超高效液相色譜法測(cè)定牛奶中的紐甜含量

李肖斐 李鵬 勇艷華 劉怡君 胡俠

（大連產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)檢測(cè)研究院有限公司，遼寧 大連 116630）

紐甜是一種新型、高效、非營養(yǎng)型甜味劑，其甜度為砂糖8000 倍左右，可供糖尿病人食用；由于其甜度大，穩(wěn)定性高，安全，被廣泛應(yīng)用于食品中，國內(nèi)產(chǎn)品中的乳飲料中有標(biāo)簽標(biāo)識(shí)添加紐甜，《中華人民共和國食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)GB2760-2014》中對(duì)調(diào)制乳和風(fēng)味發(fā)酵乳中的紐甜限量要求分別為0.02g/kg 和0.1g/kg。對(duì)國內(nèi)外文獻(xiàn)檢索，紐甜的測(cè)定方法較少，且復(fù)雜基質(zhì)的凈化較復(fù)雜或者不做凈化，效率低且不易定性，本方法建立了用新型固相萃取凈化雜質(zhì)的檢驗(yàn)方法，步驟簡(jiǎn)單，回收率高，檢出限低，非常適合大批量的樣品處理。

一、實(shí)驗(yàn)部分

（一）儀器與試劑與材料

Agilent 1260 高效液相色譜儀（配有二極管陣列檢測(cè)器）；高速冷凍離心機(jī)；渦旋振蕩器；氮吹濃縮儀；分析天平；乙腈、甲醇、醋酸銨（色譜純）；試驗(yàn)用水為超純水；Waters oasis PRIMe HLB 固相萃取柱：6mL、200mg；紐甜標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥99%；0.22μm 尼龍膜。

（二）標(biāo)準(zhǔn)品配制：

紐甜標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取一定量的紐甜標(biāo)準(zhǔn)品，加水定容至100mL，使溶液紐甜含量為1.00mg/mL。

（三）樣品前處理

準(zhǔn)確稱取液體奶1g 于10mL 具塞塑料離心管中，加入4mL 的乙腈，旋渦震蕩3min，超聲10min 后，以10000r/min 離心3min，上清液倒入固相萃取柱中（固相萃取柱不需要活化），收集流出液，待樣品全部流出后，將收集液氮?dú)獯蹈桑?mL 流動(dòng)相定容，渦旋，0.45μm 濾膜過濾后，供液相色譜儀分析。

（四）基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

準(zhǔn)確吸取一定量的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，加入空白樣品中，按照1.3 的前處理步驟進(jìn)行前處理，所得的上機(jī)溶液作為標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。

（五）儀器條件

色譜柱：poroshell 120 EC-C18 3.0×50mm 2.7μm

流動(dòng)相：25%乙腈（0.01mol/L醋酸銨溶液）0.01mol/L醋酸銨溶液的配制：稱取2.64g 醋酸銨，用超純水定容至1L。

流速：1.0mL/min

波長：218nm

進(jìn)樣量：20μL

（六）試樣溶液的測(cè)定

將試樣溶液注入液相色譜儀中，以保留時(shí)間定性，同時(shí)記錄峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液中紐甜的濃度，試樣溶液中紐甜含量的響應(yīng)值應(yīng)在儀器的檢測(cè)線性范圍內(nèi)。

二、結(jié)果與分析

（一）標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍

以標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，相關(guān)性系數(shù)R2=0.99949，紐甜在此0～50μg/mL 線性范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

（二）回收率與精密度

在空白樣品基質(zhì)中添加2、5、10、20mg/kg 水平的紐甜標(biāo)準(zhǔn)溶液，按本實(shí)驗(yàn)的前處理方法，平行測(cè)定4 次，進(jìn)行分析，測(cè)得數(shù)據(jù)與RSD 如下表：

表1.

（三）流動(dòng)相的選擇

通過比對(duì)不同有機(jī)相的比例，25%乙腈（10mmol/L 醋酸銨）目標(biāo)物保留時(shí)間合適，與樣品中的雜質(zhì)的分離度也很好。

（四）色譜柱的選擇

選擇小粒徑的色譜柱，實(shí)現(xiàn)UPLC，具有高的分離度、靈敏度，實(shí)現(xiàn)高效率。