陳瓊芳，張宗利（新藥藥效與安全性評價湖南省重點實驗室，長沙 410331）

小兒荊杏止咳顆粒由荊芥、矮地茶、杏仁、炙麻黃等中藥組成，具有疏風散寒、宣肺清熱、祛痰止咳的功效，主要用于治療小兒外感咳嗽風寒化熱證，即小兒急性氣管-支氣管炎引起的咳嗽、咯痰、痰黃、眼部紅腫、發(fā)熱等癥。小兒急性氣管-支氣管炎是兒科常見、多發(fā)的肺系病證，50%～60%由病毒感染引起，主要有流感病毒、副流感病毒、柯薩奇病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒、腺病毒等[1]。目前針對中藥兒科產品臨床前幼齡動物毒性研究不完整，無法針對性地反映產品對兒童生長發(fā)育的影響。美國FDA、歐洲 EMA及中國NMPA均針對兒科用藥的非臨床安全性評價頒布了相應的指導原則[2-4]。本研究通過觀察幼齡SD大鼠的體質量、生長發(fā)育指標、神經系統(tǒng)指標、免疫系統(tǒng)指標、骨骼系統(tǒng)指標，系統(tǒng)評價小兒荊杏止咳顆粒的發(fā)育毒性，為其臨床安全用藥提供參考。

1 材料

1.1 動物

購入出生1 d（PND1）的幼年SD大鼠260只，體質量13.3～22.2 g，共26窩，每窩10只，雌雄各半，每窩附帶母鼠1只[實驗動物生產許可證號：SCXK（湘）2013-0004，實驗動物質量合格證號：43004700029756]；按照國標（GB14925-2010）SPF級實驗動物環(huán)境條件要求飼養(yǎng)于湖南省藥物安全評價研究中心屏障環(huán)境A區(qū)，動物檢疫和適應環(huán)境飼養(yǎng)5 d，實驗動物使用許可證號：SYXK（湘）2015-0016。實驗期間環(huán)境溫度20～26℃，相對濕度：40%～70%。

1.2 試藥

小兒荊杏止咳顆粒[以下簡稱JXZKG，湖南方盛制藥股份有限公司，批號：161201，含量：4.23 g生藥/g干膏，臨床用量：6歲以下一次0.5袋（每袋含生藥18.33 g）tid]，給藥前以蒸餾水配制成所需濃度。

甲紫溶液（批號：20160502，衛(wèi)輝市康寶生化科技有限公司）；戊巴比妥鈉（批號：20160218，德國Merck）；免疫細胞檢測相關試劑盒（批號：201702，武漢Bio-Swamp）等。

1.3 儀器

AUY型分析天平（日本島津公司）；PL2002型電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]；Digbehv 型動物行為分析系統(tǒng)（上海吉量軟件科技有限公司）；R_mCT2型微型CT（日本Rigaku Yamanashi公司）；MR-96A型酶標儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）；BX43型生物顯微鏡＋MD50型數(shù)碼成像系統(tǒng)（日本奧林巴斯公司）；ASP200S型全自動組織脫水機、EG1150H＋C型組織包埋機、AutoStainer XL自動載玻片染色機＋CV5030自動蓋片機（德國Leica）等。

2 方法

2.1 裂窩分組及劑量設計

PND1幼齡SD大鼠適應飼養(yǎng) 5 d后，于首次給藥前2日（PND6），隨機選取檢疫合格的24只母鼠及240只仔鼠隨機分為4個臨時小組，每組6只母鼠及60只仔鼠，分別為空白對照組，JXZKG低、中、高劑量組。將母鼠放入新的大鼠籠具中，分別按順序編號為1-1，1-2，1-3……4-6；小組內部每窩動物抽取窩內編號為F01的雌性仔鼠和窩內編號為M01雄性仔鼠（共8只），交由組內母鼠編號為1的母鼠進行撫養(yǎng)；再自每窩其余動物中抽取窩內編號為F02的雌性仔鼠和窩內編號為M02雄性仔鼠（共8只），交由組內母鼠編號為2的母鼠進行撫養(yǎng)；以此類推直至將每窩中的仔鼠均勻分布至小組中各只母鼠撫養(yǎng)。

