楊建飛，馬 倩，左 勇,*，黃雪芹，徐 佳，王定麗，周耀進(jìn)，楊柯怡

（1.四川師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，四川 成都 610101；2.四川輕化工大學(xué)生物工程學(xué)院，四川 宜賓 644000）

醬腌菜是我國(guó)的傳統(tǒng)美食，具有方便即食、風(fēng)味獨(dú)特、制作簡(jiǎn)易等優(yōu)點(diǎn)，深受廣大消費(fèi)者喜愛(ài)，然而醬腌菜中亞硝酸鹽含量超標(biāo)的現(xiàn)象屢見(jiàn)不鮮[1]，食用醬腌菜是人體攝入亞硝酸鹽的來(lái)源之一，若人體攝入較高的亞硝酸鹽，具有患高鐵血紅蛋白癥、1型糖尿病和癌癥的風(fēng)險(xiǎn)[2-3]，因此，世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）和食品科學(xué)委員會(huì)（Scientific Committee on Food，SCF）規(guī)定亞硝酸鹽的每日允許攝入量（acceptable daily intake，ADI）值為0～0.06 mg/kg（以體質(zhì)量計(jì)）[4-5]。由此可見(jiàn)，在食品衛(wèi)生檢驗(yàn)、食品安全等方面，亞硝酸鹽的含量測(cè)定具有重要意義。

現(xiàn)有的亞硝酸鹽檢測(cè)方法主要分為光譜法、色譜法、電化學(xué)分析法和快速檢測(cè)法共4 類(lèi)[6]，其中光譜法主要指GB 5009.33—2016《食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測(cè)定》的分光光度法[7]（以下簡(jiǎn)稱(chēng)GB法），是目前國(guó)際通用的亞硝酸鹽定量檢測(cè)法[8]，但此方法以強(qiáng)揮發(fā)性和強(qiáng)腐蝕性的濃鹽酸作酸性介質(zhì)，測(cè)定流程由于分2 步進(jìn)行而具有危險(xiǎn)和耗時(shí)的缺點(diǎn)。色譜法可準(zhǔn)確定量，但需要精密儀器和專(zhuān)業(yè)的技術(shù)人員，檢測(cè)費(fèi)用昂貴，適合實(shí)驗(yàn)室或科研使用[9]。電化學(xué)分析法能夠快速、準(zhǔn)確測(cè)得亞硝酸鹽的響應(yīng)值[10]，但電極材料的選擇及制備過(guò)程繁瑣，使用壽命有限[11-12]?？焖贆z測(cè)法是基于比色原理對(duì)樣品亞硝酸鹽進(jìn)行定性或半定量的方法[13-14]，具有操作簡(jiǎn)單、成本低、耗時(shí)短（3～5 min）等優(yōu)點(diǎn)[15]，已在土壤[16]、臨床[17]、水樣[18-19]、食品[20]等領(lǐng)域受到廣泛關(guān)注和應(yīng)用，但比色法制備的許多液體、固體、試紙型的試劑盒有較高檢出限、假陽(yáng)性、保質(zhì)期短等缺點(diǎn)[21]。因此，研究適用于醬腌菜中亞硝酸鹽快速定量的檢測(cè)試劑具有重要意義。

本實(shí)驗(yàn)以GB法作對(duì)照，使用重氮試劑和偶合試劑的混合溶液代替GB法的2 步反應(yīng)，本實(shí)驗(yàn)還研究可代替濃鹽酸的安全酸性介質(zhì)，同時(shí)探究3 組重氮-偶合試劑（重氮試劑：對(duì)氨基苯磺酸、對(duì)氨基苯乙酮、磺胺；偶合試劑：鹽酸萘乙二胺，分別為對(duì)氨基苯磺酸-鹽酸萘乙二胺組、對(duì)氨基苯乙酮-鹽酸萘乙二胺組、磺胺-鹽酸萘乙二胺組，以下簡(jiǎn)稱(chēng)DS組、DT組、HA組）在醬腌菜中的適用性，以期為醬腌菜中亞硝酸鹽的快速定量檢測(cè)提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

