郝帥, 李爽, 劉媛璞, 王靜, 趙磊, 王成濤

(1.北京工商大學(xué) 食品與健康學(xué)院，北京 100048;2.北京食品營(yíng)養(yǎng)與人類健康高精尖創(chuàng)新中心,北京 100048;3.北京市食品添加劑工程技術(shù)研究中心,北京 100048)

肺癌是威脅人類健康最常見的惡性腫瘤之一,也是我國(guó)的第一大癌癥,其中非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)占比約為85%,有較高的死亡率[1-2].目前肺癌治療方法主要以外科手術(shù)或放化療等傳統(tǒng)的方法為主[3],但大多數(shù)肺癌患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已經(jīng)進(jìn)入中晚期,這些傳統(tǒng)的治療手段并不能有效地提高腫瘤患者生存率[4].其次,肺癌早期臨床診斷方法敏感度低、特異性差,治療過程又缺乏有效的分子標(biāo)志物進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)指導(dǎo)治療,因此,對(duì)于NSCLC的靶向治療研究顯得尤為重要[5].

miRNAs(microRNAs)是一類內(nèi)源性的、約有19～23個(gè)核苷酸組成的單鏈非編碼RNA,可以調(diào)控真核細(xì)胞諸多生理活動(dòng),包括細(xì)胞增殖、浸潤(rùn)、遷移、凋亡等.它們能夠和靶基因的3’非翻譯區(qū)配對(duì)結(jié)合,使得靶基因的表達(dá)水平在轉(zhuǎn)錄后受到抑制[6-8].研究表明,miRNAs與包括NSCLC在內(nèi)的多種癌癥的調(diào)控過程相關(guān)[9].

miRNA在不同腫瘤的發(fā)展過程中擔(dān)任不同作用[10]:既能擔(dān)當(dāng)抑癌因子,又作為致癌因子調(diào)控腫瘤生長(zhǎng)、遷移進(jìn)程[11-12],因此,miRNA的特異性表達(dá)在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起到關(guān)鍵作用.MONTERDE-CRUZ等[13]對(duì)骨肉瘤患者與健康供者血清進(jìn)行了miRNA差異分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與健康對(duì)照組相比,miR-642a-5p在骨肉瘤中出現(xiàn)過表達(dá),提示miR-642a-5p可以作為骨肉瘤的潛在標(biāo)志物.LIN等[14]通過分析癌癥基因組圖譜和結(jié)腸癌患者的測(cè)序數(shù)據(jù),發(fā)現(xiàn)了miR-642a-5p的ceRNA調(diào)控機(jī)制,確定了LINC01234-miR642a-5p-SHMT2在結(jié)腸癌增殖中起關(guān)鍵作用,為結(jié)腸癌的診斷和治療提供了一個(gè)潛在的新靶點(diǎn).在前期研究中,發(fā)現(xiàn)天然功能性食用色素藻藍(lán)蛋白(phycocyanin,PC)能夠顯著抑制非小細(xì)胞肺癌的增殖和遷移[15-16],但深入的調(diào)控機(jī)制尚不清楚.藻藍(lán)色素是一種源于螺旋藻、藍(lán)藻細(xì)胞中的捕光蛋白,在螺旋藻中含量較高[17],由脫輔基蛋白亞基(α,β)和藻藍(lán)素輔基結(jié)合形成的水溶性蛋白復(fù)合體,是藻膽蛋白的重要組成部分.藻藍(lán)色素除了作為優(yōu)良的食品著色劑,還兼具抗氧化、抗病毒、抗炎癥等多種生理功能,是一種重要的藥食同源型食品添加劑[18-19].文中以非小細(xì)胞費(fèi)肺癌LTEP-a2細(xì)胞為模型,尋找藻藍(lán)蛋白抑制細(xì)胞活性的關(guān)鍵miRNA,從小分子層面探究其調(diào)控規(guī)律為NSCLC的治療提供了理論依據(jù).