由于藥物溶解度的限制，藥物可順利給予幼齡動物的最大質量濃度為2.54 g干膏·mL－1，故依此設計高、中、低劑量組藥物質量濃度分別為2.54、1.27、0.63 g干膏·mL－1，對 應25.4、12.7、6.3 g生藥·kg－1，分別相當于兒童臨床劑量按公斤折算的10.2倍、5.1倍、2.5倍（按照6歲兒童平均體質量22 kg，每日用藥55 g生藥計）。于PND8開始按10 mL·kg－1的體積灌胃給予對應藥物，每日1次，連續(xù)給藥14周。

2.2 檢測指標

2.2.1 一般狀態(tài)觀察 每日給藥后肉眼觀察動物外觀、精神狀態(tài)、糞便情況、飲食及飲水情況等。

2.2.2 體質量 斷乳之前（PND8～PND21）每日稱體質量1次，PND22～PND35每周稱2次，PND36～PND133每周稱1次，根據(jù)每次稱重調整給藥量。每日稱量攝水量和飼料加料量，每周計算平均攝食量和攝水量。

2.2.3 生長發(fā)育指標檢測 于PND8～PND42分別觀察動物各項標志性特征（幼鼠下門齒萌出、睜眼、張耳、睪丸下降、包皮分離、陰道張開）是否發(fā)育完成。

2.2.4 神經反射、行為學指標檢測 于PND10～PND21分別檢測動物負向趨地性反射、聽覺驚愕反射及空中翻正反射是否形成[4-7]；分別于給藥后第4、9、14周檢測不同發(fā)育階段[各組間隨機選取10只動物，雌雄各半，檢測自主活動指標（活動時間、活動次數(shù)和活動距離）及轉棒（跌落次數(shù)）]是否存在差異。

2.2.5 肝藥酶、血清球蛋白及激素指標檢測 分別于給藥期第4、9、14周末，采用Elisa法檢測肝組織細胞色素CYP2E1、CYP1A2含量和大鼠血清免疫指標（IgG、IgA、IgM、IgE）、生長激素（E）、甲狀腺激素T3、甲狀腺激素T4、促皮質激素（ACTH）、雄激素（androgen）、雌激素（GH）及孕激素（PROG）含量。

2.2.6 脛骨長度檢測 分別于給藥期第9、14周末、恢復期第4周末用游標卡尺檢測動物右側脛骨長度（近端關節(jié)面與遠端關節(jié)面的直線距離）。

2.2.7 骨密度檢測 分別于給藥期第4、9、14周末、恢復期第4周末，解剖時取右側股骨，紗布包裹加入適量冷生理鹽水后凍存，進行小動物微型CT骨密度檢測。

2.2.8 病理解剖 于給藥后4、9周末每組雌雄分別解剖 5 只，給藥后14周末每組雌雄各解剖10 只，對空白對照組、高劑量組及尸檢異常動物進行病理檢查，如高劑量組動物某一組織出現(xiàn)與藥物相關病變，需要對其他劑量組動物的相同組織進行組織病理學檢查。

2.3 統(tǒng)計學方法

采用 SPSS 17.0進行統(tǒng)計分析，計量資料采用均數(shù)±標準差（±s）表示，用單因素方差分析（ANOVA）和非參數(shù)檢驗進行統(tǒng)計分析。評價時考慮統(tǒng)計學差異和生物學意義，其中P＜0.05表示有統(tǒng)計學意義。發(fā)育檢查及神經反射檢查以達標時間為統(tǒng)計指標，按計量資料進行正態(tài)性和方差齊性檢驗。

3 結果

3.1 大鼠一般狀態(tài)

與空白對照組比較，JXZKG高、中劑量組大鼠分別在給藥第3～12日、第3～6日出現(xiàn)不同程度的腹瀉現(xiàn)象，這一現(xiàn)象在給藥第3周完全消失。JXZKG低劑量組大鼠一般狀態(tài)沒有異常，綜合本中心進行的其他幼齡動物試驗臨床觀察現(xiàn)象，認為是幼齡大鼠灌胃給予高濃度藥液之后的正常反應。

3.2 哺乳期幼鼠和斷乳后大鼠體質量變化情況

如圖1A所示，在給藥后，哺乳期內與同期空白對照組比較，JXZKG高劑量組幼鼠體質量明顯降低（P＜0.01）；JXZKG中、高劑量組未見明顯差異。如圖1B所示，斷乳后與同期空白對照組比較，JXZKG各劑量組動物體質量未見明顯差異。

圖1 小兒荊杏止咳顆粒對哺乳期（A）和對斷乳（B）大鼠體質量的影響Fig 1 Effect of JXZKG on the body weight of lactation rats（A）and weaned rats（B）

