劉怡菲

(遼寧省林業(yè)科學(xué)研究院，遼寧 沈陽(yáng) 110032)

軟棗獼猴桃Actinidiaarguta屬獼猴桃科，是大型落葉藤本植物。軟棗獼猴桃含有多種功能性成分，如黃酮、多糖、多酚和花青素等，是富含優(yōu)質(zhì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的食療果實(shí)[1-3]。同時(shí)軟棗獼猴桃具有豐富的藥用價(jià)值，其活性成分能夠強(qiáng)身健體[4-6]。多糖，廣泛存在自然界，是具有重要生理功能的天然大分子物質(zhì)，軟棗獼猴桃多糖逐漸受到消費(fèi)者青睞[7-8]。本研究以軟棗獼猴桃多糖為對(duì)象,通過(guò)對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃軟棗獼猴桃多糖，分析小鼠外周血中總T細(xì)胞、總B細(xì)胞、輔助T細(xì)胞、毒性T細(xì)胞和NK細(xì)胞變化情況，為軟棗獼猴桃多糖對(duì)小鼠免疫系統(tǒng)影響的進(jìn)一步研究提供理論基礎(chǔ)及科學(xué)指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料為購(gòu)于遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司的6周齡雌性小鼠，共20只，將小鼠隨機(jī)分為試驗(yàn)組和對(duì)照組，對(duì)照組即健康小鼠，試驗(yàn)組即軟棗獼猴桃多糖灌胃處理小鼠。試驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠均飼養(yǎng)于無(wú)菌動(dòng)物房中，動(dòng)物房中設(shè)置12 h光/暗環(huán)境交替處理，自由飲水，汲食。

軟棗獼猴桃多糖制備：參照王美月等[9]方法，采取超聲輔助乙醇提取法制備軟棗獼猴桃多糖。取軟棗獼猴桃粉末5 g，超聲提取一定時(shí)間，待提取液回收濃縮至原體積的1/10時(shí)，加10倍體積的乙醇，靜置12 h，離心，干燥，取適量熱水超聲溶解，100 mL容量瓶定容，取上清液1.0 mL，干燥后提取多糖，反復(fù)多次重復(fù)上述步驟制備多糖。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 軟棗獼猴桃多糖灌胃處理

軟棗獼猴桃多糖處理組：每只小鼠灌胃200 μL制備好的軟棗獼猴桃多糖(4 mg·mL-1)；對(duì)照組：每只小鼠灌胃200 μL無(wú)菌水。兩組小鼠每日灌胃1次，連續(xù)灌胃7 d。

1.2.2 外周血收集和免疫細(xì)胞分離

采用面靜脈采血法收集小鼠外周血，采血時(shí)間分別為0、7、14和28 d。外周血采集后用紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞，PBS磷酸鹽緩沖液清洗2次，收集淋巴細(xì)胞。用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，用FlowJo軟件進(jìn)行結(jié)果分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 軟棗獼猴桃多糖灌胃處理對(duì)總T細(xì)胞和總B細(xì)胞的效應(yīng)

從圖1可以看出，軟棗獼猴桃多糖灌胃處理7天后，試驗(yàn)組總T細(xì)胞比例與對(duì)照組沒(méi)有明顯差異。然而，第14天檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，外周血中總T細(xì)胞比例明顯上升，此時(shí)試驗(yàn)組總T細(xì)胞比例為55.01%±3.17%，對(duì)照組為45.23%±0.21%，兩者差異顯著(P<0.05)。第21天，試驗(yàn)組小鼠外周血中總T細(xì)胞含量降低至49.15%±1.26%，與對(duì)照組46.23%±0.77%沒(méi)有顯著差異(P>0.05)。因此，軟棗獼猴桃多糖灌胃處理對(duì)小鼠外周血中總T細(xì)胞比例有短暫的促進(jìn)作用。