醬腌菜 四川宜賓市售；亞硝酸鈉、蘋(píng)果酸、丁二酸、酒石酸、檸檬酸、磷酸、對(duì)氨基苯磺酸、磺胺、對(duì)氨基苯乙酮、鹽酸萘乙二胺（均為分析純） 上海源葉生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

T6紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；ME104E/02電子天平 托利多儀器（上海）有限公司；HWS-12電熱恒溫水浴鍋 上海喬欣科學(xué)儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 亞硝酸鹽的檢測(cè)原理和方法

樣品前處理和亞硝酸鹽的測(cè)定原理依據(jù)GB法[7]。取1 mL質(zhì)量濃度4 g/L的重氮試劑（對(duì)氨基苯磺酸或?qū)Π被揭彝蚧前罚?、質(zhì)量濃度2 g/L的偶合試劑（鹽酸萘乙二胺）0.5 mL于試管中，用蒸餾水補(bǔ)至4.5 mL后搖勻，加入質(zhì)量濃度1 μg/mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5 mL，搖勻后反應(yīng)15 min，500～560 nm波長(zhǎng)處掃描，確定每組重氮-偶合試劑的最大測(cè)定波長(zhǎng)，取1 mL樣品提取液測(cè)定亞硝酸鹽含量。

1.3.2 亞硝酸鹽快速檢測(cè)條件的優(yōu)化

研究酸性介質(zhì)的種類(lèi)（蘋(píng)果酸、檸檬酸、酒石酸、磷酸、丁二酸）、酸性質(zhì)濃度（0.1、0.3、0.5、0.7 mol/L）、重氮試劑質(zhì)量濃度（2、4、6、8、10、12 g/L）、偶合試劑質(zhì)量濃度（0.1、0.3、0.5、0.7、1.0、1.5、2.0 g/L）、重氮-偶合試劑體積比（1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、1∶2）、反應(yīng)時(shí)間3、6、9、12、15、18、21 min）對(duì)亞硝酸鹽吸光度的影響，并采用4因素3水平的正交試驗(yàn)分別優(yōu)化DS組、HA組、DT組測(cè)定亞硝酸鹽的條件。正交試驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表1～3。

表1 DS組正交試驗(yàn)因素與水平Table 1 Independent variables and levels used for orthogonal array design for optimization of ASA-NED method

表2 HA組正交試驗(yàn)因素與水平Table 2 Independent variables and levels used for orthogonal array design for optimization of AAP-NED method

表3 DT組正交試驗(yàn)因素與水平Table 3 Independent variables and levels used for orthogonal array design for optimization of SN-NED method

1.3.3 亞硝酸鹽快速檢測(cè)試劑的檢測(cè)性能

以GB法作對(duì)照，研究DS組、HA組、DT組應(yīng)用于醬腌菜樣品時(shí)的抗干擾能力、準(zhǔn)確度、精密度、檢出限和線(xiàn)性范圍。

1.3.3.1 檢出限和線(xiàn)性范圍

按各組試劑的最優(yōu)組合測(cè)定系列質(zhì)量濃度梯度的亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液，研究DS組、HA組、DT組的檢出限和線(xiàn)性范圍，并采用3δ法[22]計(jì)算檢出限。

1.3.3.2 抗干擾能力

為探究本實(shí)驗(yàn)中亞硝酸鹽檢測(cè)試劑在醬腌菜中的實(shí)際應(yīng)用性，選擇醬腌菜中含有的食品添加劑和自身水溶性成分，如山梨酸鉀、苯甲酸鈉、D-異抗壞血酸鈉、安賽蜜、有機(jī)酸、氨基酸等，按亞硝酸鹽濃度的10～2 000 倍進(jìn)行干擾實(shí)驗(yàn)。

1.3.3.3 準(zhǔn)確度

準(zhǔn)確度通常以回收率表示。回收率是指反應(yīng)待測(cè)物在樣品分析過(guò)程中的損失程度，損失越少，回收率越高，也說(shuō)明該檢測(cè)方法準(zhǔn)確性越高[23]。首先，按3 組檢測(cè)試劑最優(yōu)方法分別測(cè)定樣品亞硝酸鹽的本底值，然后于待測(cè)液中加入已知質(zhì)量濃度的亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液以調(diào)整亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度為1 μg/mL，最后再次測(cè)定亞硝酸鹽含量，計(jì)算回收率[24]。