由結果可知幼齡SD大鼠經口灌胃給予JXZKG，哺乳期及斷乳前期高劑量組動物體質量與同期空白對照組比較有一定下降，但下降幅度不大（未超過同期空白對照組體質量的10%），且此期間內動物體質量增長速度相比同期空白對照組無明顯差異，結合組織病理學檢查未見毒性意義的病理改變，認為哺乳期及斷乳前期高劑量組動物體質量下降是灌胃給予高濃度的藥液產生的影響，無明顯毒理學意義。

3.3 大鼠平均攝食量、攝水量

實驗期間JXZKG各給藥組平均攝食量和攝水量與同期空白對照組比較，差異均無統(tǒng)計學意義，具體數(shù)據(jù)未列出。

3.4 大鼠生長發(fā)育指標情況

如表1所示，JXZKG各劑量組動物生理發(fā)育標志性事件發(fā)生時間與空白對照組比較，差異均無統(tǒng)計學意義。

表1 小兒荊杏止咳顆粒對大鼠發(fā)育指標結果統(tǒng)計(±s，n＝30)Tab 1 Effect of JXZKG on the development index of rats (x± s，n＝30)

表1 小兒荊杏止咳顆粒對大鼠發(fā)育指標結果統(tǒng)計(±s，n＝30)Tab 1 Effect of JXZKG on the development index of rats (x± s，n＝30)

組別 性別 檢測指標/d下門齒萌出 睜眼 張耳 陰道張開 睪丸下降 包皮分離空白對照組 雌 11.0±0.0 13.2±0.6 18.0±0.0 35.3±1.1 － －雄11.0±0.0 13.2±0.6 18.0±0.0 － 22.3±1.9 42.0±0.0 JXZKG低劑量組 雌 11.0±0.0 13.4±0.8 18.0±0.0 35.0±0.0 － －雄11.0±0.0 13.3±0.7 18.0±0.0 － 22.1±1.8 42.0±0.0 JXZKG中劑量組 雌 11.0±0.0 13.2±0.6 18.0±0.0 35.0±0.0 － －雄11.0±0.0 13.3±0.8 18.0±0.0 － 22.3±1.9 42.0±0.0 JXZKG高劑量組 雌 11.0±0.0 13.3±0.7 18.0±0.0 35.3±1.1 － －雄11.0±0.0 13.4±0.8 18.0±0.0 － 22.1±1.8 42.0±0.0

3.5 大鼠神經反射功能情況

如表2所示，JXZKG中劑量組空中翻正反射達標時間略高于空白對照組（P＜0.05），但未表現(xiàn)出明顯的劑量關系，且相差不大，認為是個體差異所致，且幼齡SD大鼠空中翻正反射常在PND16～PND19發(fā)育完成，各組動物均在PND16～PND19發(fā)育完成，故認為該變化沒有毒理學意義；其他指標差異均無統(tǒng)計學意義。

表2 小兒荊杏止咳顆粒對動物反射指標結果統(tǒng)計(±s，n＝60)Tab 2 Effect of JXZKG on the reflection index of rats (x± s，n＝60)

表2 小兒荊杏止咳顆粒對動物反射指標結果統(tǒng)計(±s，n＝60)Tab 2 Effect of JXZKG on the reflection index of rats (x± s，n＝60)

注（Note）：與空白對照組比較，*P ＜0.05（vs the blank control group，*P＜0.05）。

組別 反射指標/d空中翻正反射 聽覺驚愕反射 負向趨地性反射空白對照組 16.1±0.5 16.0±0.0 10.2±0.6 JXZKG低劑量組 16.2±0.7 16.0±0.0 10.1±0.4 JXZKG中劑量組 16.4±1.0* 16.0±0.0 10.1±0.5 JXZKG高劑量組 16.0±0.0 16.0±0.0 10.2±0.6

3.6 大鼠行為學指標情況

如表3～4所示，給藥中期，JXZKG中、高劑量組活動距離明顯低于同期空白對照組（P＜0.01）；高劑量組活動時間明顯低于同期空白對照組（P＜0.05），活動次數(shù)明顯高于同期空白對照組（P＜0.05）。各給藥組動物轉棒跌落次數(shù)與空白對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義。

表3 小兒荊杏止咳顆粒對動物自主活動檢測結果統(tǒng)計(±s，n＝10)Tab 3 Effect of JXZKG on the autonomic activity index of rats (±s，n＝10)

表3 小兒荊杏止咳顆粒對動物自主活動檢測結果統(tǒng)計(±s，n＝10)Tab 3 Effect of JXZKG on the autonomic activity index of rats (±s，n＝10)