軟棗獼猴桃多糖灌胃處理7 d后，試驗(yàn)組外周血中總B細(xì)胞比例明顯下降，試驗(yàn)組總B細(xì)胞比例為18.77%±2.13%，對(duì)照組為27.81%±0.15%，兩者差異顯著 (P<0.05)。第14天檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組小鼠外周血中總B細(xì)胞含量降低至14.86%±1.25%，與對(duì)照組31.23%±0.73%沒(méi)有顯著差異(P>0.05)。因此，軟棗獼猴桃多糖處理對(duì)小鼠外周血中B細(xì)胞比例有著長(zhǎng)效的抑制作用。

圖1 灌胃處理對(duì)小鼠外周血中總T細(xì)胞和總B細(xì)胞的效應(yīng)

2.2 軟棗獼猴桃多糖灌胃處理對(duì)輔助T細(xì)胞和毒性T細(xì)胞的效應(yīng)

從圖2可以看出，軟棗獼猴桃多糖灌胃處理7 d后，試驗(yàn)組外周血中輔助T細(xì)胞比例明顯上升，試驗(yàn)組總T細(xì)胞比例31.022%±1.24%，對(duì)照組26.25%±1.25%，兩者差異顯著(P<0.05)。14 d時(shí)，試驗(yàn)組小鼠外周血中輔助T細(xì)胞含量升至42.88%±1.32%，與對(duì)照組31.25%±0.35%差異不顯著(P>0.05)。因此，軟棗獼猴桃多糖灌胃處理對(duì)小鼠外周血中輔助T細(xì)胞比例有短暫的促進(jìn)作用。

圖2 灌胃處理對(duì)小鼠外周血中輔助T細(xì)胞和毒性T細(xì)胞的效應(yīng)

軟棗獼猴桃多糖灌胃處理7 d后，試驗(yàn)組毒性T細(xì)胞比例為12.13%±0.56%，健康對(duì)照組為9.56%±0.21%，兩者差異顯著 (P<0.05)。14 d，試驗(yàn)組毒性T細(xì)胞含量升高至14.11%±0.28%，與對(duì)照組13.56%±0.13%無(wú)顯著差異 (P>0.05)。因此，軟棗獼猴桃多糖處理對(duì)小鼠外周血中毒性T細(xì)胞比例有長(zhǎng)效的抑制作用。

2.3 軟棗獼猴桃多糖灌胃處理對(duì)NK細(xì)胞的效應(yīng)

軟棗獼猴桃多糖灌胃處理7 d后，試驗(yàn)組外周血中NK細(xì)胞比例有所上升，試驗(yàn)組毒性T細(xì)胞比例為26.32%±0.23%，對(duì)照組為23.95%±0.17%，兩者差異不顯著(P>0.05)。14 d試驗(yàn)組小鼠外周血中NK細(xì)胞含量升高至29.56%±0.48%，與對(duì)照組18.98%± 0.46%差異顯著(P<0.05)。因此，軟棗獼猴桃多糖處理對(duì)小鼠外周血中NK細(xì)胞的比例有著一個(gè)延遲且瞬時(shí)的促進(jìn)效應(yīng)。

圖3 灌胃處理對(duì)小鼠外周血中NK細(xì)胞的效應(yīng)

3 結(jié) 論

本研究結(jié)果顯示軟棗獼猴桃多糖對(duì)小鼠外周血中不同類型免疫細(xì)胞有顯著的差異效應(yīng)。軟棗獼猴桃多糖灌胃處理之后T細(xì)胞的比例逐漸升高然后下降至接近未處理組水平，然而B細(xì)胞的比例劇烈下降而后緩慢恢復(fù)。軟棗獼猴桃多糖連續(xù)灌胃處理7天后，小鼠外周血中B細(xì)胞含量降低，外周血中總T細(xì)胞的比例在軟棗獼猴桃多糖灌胃處理1周后明顯增加，這表明軟棗獼猴桃多糖對(duì)T細(xì)胞的增殖分化有著瞬時(shí)的促進(jìn)作用。軟棗獼猴桃多糖刺激毒性T細(xì)胞和輔助T細(xì)胞的合成，因此推測(cè)軟棗獼猴桃多糖可能有利于機(jī)體免疫系統(tǒng)功能的提升。