滇重樓及其近緣種的表型變異與資源評(píng)價(jià)

王元忠 沈濤 張金渝

摘? 要：以滇重樓及其近緣種為對(duì)象，通過表型性狀調(diào)查結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)分析，研究重樓屬藥用植物的表型變異及各性狀對(duì)藥材產(chǎn)量的影響。結(jié)果顯示：16個(gè)表型性狀中，株高、莖粗、葉形、葉寬、葉柄長等性狀變異較大（CV值大于40.00%），萼片長、萼片數(shù)、花瓣數(shù)種間變異較?。–V值均小于25.00%）。5種重樓屬植物表型性狀的遺傳多樣性指數(shù)（H）為2.03～0.82;滇重樓和多葉重樓性狀的遺傳多樣性指數(shù)平均值最高。主成分分析結(jié)合偏最小二乘-判別分析顯示，多葉重樓、滇重樓的葉部和花部位性狀與其他物種差異較大;南重樓和西疇重樓的株高、莖粗、葉寬、根莖長、根莖直徑、根莖鮮重與其他重樓屬物種差異明顯;5種重樓屬植物中南重樓與西疇重樓形態(tài)最接近，較難區(qū)分。相關(guān)性分析表明，重樓屬植物地上性狀與地下性狀呈顯著或極顯著的正相關(guān)（P<0.05或P<0.01）;進(jìn)一步利用變量投影重要性指標(biāo)分析發(fā)現(xiàn)，根莖直徑、根莖長、葉柄長、葉長、葉寬、花梗長、株高和花瓣長是篩選藥用重樓高產(chǎn)種源的關(guān)鍵性狀。

關(guān)鍵詞：滇重樓;近緣種;表型變異;遺傳多樣性;資源評(píng)價(jià)

中圖分類號(hào)：S567????? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

Phenotypic Variation and Resource Evaluation of Paris polyphylla var. yunnanensis and Its Relative Species

WANG Yuanzhong1， SHEN Tao2， ZHANG Jinyu

1. Medicinal Plants Research Institute， Yunnan Academy of Agricultural Sciences， Kunming， Yunnan 650200， China; 2. College of Chemistry， Biology and Environment， Yuxi Normal University， Yuxi， Yunnan 653100， China

Abstract： In the present study， the phenotypic characteristics of Paris polyphylla var. yunnanensis and its relative species were investigated and analyzed. The variations of the phenotypic traits were studied through the investigation of traits and multiple statistical analyses. The plant height， stem diameter， leaf shape index， leaf width， petiole length， and traits had high values of interspecies variation coefficient （CV > 40.00%）. Meanwhile， the traits of flowers， such as calyx length and calyx width， had lower CV value （< 25.00%）. Genetic diversity indexes （H'） was ranged from 2.03 to 0.82. Paris polyphylla var. yunnanensis and P. polyphylla had the highest mean value of H' in the five species. The principal component analysis combined with Partial least squares-discrimination analysis showed the phenotype of leaf and flower were the key traits for discrimination between P. polyphylla and Paris polyphylla var. yunnanensis. Compared P. vietnamensis and P. cronquistii var. xichouensis with the other three species， plant height， stem diameter， leaf width， rhizome length， rhizome diameter， and rhizome fresh weight were different. The samples of P. vietnamensis， and P. cronquistii var. xichouensi were hard to distinguish from each other. Correlation analysis found that overground traits were significantly positively correlated with underground traits （P < 0.05 or P < 0.01）. Combined with VIP analysis， it could be found that rhizome diameter， rhizome length， petiole length， leaf length， leaf width， pedicel length， plant height， and petal length were key traits for selecting germplasm resources of high-yielding medicinal Paris species.

Keywords： Paris polyphylla var. yunnanensis; relative species; phenotypic variation; genetic diversity; resource evaluation

DOI： 10.3969/j.issn.1000-2561.2021.09.013

滇重樓（Paris polyphylla var. yunnanensis）隸屬百合科（Liliaceae）重樓屬（Paris L.），是云南具有地域特色的藥用植物，與同屬植物七葉一枝花（P. polyphylla var. chinensis）被《中國藥典》2020版收錄作為傳統(tǒng)名貴藥材重樓的主要基源植物[1]。滇重樓干燥根莖具有清熱解毒、消腫止痛、涼肝定驚等功效，是“云南白藥”“宮血寧膠囊”“季德勝蛇藥片”等80余種中成藥的主要原料[2]。隨著工業(yè)化生產(chǎn)需求增加，滇重樓野生資源遭到人為過度采挖，瀕臨滅絕，其替代藥源的開發(fā)與資源評(píng)價(jià)迫在眉睫[2-3]。