注（Note）：與空白對照組比較，*P ＜0.05，**P＜0.01（vs the blank control group，*P＜0.05，**P＜0.01）。

組別 階段 檢測指標活動時間/s 活動次數(shù)/次 活動距離/m空白對照組 給藥前期 365.64±95.47 114±13 17.24±6.19給藥中期 444.03±71.84 109±21 25.55±15.84給藥末期 417.85±61.16 128±18 17.52±4.10 JXZKG低劑量組 給藥前期 264.06±145.22 95±25 12.27±9.38給藥中期 451.18±48.72 115±17 18.92±3.50給藥末期 408.87±58.37 119±30 15.42±4.52 JXZKG中劑量組 給藥前期 343.34±87.40 116±29 17.07±4.96給藥中期 420.50±50.61 128±21 15.81±3.00**給藥末期 355.20±88.15 128±26 13.05±6.39 JXZKG高劑量組 給藥前期 363.12±79.33 114±27 17.09±4.25給藥中期 385.93±67.04* 132±22* 14.28±3.03**給藥末期 425.38±67.52 127±21 17.90±5.77

表4 小兒荊杏止咳顆粒對動物轉棒檢測結果統(tǒng)計(±s，n＝10)Tab 4 Effect of JXZKG on rotating stick index of rats (x± s，n＝10)

表4 小兒荊杏止咳顆粒對動物轉棒檢測結果統(tǒng)計(±s，n＝10)Tab 4 Effect of JXZKG on rotating stick index of rats (x± s，n＝10)

組別 跌落次數(shù)/次給藥前期 給藥中期 給藥末期空白對照組 3±3 2±1 1±2 JXZKG低劑量組 4±4 2±2 1±2 JXZKG中劑量組 2±2 2±3 2±2 JXZKG高劑量組 2±1 2±2 2±2

3.7 脛骨長度及骨密度指標情況

如圖2所示，整個試驗期間各給藥組脛骨長度及骨密度分別與同期空白對照組相比，差異均無統(tǒng)計學意義。

圖2 小兒荊杏止咳顆粒對動物脛骨長度（A）和骨密度（B）的影響Fig 2 Effect of JXZKG on the tibia length（A）and the bone density（B）of rats

3.8 大鼠肝藥酶檢查結果

如表5所示，給藥末期，JXZKG低劑量組CYP1A2明顯低于同期空白對照組（P＜0.05），其他時期各劑量組差異均無統(tǒng)計學意義。

表5 小兒荊杏止咳顆粒對大鼠肝藥酶指標的影響(±s)Tab 5 Effect of JXZKG on the liver drug metabolizing enzym (x± s)

表5 小兒荊杏止咳顆粒對大鼠肝藥酶指標的影響(±s)Tab 5 Effect of JXZKG on the liver drug metabolizing enzym (x± s)

注（Note）：與空白對照組比較，*P ＜0.05（vs the blank control group，*P＜0.05）。

組別 階段 動物數(shù)/只 肝藥酶指標/（μmol·mL－1）CYP1A2 CPY2E1空白對照組 給藥前期 20 5.21±0.81 35.51±5.02給藥中期 10 3.83±0.89 22.35±4.20給藥末期 20給藥前期 20給藥中期 10給藥末期 20給藥前期 20 4.33±1.06 28.13±6.90 JXZKG低劑量組 4.70±0.96 32.63±4.55 4.00±1.23 23.09±5.50 3.94±0.86* 32.04±11.38 JXZKG中劑量組 4.65±0.90 34.39±5.13給藥中期 10 3.62±0.79 24.60±5.27給藥末期 20 3.65±0.92 29.34±7.87 JXZKG高劑量組 給藥前期 20 4.70±1.03 34.73±4.09給藥中期 10 3.78±0.80 25.50±7.79給藥末期 20 4.25±1.16 26.13±8.35

3.9 大鼠血清激素指標檢查結果

如表6所示，給藥前期，JXZKG高劑量組甲狀腺激素T3、T4明顯高于同期空白對照組（P＜0.01或P＜0.05），其他時期各劑量組差異均無統(tǒng)計學意義。

表6 小兒荊杏止咳顆粒對大鼠血清激素指標的影響(±s)Tab 6 Effect of JXZKG on the serum hormone index of rats (±s)

表6 小兒荊杏止咳顆粒對大鼠血清激素指標的影響(±s)Tab 6 Effect of JXZKG on the serum hormone index of rats (±s)