1.3.3.4 精密度

精密度表示實(shí)驗(yàn)方法的重復(fù)性，以相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）表示[25]，通過(guò)重復(fù)測(cè)定5 次樣品中亞硝酸鹽含量計(jì)算精密度。

1.3.4 亞硝酸鹽快速檢測(cè)試劑的貯存穩(wěn)定性

為研究亞硝酸鹽快速檢測(cè)試劑的實(shí)際應(yīng)用性，對(duì)其在25、4、30、40 ℃的避光條件的貯存穩(wěn)定性進(jìn)行測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)和差異顯著性分析；采用Origin 2018進(jìn)行圖表的繪制。每組實(shí)驗(yàn)設(shè)3 個(gè)平行。

2 結(jié)果與分析

2.1 亞硝酸鹽檢測(cè)波長(zhǎng)的測(cè)定

由圖1可知，在520～560 nm范圍內(nèi)，DS組和HA組的最大吸收波長(zhǎng)均為540 nm，DT組的最大吸收波長(zhǎng)為550 nm，因此選擇DS組、DT組、HA組的亞硝酸鹽測(cè)定波長(zhǎng)分別為540、550、540 nm。

圖1 亞硝酸鹽的檢測(cè)波長(zhǎng)Fig.1 Visible absorption spectra of nitrite detected with three new diazo-coupling reagents

2.2 亞硝酸鹽的檢測(cè)條件

2.2.1 酸性介質(zhì)及其濃度的影響

由于0.7 mol/L的丁二酸溶液配制3 種重氮試劑時(shí)過(guò)飽和，因此圖2中無(wú)該濃度丁二酸對(duì)亞硝酸鹽吸光度的影響。酸性介質(zhì)的種類(lèi)和濃度對(duì)亞硝酸鹽的吸光度均有影響，可能是酸性介質(zhì)的酸度系數(shù)和溶劑pH值不同所導(dǎo)致[21]。由圖2可知，當(dāng)DS組、DT組、HA組分別以0.3 mol/L丁二酸、0.5 mol/L蘋(píng)果酸、0.5 mol/L酒石酸為酸性介質(zhì)時(shí)，亞硝酸鹽的吸光度分別達(dá)到最大。因此，選擇0.3 mol/L丁二酸、0.5 mol/L蘋(píng)果酸和0.5 mol/L酒石酸分別為DS組、DT組、HA組的酸性介質(zhì)。

圖2 DS組（A）、DT組（B）、HA組（C）的酸性介質(zhì)及其濃度對(duì)亞硝酸鹽吸光度的影響Fig.2 Influence of acid medium type and concentration on nitrite absorbance detected with ASA-NED (A), AAP-NED (B) and SN-NED (C)

2.2.2 重氮試劑質(zhì)量濃度的影響

由圖3可知，隨著對(duì)氨基苯磺酸、磺胺、對(duì)氨基苯乙酮質(zhì)量濃度的升高，亞硝酸鹽的吸光度先增加再趨于平穩(wěn)，可能是重氮試劑在低質(zhì)量濃度時(shí)，重氮化反應(yīng)不完全，當(dāng)亞硝酸鹽消耗完全時(shí)，形成的重氮化合物含量不再增加，吸光度趨于平穩(wěn)。對(duì)氨基苯磺酸、磺胺、對(duì)氨基苯乙酮的質(zhì)量濃度分別在10、8、6 g/L后，亞硝酸鹽的吸光度無(wú)顯著差異，因此選擇對(duì)氨基苯磺酸、磺胺、對(duì)氨基苯乙酮的質(zhì)量濃度分別為10、8、6 g/L。

圖3 重氮試劑質(zhì)量濃度對(duì)亞硝酸鹽吸光度的影響Fig.3 Effect of diazonium reagent concentration on absorbance of nitrite

