí)間和量的變化模式，認(rèn)為適宜濃度的外源MeJA和H2O2處理的香蕉果實(shí)和幼苗所獲得的抗冷效果優(yōu)于其他植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。但MaWRKY1如何響應(yīng)低溫脅迫，通過(guò)何種信號(hào)途徑通路調(diào)節(jié)相應(yīng)的功能基因還需要深入探討。

參考文獻(xiàn)

徐群剛， 鄺健飛， 單 偉， 等. 香蕉果實(shí)冷脅迫相關(guān)MaWRKY11轉(zhuǎn)錄因子的特性、互作蛋白篩選與鑒定[J]. 熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào)， 2015， 23（5）： 543-552.

Feng B H， Han Y C， Xiao Y Y， et al. The banana fruit Dof transcription factor MaDof23 acts as a repressor and interacts with MaERF9 in regulating ripening-related genes[J]. Journal of Experimental Botany， 2016， 67（8）： 2263-2275.

Chen J Y， He L H， Jiang Y M， et al. Role of phenylalanine ammonia-lyase in heat pretreatment-induced chilling tolerance in banana fruit[J]. Physiologia Plantarum， 2008， 132（3）： 318-328.

龐學(xué)群， 潘少麗， 王海波， 等. 過(guò)氧化氫在香蕉果實(shí)采后耐冷性誘導(dǎo)中的作用[J]. 園藝學(xué)報(bào)， 2007， 34（6）： 1373- 1378.

Wang Y， Chen J Y， Jiang Y M， et al. Cloning and expression analysis of phenylalanine ammonia-lyase in relation to chilling tolerance in harvested banana fruit[J]. Postharvest Biology and Technology， 2007， 44（1）： 34-41.

Zhao M L， Wang J N， Shan W， et al. Induction of jasmonate signalling regulators MaMYC2s and their physical interactions with MaICE1 in methyl jasmonate-induced chilling tolerance in banana fruit[J]. Plant Cell and Environment， 2013， 36（1）： 30-51.

Luo D L， Ba L J， Shan W， et al. Involvement of WRKY transcription factors in abscisic-acid-induced cold tolerance of banana fruit[J]. Journal of Agricultural and Food Chemestry， 2017， 65（18）： 3627-3635.

Wang Y， Lu W J， Jiang Y M， et al. Expression of ethylene-related expansin genes in cool-stored ripening banana fruit[J]. Plant Science， 2006， 170（5）： 962-967.

Peng H H， Shan W， Kuang J F， et al. Molecular characterization of cold-responsive basic helix-loop-helix transcription factors MabHLHs that interact with MaICE1 in banana fruit[J]. Planta， 2013， 238（5）： 937-953.

Ishiguro S， Nakamura K. Characterization of a cDNA encoding a novel DNA-binding protein， SPF1， that recognizes SP8 sequences in the 5′upstream regions of genes coding for sporamin and β-amylase from sweet potato[J]. Molecular and General Genetics， 1994， 244（6）： 563-571.

Zhang Y， Wang L. The WRKY transcription factor superfamily： its origin in eukaryotes and expansion in plants[J]. BMC Evolutionary Biology， 2005， 5（1）： 1-12.

Eulgem T， Somssich I E. Networks of WRKY transcription factors in defense signaling[J]. Current Opinion in Plant Biology， 2007， 10（4）： 366-371.

Bakshi M， Oelm?ller R. WRKY transcription factors： Jack of many trades in plants[J]. Plant Signaling & Behaviour， 2014， 9（2）： e27700.

Manerjee A， Roychoudhury A. WRKY proteins： signaling and regulation of expression during abiotic stress responses[J]. The Scientific World Journal， 2015： 807560.

Zhou Q Y， Tian A G， Zou H F， et al. Soybean WRKY-type transcription factor genes， GmWRKY13， GmWRKY21， and GmWRKY54， confer differential tolerance to abiotic stresses in transgenic Arabidopsis plants[J]. Plant Biotechnology Journal， 2008， 6（5）： 486-503.

Niu C F， Wei W， Zhou Q Y， et al. Wheat WRKY genes TaWRKY2 and TaWRKY19 regulate abiotic stress tolerance in transgenic Arabidopsis plants[J]. Plant Cell & Environment， 2012， 35（6）： 1156-1170.