注（Note）：與空白對照組比較，*P ＜0.05，**P＜0.01（vs the blank control group，*P＜0.05，**P＜0.01）。

血清激素指標/（μmol·mL－1）PROG GH E Androgen ACTH 甲狀腺激素 T3甲狀腺激素T4空白對照組 給藥前期 20 17.73±4.45 202.65±94.38 74.36±30.58 4.19±1.07 5.39±2.10 50.49±16.88 36.80±12.85給藥中期 10 16.73±1.40 156.04±57.54 63.39±1.31 4.09±0.61 4.75±0.36 62.50±9.85 32.99±3.20給藥末期 20 17.41±1.49 225.91±85.82 59.78±2.51 3.67±1.09 4.51±1.13 59.89±13.03 34.68±8.59 JXZKG低劑量組 給藥前期 20 20.10±6.63 192.06±102.42 70.59±22.04 3.96±1.04 4.67±1.28 46.37±17.45 46.63±19.99給藥中期 10 16.11±1.55 132.30±33.55 64.13±2.00 4.28±0.85 4.95±0.61 68.90±8.97 35.67±3.60給藥末期 20 17.37±1.96 234.49±73.92 59.49±2.39 3.91±1.02 4.87±1.10 51.68±12.43 35.15±9.20 JXZKG中劑量組 給藥前期 20 19.51±4.76 186.17±60.03 75.34±24.52 3.56±0.80 4.56±1.87 61.17±32.73 43.06±19.22給藥中期 10 15.94±1.52 149.94±35.45 63.81±2.09 4.22±0.60 4.68±0.32 67.81±13.43 31.73±3.03給藥末期 20 16.79±1.72 247.30±54.53 60.86±4.27 3.25±0.57 5.02±0.97 57.87±11.31 34.87±5.94 JXZKG高劑量組 給藥前期 20 21.34±3.87 177.60±76.55 83.92±20.34 4.12±0.82 4.72±1.97 74.98±35.22* 56.06±20.23**給藥中期 10 15.87±0.87 130.74±40.29 63.81±2.00 4.22±0.44 4.79±0.66 65.74±7.54 36.10±4.59給藥末期 20 18.09±1.75 269.47±64.34 59.60±2.97 3.47±1.01 4.87±1.23 59.66±19.66 35.49±10.66組別 階段 動物數(shù)/只

3.10 大鼠免疫指標檢查結果

如表7所示，給藥前期，JXZKG高劑量組免疫球蛋白IgA高于同期空白對照組（P＜0.05），其他時期各劑量組差異均無統(tǒng)計學意義。

表7 小兒荊杏止咳顆粒對大鼠免疫指標的影響(±s)Tab 7 Effect of JXZKG on the immune index of rats (±s)

表7 小兒荊杏止咳顆粒對大鼠免疫指標的影響(±s)Tab 7 Effect of JXZKG on the immune index of rats (±s)

注（Note）：與空白對照組比較，*P ＜0.05（vs the blank control group，*P＜0.05）。

組別 階段 動物數(shù)/只 免疫指標/（μmol·mL－1）IgA IgM IgG IgE空白對照組 給藥前期 20 7.07±1.54 7.40±3.19 6.34±4.30 77.21±45.52給藥中期 10給藥末期 20給藥前期 20 7.28±1.12 7.93±1.99 8.75±2.57 111.56±17.40 7.67±1.26 6.39±1.47 7.19±2.73 101.09±25.07 JXZKG低劑量組 7.45±1.70 6.56±1.96 5.63±2.00 83.20±31.37給藥中期 10 7.77±1.14 8.82±1.28 10.33±2.91 113.13±23.23給藥末期 20 7.50±1.20 6.90±1.78 7.68±2.78 107.53±24.03 JXZKG中劑量組 給藥前期 20 7.83±2.53 6.66±1.45 5.46±2.67 80.58±36.00給藥中期 10 7.21±0.83 7.79±1.30 8.31±2.67 118.62±23.32給藥末期 20 7.92±1.60 6.85±1.55 9.05±4.43 114.17±29.44 JXZKG高劑量組 給藥前期 20 8.93±2.42* 6.75±2.01 6.34±2.84 90.68±34.33給藥中期 10 7.98±0.79 8.18±1.84 7.12±1.86 111.06±24.10給藥末期 20 7.75±1.66 6.82±1.54 8.59±2.94 118.42±26.26