2.2.3 重氮-偶合試劑體積比的影響

由圖4可知，3 組試劑的亞硝酸鹽吸光度均隨重氮-偶合試劑體積比的增加而先增加后降低，可能是過(guò)高的重氮-偶合試劑體積比或當(dāng)偶合試劑體積高于重氮試劑時(shí)，降低反應(yīng)摩爾消光系數(shù)[26]。DS組和HA組的吸光度在重氮-偶合試劑體積比分別為4∶1和3∶1時(shí)最大；重氮-偶合試劑體積比為2∶1、3∶1、4∶1時(shí)，DT組的吸光度較高且無(wú)顯著性差異，因此，選擇DS組、DT組、HA組的體積比分別為4∶1、2∶1、3∶1。

圖4 重氮-偶合試劑體積比對(duì)亞硝酸鹽吸光度的影響Fig.4 Influence of volume ratio of diazo to coupling reagent on absorbance of nitrite

2.2.4 反應(yīng)時(shí)間的影響

由圖5可知，反應(yīng)時(shí)間在3～21 min范圍內(nèi)，DS組、DT組、HA組的吸光度均隨反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)而先升高后趨于穩(wěn)定，DS組和DT組的吸光度均在反應(yīng)15 min后無(wú)顯著差異，HA組的吸光度在反應(yīng)6 min后無(wú)顯著變化，因此，選擇DS組、DT組、HA組的反應(yīng)時(shí)間分別為15、15、6 min，較GB法規(guī)定的20 min分別節(jié)省5、5、14 min，因此本法有利于提高效率。

圖5 反應(yīng)時(shí)間對(duì)亞硝酸鹽吸光度的影響Fig.5 Effect of reaction time on absorbance of nitrite

2.2.5 鹽酸萘乙二胺質(zhì)量濃度的影響

由圖6可知，隨著鹽酸萘乙二胺質(zhì)量濃度的增加，DT組和HA組的亞硝酸鹽的吸光度先升高后降低，DS組不斷降低，可能由于重氮試劑的不同導(dǎo)致；當(dāng)鹽酸萘乙二胺的質(zhì)量濃度過(guò)高時(shí)，溶液酸性增加，亞硝基在強(qiáng)酸條件下不穩(wěn)定[27]，導(dǎo)致顏色變淺，吸光度降低。DT組的吸光度在鹽酸萘乙二胺的質(zhì)量濃度為0.3～0.7 g/L之間較高且無(wú)顯著差異；HA組在鹽酸萘乙二胺質(zhì)量濃度為0.5 g/L時(shí)吸光度最大，因此，選擇DS組、DT組、HA組的鹽酸萘乙二胺質(zhì)量濃度分別為0.1、0.3、0.5 g/L。

圖6 鹽酸萘乙二胺質(zhì)量濃度對(duì)亞硝酸鹽吸光度的影響Fig.6 Influence of NED concentration on absorbance of nitrite

2.2.6 正交試驗(yàn)優(yōu)化結(jié)果

由表4～6可知，DS組、HA組、DT組的理論最優(yōu)組合分別為A1B2C3D2、H3B1J3D3，T3B3P3D3；即DS組為對(duì)氨基苯磺酸質(zhì)量濃度9 g/L、鹽酸萘乙二胺質(zhì)量濃度0.1 g/L、丁二酸濃度0.4 mol/L、重氮-偶合試劑體積比4∶1；HA組為磺胺質(zhì)量濃度9 g/L、鹽酸萘乙二胺質(zhì)量濃度0.4 g/L、酒石酸濃度0.6 mol/L、重氮-偶合試劑體積比4∶1；DT組為對(duì)氨基苯乙酮質(zhì)量濃度7 g/L、鹽酸萘乙二胺質(zhì)量濃度0.4 g/L、蘋(píng)果酸濃度0.6 mol/L、重氮-偶合試劑體積比3∶1。在3 組試劑的理論最優(yōu)組合進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，得出DS組、HA組、DT組吸光度分別為0.072、0.070、0.073，均與各自的對(duì)照組無(wú)明顯差異，表明DS組、HA組、DT組的理論最優(yōu)組合可靠。

表4 DS組正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 4 Orthogonal array design with experimental results for optimization of ASA-NED method

表5 HA組正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 5 Orthogonal array design with experimental results for optimization of AAP-NED method