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

人類非小細(xì)胞肺癌LTEP-a2細(xì)胞由本實(shí)驗(yàn)室自主保存;miR-642a-5p mimics/Neg.mimics、Hairpin-it miRNAs定量試劑盒購(gòu)自上海吉瑪制藥有限公司;NF-κB抗體試劑盒購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology公司;MMP2和MMP9購(gòu)自美國(guó)abcam抗體公司;藻藍(lán)色素蛋白標(biāo)品購(gòu)自賓美生物公司;藻藍(lán)色素標(biāo)品購(gòu)自賓美生物;胎牛血清購(gòu)自天津康源生物技術(shù)有限公司;1%青霉素-鏈霉素雙抗、1×PBS緩沖溶液購(gòu)自美國(guó)Corning公司;胰酶細(xì)胞消化液、姬姆薩染液、四甲基偶氮唑藍(lán)MTT購(gòu)自碧云天生物技術(shù)有限公司;RIPA裂解液、PMSF蛋白酶抑制劑、磷酸化蛋白酶抑制劑購(gòu)自北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限公司;PVDF膜購(gòu)自Millipore公司;Protein Maker購(gòu)自天根生物技術(shù)有限公司;BD脫脂奶粉購(gòu)自美國(guó)BD公司;ECL化學(xué)發(fā)光液購(gòu)自Millipore公司.

DNA濃度測(cè)定儀購(gòu)自美國(guó)Thermo公司;Tanon5200全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光圖像分析儀購(gòu)自北京原平皓生物技術(shù)有限公司;聚丙烯酰胺凝膠電泳儀及膜轉(zhuǎn)印裝置購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司.

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)

LTEP-a2細(xì)胞株培養(yǎng)于添加10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中,培養(yǎng)條件為37℃、5%二氧化碳恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng).

1.3 miRNA轉(zhuǎn)錄組測(cè)定

將藻藍(lán)色素蛋白處理的細(xì)胞(處理濃度為4.8 μmol/L)和對(duì)照組細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,首先提前12 h將用于轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的細(xì)胞傳代并鋪于細(xì)胞培養(yǎng)皿中培養(yǎng),對(duì)照組為A-1,A-2,A-3,藻藍(lán)蛋白處理組為實(shí)驗(yàn)組編號(hào)為B-1,B-2,B-3,將實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞培養(yǎng)基替換為含有藻藍(lán)蛋白的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)48 h收集細(xì)胞,提取細(xì)胞總RNA;利用生物學(xué)手段對(duì)總RNA處理并構(gòu)建cDNA文庫(kù),通過RNA-seq測(cè)序以及生物信息學(xué)分析等手段構(gòu)建出藻藍(lán)蛋白處理組、實(shí)驗(yàn)組差異miRNA轉(zhuǎn)錄組文庫(kù).

1.4 miR-642a-5p mimics的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

采用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染法將化學(xué)合成的miR-642a-5p mimics、Neg.mimics轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,并進(jìn)行下游細(xì)胞實(shí)驗(yàn).將合成的mimics用DEPC水溶解為20 μmol/L的儲(chǔ)存液,適量分裝并于-80℃保存?zhèn)溆?轉(zhuǎn)染終濃度為50 nmol/L,具體轉(zhuǎn)染步驟根據(jù)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine3000說明書操作.

1.5 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、集落的測(cè)定

將轉(zhuǎn)染12 h的細(xì)胞胰酶消化、離心收集計(jì)數(shù),鋪于96孔板中,6 h細(xì)胞貼壁后加入MTT,6 h再加入SDS-HCl裂解液,12 h后測(cè)定細(xì)胞570 nm處吸光值.連續(xù)測(cè)定0～5 d吸光值并記錄數(shù)據(jù).以橫坐標(biāo)為時(shí)間,縱坐標(biāo)為吸光值(OD值),繪制細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線,統(tǒng)計(jì)細(xì)胞0～5 d生長(zhǎng)情況.同時(shí)將轉(zhuǎn)染12 h的細(xì)胞以200個(gè)/孔的量鋪于6孔板中,加入2 mL培養(yǎng)基,放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10 d,當(dāng)集落大小肉眼可見時(shí),利用吉姆薩染液對(duì)細(xì)胞集落染色,拍照保存并計(jì)算細(xì)胞克隆數(shù).

1.6 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)

將轉(zhuǎn)染mimics的陰性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞培養(yǎng)至細(xì)胞匯合度為90%單層鋪滿,利用滅菌的黃槍頭快速劃過培養(yǎng)皿內(nèi)的細(xì)胞劃出劃痕標(biāo)記,用培養(yǎng)基沖去細(xì)胞碎片,隨后用3%血清的培養(yǎng)基培養(yǎng),分別在0,24,48 h時(shí)定點(diǎn)拍照并保存,同時(shí)計(jì)算細(xì)胞遷移率.根據(jù)劃痕寬度H計(jì)算遷移率A公式如下

A=[(H1-H2)/H2]×100%

式中:H1為實(shí)驗(yàn)組;H2為對(duì)照組.