Zou C， Jiang W， Yu D. Male gametophyte-specific WRKY34 transcription factor mediates cold sensitivity of mature pollen in Arabidopsis[J]. Journal of Experimental Botany， 2010， 61（14）： 3901-3914.

Guo R R， Qiao H B， Zhao J， et al. The grape VlWRKY3 gene promotes abiotic and biotic stress tolerance in transgenic Arabidopsis thaliana[J]. Frontiers in Plant Science， 2018， 9： 545.

Liu W J， Wang Y C， Yu L， et al. MdWRKY11 participates in anthocyanin accumulation in red-fleshed apples by affecting MYB transcription factors and the photoresponse factor MdHY5[J]. Journal of Agricultural Food Chemistry， ?2019， 67（32）： 8794-8809.

Nan H， Gao L Z. Genome-wide analysis of WRKY genes and their response to hormone and mechanic stresses in carrot[J]. Frontiers in Genetics， 2019， 10： 363.

Tang Y， Kuang J F， Wang F Y， et al. Molecular characterization of PR and WRKY genes during SA-and MeJA-induced resistance against Colletotrichu mmusae in banana fruit[J]. Postharvest Biology and Technology， 2013， 79： 62-68.

Jiang Y M， Joyce D C， Jiang W B， et al. Effects of chilling temperatures on ethylene binding by banana fruit[J]. Plant Growth Regulation， 2004， 43（2）： 109-115.

韓冬芳. 外源甜菜堿提高香蕉抗寒性的作用及其機(jī)理的研究[D]. 廣州： 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2007.

Wan C Y， Wilkins T A. A modified hot borate method significantly enhances the yield of high-quality RNA from cotton （Gossypium hirsutum L）[J]. Analytical Biochemistry， 1994， 223（1）： 7-12.

賀立紅， 陳建業(yè)， 于偉民， 等. 香蕉果實(shí)乙烯受體基因克隆及其表達(dá)特性[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2009， 42（4）： 1359-1364.

Knight M R， Knight H. Low-temperature perception leading to gene expression and cold tolerance in higher plants[J]. New Phytologist， 2012， 195（4）： 737-751.

Gong X Q， Zhang J Y， Hu J B， et al. FcWRKY70， a WRKY protein of Fortunella crassifolia， functions in drought tolerance and modulates putrescine synthesis by regulating arginine decarboxylase gene[J]. Plant Cell & Environment， 2015， 38（11）： 2248-2262.

Ye Y J， Xiao Y Y， Han Y C， et al. Banana fruit VQ motif-containing protein5 represses cold-responsive transcription factor MaWRKY26 involved in the regulation of JA biosynthetic genes[J]. Scientific Reports， 2016， 6： 23632.

Thomma B P， Eggermont K， Tierens K F， et al. Requirement of functional ethylene-insensitive 2 gene for efficient resistance of Arabidopsis to infection by Botrytis cinerea[J]. Plant Physiology， 1999， 121（4）： 1093-1102.

Li J， Brader G， Palva E T. The WRKY70 transcription factor： a node of convergence for jasmonate-mediated and salicylate-mediated signals in plant defense[J]. Plant Cell， 2004， 16（2）： 319-331.

Ren X J， Huang W D， Li W Z， et al. Tobacco transcription factor WRKY4 is a modulator of leaf development and disease resistance[J]. Biologia Plantarum， 2010， 54（4）： 684- 690.

Creelman R A， Mullet J E. Biosynthesis and action of jasmonates in plants[J]. Annual Review of Plant Physiology and Plant Molecular Biology， 1997， 48： 355-381.

Ding C K， Wang C Y， Gross K C， et al. Reduction of chilling injury and transcript accumulation of heat shock proteins in tomato fruit by methyl jasmonate and methyl salicylate[J]. Plant Science， 2001， 161（6）： 1153-1159.

He G H， Xu J Y， Wang Y X， et al. Drought-responsive WRKY transcription factor genes TaWRKY1 and TaWRKY33 from wheat confer drought and/or heat resistance in Arabidopsis[J]. BMC Plant Biology， 2016， 16（1）： 116.

責(zé)任編輯：黃東杰