表6 DT組正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 6 Orthogonal array design with experimental results for optimization of SN-NED method

2.3 亞硝酸鹽檢測(cè)試劑的檢測(cè)性能

2.3.1 檢出限和線(xiàn)性范圍

按照DS組、HA組、DT組的最優(yōu)組合，研究各組試劑的檢測(cè)范圍和線(xiàn)性范圍并計(jì)算檢出限，結(jié)果如圖7所示。由圖7A1、B1、C1可知，測(cè)定0～6 μg/mL的亞硝酸鹽時(shí)，DS組、HA組、DT組的吸光度均隨亞硝酸鹽質(zhì)量濃度的增加而增大，當(dāng)亞硝酸鹽質(zhì)量濃度高于4 μg/mL時(shí)，吸光度增加平緩，表明亞硝酸鹽質(zhì)量濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定；由圖7A2、B2、C2可知DS組、HA組、DT組的線(xiàn)性范圍分別為0.02～3、0.02～3、0.02～3.4 μg/mL，R2分別為0.999 2、0.999 5、0.999 0，表明3 組試劑均適用于亞硝酸鹽的測(cè)定，DT組的線(xiàn)性范圍最廣；采用3δ法計(jì)算出DS組、HA組、DT組的檢出限分別為0.82、0.51、0.76 mg/kg，與GB法規(guī)定的1 mg/kg檢出限相比，表明3 組試劑均有較低的檢出限。

圖7 DS組（A）、HA組（B）、DT組（C）的檢測(cè)范圍和線(xiàn)性范圍Fig.7 Detection ranges and linear ranges of ASA-NED (A),AAP-NED (B) and SN-NED methods (C)

2.3.2 抗干擾能力

由表7可知，在5%的相對(duì)誤差內(nèi)，GB法抗D-異抗壞血酸鈉、半胱氨酸、山梨酸鉀濃度干擾的能力分別達(dá)亞硝酸鹽濃度的20、10、1 000 倍，表明D-異抗壞血酸鈉和半胱氨酸對(duì)亞硝酸鹽含量測(cè)定的干擾較大，其原因可能為D-異抗壞血酸鈉具有較強(qiáng)的抗氧化性，將NO2-還原為NO，半胱氨酸含有的巰基與NO2-反應(yīng)生成巰代亞硝酸酯[28-29]。與GB法相比，DS組、HA組、DT組抗D-異抗壞血酸鈉濃度干擾的能力分別達(dá)20、10、10 倍，抗半胱氨酸濃度干擾的能力分別達(dá)10、50、50 倍，且?guī)缀醪皇鼙郊姿徕c、山梨酸鉀、安賽蜜、葡萄糖、谷氨酸、丙氨酸、草酸、蘋(píng)果酸、乳酸、琥珀酸、酒石酸、檸檬酸的干擾，表明DS組、HA組、DT組對(duì)防腐劑、甜味劑、有機(jī)酸均有較高的抗干擾能力，其中DS組與GB法的抗干擾能力相當(dāng)，HA組和DT組的綜合抗干擾能力較高于GB法，表明HA組和DT可針對(duì)性的應(yīng)用于醬腌菜中亞硝酸鹽含量的測(cè)定。

表7 抗共存物干擾能力Table 7 Resistance to coexisting substances

2.3.3 準(zhǔn)確度和精密度

由表8可知，GB法測(cè)定15 種醬腌菜樣品的回收率在88.61%～92.66%之間，RSD均小于5%。與GB法相比，除了海帶樣品外，DS組、DT組、HA組的回收率分別為84.04%～87.00%、96.01%～99.60%、93.82%～96.24%，RSD均低于5%，表明DT組和HA組準(zhǔn)確度較高，實(shí)驗(yàn)條件精密度良好，重復(fù)性較好[30]。

表8 GB法、DS組、HA組、DT組的回收率和精密度Table 8 Recoveries and precision RSDs of the traditional and modified methods%