1.7 熒光定量PCR

使用TRIZOL試劑提取細(xì)胞總RNA,采用NANO Drop2000測(cè)定RNA濃度,用DEPC水調(diào)平每組濃度,分別取3 μg總RNA應(yīng)用miRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA;取2 μL cDNA和適量SYBR酶和miR-642a-5p、U6(內(nèi)參)引物進(jìn)行熒光定量PCR定量分析miR-642a-5p的表達(dá).引物序列如表1所示.

表1 定量PCR引物序列

1.8 Western Blotting

收集轉(zhuǎn)染48 h后的細(xì)胞,RIPA裂解液抽提細(xì)胞總蛋白.將Marker、對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行SDS-PAGE蛋白分離,隨后將分離的蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,5%脫脂奶粉封閉1.5 h,使用其特異性抗體與目的蛋白孵育過夜(4 ℃),第2天37 ℃ 1 h孵育二抗,充分洗凈后,滴加化學(xué)發(fā)光液,利用Tanon5200全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光圖像分析儀對(duì)條帶曝光,獲得蛋白表達(dá)信號(hào)后拍照保存.

1.9 統(tǒng)計(jì)分析

柱狀圖和折線圖中的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±standard deviation)表示,采用SPSS 11.0軟件進(jìn)行單因素方差分析,其中p<0.05為顯著性差異(*);p<0.01為極顯著差異(**).

2 結(jié)果與討論

2.1 藻藍(lán)色素蛋白抑制LTEP-a2細(xì)胞體外增殖、遷移能力

在前期研究中,以非小細(xì)胞肺癌LTEP-a2為模型,采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)檢測(cè)以及劃痕愈合、熒光定量PCR、Western等實(shí)驗(yàn)探究了藻藍(lán)蛋白對(duì)LTEP-a2細(xì)胞的影響.從結(jié)果中發(fā)現(xiàn)藻藍(lán)蛋白能明顯抑制LTEP-a2細(xì)胞的體外增殖能力;同時(shí),劃痕實(shí)驗(yàn)、經(jīng)典遷移基因表達(dá)檢測(cè)結(jié)果證明了藻藍(lán)蛋白可以顯著抑制細(xì)胞的體外遷移能力[20].但這一過程中的小分子調(diào)控機(jī)制還尚不清晰(圖1).為了深入探索藻藍(lán)蛋白的抗肺癌機(jī)制,本文進(jìn)行了深入的探究.

圖1 藻藍(lán)色素蛋白抑制LTEP-a2細(xì)胞體外增殖、遷移能力Fig.1 The inhibition ability of phycocyanin to the proliferation and migration of LTEP-a2 cells in vitro

2.2 miRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)篩選差異miRNA并體外驗(yàn)證

首先提取了藻藍(lán)色素處理后的A549細(xì)胞總RNA,并進(jìn)行miRNA轉(zhuǎn)錄組測(cè)序前的質(zhì)量檢測(cè).圖2分別為對(duì)照組(圖2(a)和藻藍(lán)色素處理組(圖2(b))的RNA完整性分析結(jié)果.圖2結(jié)果顯示,RNA條帶清晰,無色素、蛋白、糖類等雜質(zhì)污染,RNA的18 S和28 S亞基處的峰完整且集中程度較高,28/23 S亮度大于18/16 S.初步顯示了RNA結(jié)構(gòu)的完整性.此外,表2顯示了RNA質(zhì)量檢測(cè)的相關(guān)數(shù)據(jù),表2結(jié)果顯示,1～6組樣品中,每組RNA總量均大于5 μg,濃度大于250 ng/μL,OD260/280均大于1.8,RNA的RIN值均大于8,總量滿足2次建庫(kù)需要.以上結(jié)果表明RNA樣本結(jié)構(gòu)完整,沒有發(fā)生明顯降解,符合樣本要求,可以進(jìn)行后續(xù)的miRNA轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析.

圖2 藻藍(lán)蛋白處理組與對(duì)照處理組LTEP-a2細(xì)胞中的RNA完整性檢測(cè)Fig.2 RNA integrity test in phycocyanin-treated and control LTEP-a2 cells

表2 不同樣本RNA的質(zhì)量檢測(cè)數(shù)據(jù)

通過高通量測(cè)序篩選和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,篩選出了一系列藻藍(lán)蛋白處理后差異表達(dá)的miRNA.圖3為差異miRNA篩選火山圖(volcano-plots),圖中每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)特定的miRNA,▲表示顯著上調(diào)的miRNA,▼表示顯著下調(diào)的miRNA,●為非顯著差異miRNA,并且,越靠?jī)蓚?cè)和上端的點(diǎn)表達(dá)差異越顯著.本文篩選到了一個(gè)感興趣的上調(diào)表達(dá)的miRNA,miR-642a-5p(log2FC(PC/control為1.02),并且進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組的qRT-PCR驗(yàn)證.圖3 qRT-PCR結(jié)果顯示,藻藍(lán)蛋白處理后,miR-642a-5p相對(duì)表達(dá)量約為對(duì)照組的5倍,這與轉(zhuǎn)錄組的趨勢(shì)是一樣的.以上結(jié)果說明藻藍(lán)蛋白作用LTEP-a2細(xì)胞后確實(shí)能上調(diào)miR-642a-5p的表達(dá).