3.11 組織病理學檢查結果

給藥前期、給藥中期和給藥末期及恢復期解剖的空白對照組及各劑量組動物組織器官大小、顏色及質地均未見明顯異常。給藥前期、給藥中期和給藥末期及恢復期組織病理學檢查均未發(fā)現(xiàn)JXZKG對幼齡SD大鼠腦、脊髓、垂體、胸腺、食管、氣管、甲狀腺/甲狀旁腺、唾液腺、胃腸道、胰腺、肝臟、腎臟、腎上腺、脾臟、肺臟、心臟、膀胱、睪丸、附睪、前列腺、精囊腺、卵巢和輸卵管、子宮和子宮頸、陰道、乳腺、哈氏腺、眼等組織有毒性意義的病理改變。

4 討論

4.1 JXZKG對一般評價指標的影響

體質量和體質量變化是毒性的敏感指標，幼齡動物出生后早期增長相對快速，故10周齡前的體質量每周至少稱量2次，以觀察體質量的細微變化，并有助于更準確地計算給藥量，更大限度地暴露藥物毒性[8-11]。且幼齡大鼠耳廓分離、睜眼和牙齒萌出等離乳前身體發(fā)育指標與體質量有明確的正相關，通過這些指標可觀察和判斷受試藥物是否導致發(fā)育延遲。本實驗結果顯示，僅哺乳期及斷乳前期25.4 g生藥·kg－1組幼齡大鼠的體質量與空白對照組比較有顯著性降低，相當于臨床劑量（按體質量計）的 10.2倍，但體質量下降幅度不大（未超過同期空白對照組體質量的10%），且此期間內動物體質量增長速度相比同期空白對照組無明顯差異；6.3和12.7生藥·kg－1均對幼齡大鼠的體質量增長無明顯影響；雖給予高劑量JXZKG會導致動物體質量下降，但并不會對動物產生系統(tǒng)損傷，故認為哺乳期及斷乳前期高劑量組動物體質量下降是灌胃給予高濃度的藥液產生的影響，無明顯毒理學意義。3個劑量均對幼齡大鼠的身體發(fā)育指標無明顯影響。以上結果表明，JXZKG對幼齡大鼠生長發(fā)育無明顯影響。

4.2 JXZKG對特殊系統(tǒng)指標的影響

特殊系統(tǒng)指標主要包括中樞神經系統(tǒng)、性發(fā)育和骨骼系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等[12-13]。本實驗對性成熟評估和神經行為測試、骨密度檢測以及對肝藥酶、血清球蛋白及激素指標進行檢測。性發(fā)育包括雄性睪丸下降、包皮分離和雌性陰道張開，檢測發(fā)現(xiàn)雄性大鼠睪丸下降發(fā)生在大鼠出生后22 d左右、包皮分離發(fā)生在42 d左右，陰道口張開發(fā)生在35 d左右，JXZKG低、中、高劑量均未引起其性發(fā)育時間點的改變，故JXZKG對幼齡大鼠性發(fā)育無明顯影響。中樞神經系統(tǒng)的發(fā)育評估應包括個體發(fā)育反射、感覺運動功能、學習和記憶功能等[13]。由結果分析，JXZKG低、中、高劑量空中對翻正反射、聽覺驚愕反射和負向趨地性反射等神經反射功能及協(xié)調性和自主活動等學習記憶能力沒有明顯的影響，則JXZKG對幼齡大鼠神經系統(tǒng)發(fā)育無明顯影響。本實驗通過檢測脛骨長度和骨密度評價JXZKG對骨骼系統(tǒng)發(fā)育的影響。由結果分析，JXZKG低、中、高劑量與空白對照組比較骨密度和脛骨長度均未見明顯差異，則JXZKG對幼齡大鼠骨骼系統(tǒng)發(fā)育無明顯影響。本實驗通過檢測血清球蛋白IgG、IgA、IgE、IgM評估對免疫系統(tǒng)發(fā)育的影響。由結果分析，JXZKG低、中、高劑量與空白對照組比較血清球蛋白IgG、IgA、IgE、IgM未見規(guī)律性差異，則JXZKG對幼齡大鼠免疫系統(tǒng)發(fā)育無明顯影響。

綜上所述，JXZKG對幼齡大鼠身體發(fā)育、神經系統(tǒng)、骨骼系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)發(fā)育均無明顯影響。JXZKG對幼齡大鼠無發(fā)育毒性劑量為25.4 g生藥·kg－1，為臨床劑量（按體質量計）的10.2倍。