2.4 實(shí)際樣品的測(cè)定

由表9可知，不同醬腌菜品種之間，亞硝酸鹽含量存在差異，GB法測(cè)得15 種醬腌菜樣品的亞硝酸鹽含量在（0.87±0.02）～（3.53±0.12）mg/kg之間，遠(yuǎn)低于GB法中20 mg/kg的限量標(biāo)準(zhǔn)。與GB法相比，除海帶樣品外，優(yōu)化后的DT組和HA組的測(cè)定結(jié)果與GB法無(wú)顯著差異，而DS組的測(cè)定結(jié)果與GB法差異顯著，其原因可能為DS組受醬腌菜中的D-異抗壞血酸鈉[31]、蔥、姜、蒜、等香辛料成分[32-33]的干擾影響較大，表明DT組和HA組的測(cè)定結(jié)果比DS組準(zhǔn)確可靠。海帶樣品的測(cè)定結(jié)果差異較大的原因可能為海帶含有的碘成分與亞硝酸鹽反應(yīng)生成NO或NO3-[34-35]，其原因也可能為I-與重氮-偶合試劑存在某種反應(yīng)，表明DT組和HA組適用于測(cè)定除海帶樣品外的醬腌菜中亞硝酸鹽含量。

表9 樣品中亞硝酸鹽含量的測(cè)定比較Table 9 Comparison of the determination of nitrite contents in real samples by the traditional and modified methods mg/kg

2.5 HA組和DT組的貯存穩(wěn)定性

根據(jù)2.3、2.4節(jié)的結(jié)果，研究HA組和DT組在25、4、30、40 ℃的避光貯存穩(wěn)定性。由圖8A可知，在貯存40 d的過(guò)程中，HA組在25、4、30、40 ℃均表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性；由圖8B可知，DT組僅在4 ℃保持良好的穩(wěn)定性，當(dāng)貯存時(shí)間超過(guò)30 d后，DT組在25、30、40 ℃的亞硝酸鹽吸光度明顯降低，表明HA組和4 ℃的DT組均可穩(wěn)定貯存40 d，但HA組比DT組的貯存穩(wěn)定性好。

圖8 HA組（A）和DT組（B）的貯存穩(wěn)定性Fig.8 Storage stability of AAP-NED (A) and SN-NED (B)

3 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)以GB的分光光度法作對(duì)照，采用正交試驗(yàn)優(yōu)化3 組亞硝酸鹽檢測(cè)試劑（DS組、DT組、HA組）代替GB法中的重氮-偶合試劑測(cè)定醬腌菜中亞硝酸鹽的含量。結(jié)果表明：本方法比GB法縮短5～14 min的檢測(cè)時(shí)間，具有更高的效率；DS組、HA組、DT組的酸性介質(zhì)，丁二酸、酒石酸和蘋(píng)果酸均可有效代替GB法中的濃鹽酸作酸性介質(zhì)，提高安全性；DS組、HA組、DT組的檢測(cè)線(xiàn)性范圍分別在0.02～3、0.02～3、0.02～3.4 μg/mL之間，檢出限分別為0.82、0.51、0.76 mg/kg，低于GB法1 mg/kg的檢出限標(biāo)準(zhǔn)；在抗干擾能力方面，DS組、HA組、DT組對(duì)防腐劑、甜味劑、有機(jī)酸均有較高的抗干擾能力，其中DS組與GB法的抗干擾能力相當(dāng)，HA組和DT組的綜合抗干擾能力較高于GB法；測(cè)定15 種不同品種醬腌菜中亞硝酸鹽含量時(shí)，DT組和HA組的測(cè)定結(jié)果與GB法無(wú)顯著差異，RSD值均小于5%，DS組測(cè)定結(jié)果與GB法差異顯著；除含碘量較高的海帶樣品外，準(zhǔn)確度大小關(guān)系為：DT組（96.01%～99.60%）＞HA組（93.82%～96.24%）＞GB法（88.61%～92.66%）＞DS組（84.04%～87.00%）；其中HA組和4 ℃的DT組均可穩(wěn)定貯存40 d。綜上，DT組和HA組均展現(xiàn)出優(yōu)良的檢測(cè)能力，可有效提高分光光度法的效率和安全性，為醬腌菜中亞硝酸鹽的快速定量檢測(cè)提供理論參考。