圖3 藻藍(lán)蛋白處理LTEP-a2細(xì)胞后的miRNA轉(zhuǎn)錄組分析Fig.3 miRNA transcriptome analysis of LTEP-a2 cells after treatment with phycocyanin

2.3 qRT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染mimics后LTEP-a2細(xì)胞miR-642a-5p的過表達(dá)效果

miR-642a-5p在多種腫瘤細(xì)胞中參與了調(diào)控作用[13-14],那么它是否也介導(dǎo)了藻藍(lán)蛋白抑制非小細(xì)胞肺癌生長(zhǎng)的調(diào)控過程呢？為了驗(yàn)證猜測(cè),首先在LTEP-a2細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染了miRNA模擬物Neg.mimics和miR-642a-5p mimics,48 h后采用miRNA qRT-PCR檢測(cè)了miR-642a-5p在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá).

結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,在外源轉(zhuǎn)染mimics后,LTEP-a2細(xì)胞內(nèi)miR-642a-5p的表達(dá)量顯著升高(如圖4所示).綜上所述,在LTEP-a2細(xì)胞中miRNA mimics的轉(zhuǎn)染效率很高,可以進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn).

圖4 轉(zhuǎn)染后實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)miR-642a-5p在LTEP-a2細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)Fig.4 Expression of miR-642a-5p in LTEP-a2 cells after transfection detected in real time by fluorescence quantitative PCR

2.4 過表達(dá)miR-642a-5p對(duì)LTEP-a2細(xì)胞體外增殖能力的影響

轉(zhuǎn)染miR-642a-5p后,采用MTT的方法檢測(cè)了細(xì)胞的體外增殖能力.結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,過表達(dá)miR-642a-5p后明顯抑制了細(xì)胞的體外增殖能力,處理后的第4天起細(xì)胞增殖出現(xiàn)極顯著差異(如圖5所示).此外,培養(yǎng)2 w后,轉(zhuǎn)染miR-642a-5p組細(xì)胞的集落個(gè)數(shù)明顯少于對(duì)照組(圖5),同時(shí)結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.以上結(jié)果表明,miR-642a-5p確實(shí)能夠顯著降低LTEP-a2細(xì)胞的體外增值能力.

圖5 過表達(dá)miR-642a-5p對(duì)LTEP-a2細(xì)胞體外增殖能力的影響Fig.5 Effect of miR-642a-5p overexpression on the in vitro proliferation of LTEP-a2 cells

2.5 過表達(dá)miR-642a-5p抑制LTEP-a2細(xì)胞的體外遷移能力

在LTEP-a2細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-642a-5p mimics 24,48 h后對(duì)遷移距離進(jìn)行了測(cè)量和統(tǒng)計(jì).如圖6(a)6(b),結(jié)果顯示,LTEP-a2細(xì)胞轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照24,48 h后的平均遷移率為14.5%,19.6%,而轉(zhuǎn)染mimics 24,48 h后的平均遷移率為6.5%,15%,細(xì)胞的遷移能力有所下降,說明LTEP-a2細(xì)胞在過表達(dá)miR-642a-5p后體外遷移能力受到抑制.隨后檢測(cè)了過表達(dá)miR-642a-5p后細(xì)胞內(nèi)遷移相關(guān)蛋白MMP2,MMP9的表達(dá)水平.基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)作為一類調(diào)節(jié)細(xì)胞遷移功能的重要的蛋白酶,對(duì)調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)生長(zhǎng)有重要作用,同時(shí),血管是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分,血管形成是腫瘤轉(zhuǎn)移的主要因素,MMP2,MMP9均屬明膠酶類,是能夠降解IV型膠原的主要基質(zhì)水解酶,其中MMP9是MMPs系統(tǒng)中最大的酶,MMP2能降解I型膠原纖維,均與細(xì)胞遷移密切相關(guān),并在惡性腫瘤中都有過度的表達(dá)[21-22].圖6(c)6(d)顯示mimics轉(zhuǎn)染48 h后的實(shí)時(shí)熒光定量PCR,結(jié)果顯示,細(xì)胞中MMP2、MMP9轉(zhuǎn)錄物的量有所下調(diào),同時(shí)Western Blot結(jié)果也顯示,在LTEP-a2細(xì)胞過表達(dá)miR-642a-5p后,MMP2,MMP9蛋白水平的表達(dá)同樣也是下調(diào)的.以上結(jié)果表明過表達(dá)miR-642a-5p能夠抑制LTEP-a2細(xì)胞的體外遷移能力.

圖6 過表達(dá)miR-642a-5p抑制LTEP-a2細(xì)胞的體外遷移能力Fig.6 Inhibition ability of mir-642a-5p overexpress to the migration of LTEP-a2 cells in vitro

2.6 過表達(dá)miR-642a-5p對(duì)LTEP-a2細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

NF-κB是一個(gè)有5個(gè)重要轉(zhuǎn)錄因子的家族,在響應(yīng)基因的啟動(dòng)子區(qū)域,可以形成或與之結(jié)合形成共識(shí)的DNA序列,進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、凋亡和分化[23].為了探究藻藍(lán)蛋白是否能夠通過介導(dǎo)miR-642a-5p影響NF-κB通路的活性而影響細(xì)胞的增殖、遷移等生理功能,對(duì)通路蛋白的水平進(jìn)行了檢測(cè).圖7顯示,藻藍(lán)蛋白處理LTEP-a2細(xì)胞后,IKKα/β,IκBα,p65蛋白的磷酸化水平顯著降低.IKKα,IKKβ是IκBα的催化亞基,同時(shí)也作為p65蛋白的抑制劑,IKKα/β蛋白磷酸化可以使IκBαSer 32位發(fā)生磷酸化,導(dǎo)致IκBα的蛋白酶體依賴性降解,接著是p65磷酸化和NF-κB激活[24].而miR-642a-5p過表達(dá)后,同樣可以發(fā)現(xiàn)蛋白的表達(dá)與藻藍(lán)蛋白處理后基本一致,因此,研究結(jié)果表明miR-642a-5p參與了藻藍(lán)蛋白抑制NF-κB通路的過程,從而影響了LTEP-a2細(xì)胞的增殖和遷移.

圖7 過表達(dá)miR-642a-5p對(duì)LTEP-a2細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響Fig.7 Effect of miR-642a-5p overexpression on the expression of NF-κB signaling pathway proteins in LTEP-a2 cells

2.7 抑制miR-642a-5p的表達(dá)促進(jìn)LTEP-a2細(xì)胞的增殖和遷移能力

為了進(jìn)一步證實(shí)miR-642a-5p對(duì)細(xì)胞增殖和遷移的影響,進(jìn)行了miR-642a-5p的敲低實(shí)驗(yàn).采用miR-642a-5p抑制劑轉(zhuǎn)染LTEP-a2細(xì)胞,并對(duì)細(xì)胞的增殖和遷移能力進(jìn)行了檢測(cè),圖8結(jié)果顯示,抑制miR-642a-5p的表達(dá)后,能夠顯著促進(jìn)LTEP-a2細(xì)胞的體外增殖和遷移能力,這一結(jié)果與過表達(dá)miR-642a-5p正好相反,進(jìn)一步對(duì)本研究的結(jié)果進(jìn)行了證實(shí).

圖8 抑制miR-642a-5p對(duì)LTEP-a2細(xì)胞生長(zhǎng)和遷移的影響Fig.8 Effect of miR-642a-5p inhibition on the proliferation and migration of LTEP-a2 cells

3 結(jié) 論

本研究以LTEP-a2典型的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞為研究模型,通過藻藍(lán)蛋白處理后,采用高通量miRNA轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,對(duì)差異miRNA進(jìn)行篩選,獲得一個(gè)感興趣的上調(diào)miRNA miR-642a-5p,體外驗(yàn)證miRNA的表達(dá)量與轉(zhuǎn)錄組一致.隨后對(duì)轉(zhuǎn)染miR-642a-5p的細(xì)胞的增殖和遷移能力進(jìn)行檢測(cè),發(fā)現(xiàn)miR-642a-5p在細(xì)胞中的過表達(dá)能使細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢,克隆形成能力削弱;同時(shí),劃痕愈合能力也大大減弱,經(jīng)典遷移蛋白 MMP2、MMP9在轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平上都有明顯降低.研究結(jié)果能夠?yàn)楣δ苄栽逅{(lán)色素蛋白的應(yīng)用和非小細(xì)胞肺癌的治療提供理論基礎(chǔ).