南重樓（P. vietnamensis）、西疇重樓（P. cronquistii var. xichouensis）、多葉重樓（P. polyphylla）等重樓屬植物的藥用價(jià)值已受到學(xué)者廣泛關(guān)注。趙飛亞等[4]利用超高效液相色譜（UPLC）技術(shù)對(duì)10種重樓化學(xué)成分進(jìn)行定量分析，認(rèn)為多葉重樓質(zhì)量?jī)?yōu)于《中國藥典》收錄品種，而南重樓與滇重樓質(zhì)量相近。Wang等[5]基于重樓皂苷（polyphyllin）Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ及纖細(xì)薯蕷皂苷（gracillin）定量分析結(jié)果，發(fā)現(xiàn)西疇重樓藥效成分含量較高的，可作為滇重樓的替代藥源。楊遠(yuǎn)貴等[6]對(duì)重樓屬植物化學(xué)成分與藥理活性進(jìn)行綜述報(bào)道，表明該屬大部分物種具有藥用價(jià)值，藥用資源開發(fā)潛力巨大。

表型性狀是生物資源評(píng)價(jià)與種質(zhì)篩選的基礎(chǔ)，也是衡量物種多樣性的重要指標(biāo)。對(duì)藥用植物表型性狀的遺傳多樣性進(jìn)行評(píng)價(jià)，有助于后續(xù)藥材優(yōu)異基因挖掘、品種選育改良[7-9]。重樓屬植物形態(tài)變異大，種間甚至同種不同種群間的性狀特征常有交叉重疊，不同文獻(xiàn)記載的重要性狀和分類觀點(diǎn)不統(tǒng)一，阻礙著該屬藥用資源的正確認(rèn)識(shí)及客觀評(píng)價(jià)[10-11]。除種源鑒別問題，王騫等[12]研究發(fā)現(xiàn)表型性狀可能影響藥材質(zhì)量，葉長、葉形指數(shù)等性狀與重樓藥用部位藥效成分含量呈現(xiàn)

正相關(guān)關(guān)系。重樓藥材生產(chǎn)過程中，亟待尋找表現(xiàn)直觀、易于識(shí)別、與生產(chǎn)直接相關(guān)的植物性狀，以協(xié)助藥用重樓種源鑒別與良種篩選[13-14]。

目前，藥用重樓表型變異及相關(guān)資源評(píng)價(jià)主要集中于滇重樓[14-15]，其他重樓屬植物報(bào)道較少[16-17]。本研究選取‘滇重樓‘七葉一枝花‘南重樓‘西疇重樓和‘多葉重樓為研究對(duì)象，結(jié)合植物形態(tài)學(xué)、數(shù)量分類學(xué)的理論與方法，研究5種重樓屬植物表型性狀種間變異及其多樣性，探討表型性狀對(duì)藥源鑒別和優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)種源篩選的實(shí)際意義，研究以期為滇重樓及其近緣種的鑒別與資源評(píng)價(jià)提供理論依據(jù)。

1? 材料與方法

1.1? 材料

分別從中國云南、廣西及越南高平省收集‘滇重樓‘七葉一枝花‘南重樓‘西疇重樓和‘多葉重樓5種重樓屬植物6個(gè)種群的野生資源，每個(gè)種群選取生長5 a左右的植株根莖，播種于資源圃相同遮陰棚內(nèi)。遮陰棚的遮光度為50%，播種株行距10 cm×15 cm，種植過程中，不施肥，統(tǒng)一除草和澆水管理。在花期統(tǒng)一采收植株并測(cè)定農(nóng)藝性狀。實(shí)驗(yàn)樣品信息詳見表1。

實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)位于云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院藥用植物研究所種質(zhì)資源圃內(nèi)，經(jīng)緯度為102.98°E，25.18°N;海拔為1985 m，栽培土壤為紅壤，氣候帶類型為北亞熱帶，年平均溫度14～16 ℃，年平均最高溫度30～32 ℃，年平均最低溫度–5～–2 ℃，年均降水量900～1000 mm，年日照時(shí)數(shù)2108 h，植物生長期為220～280 d。

1.2? 方法

1.2.1? 形態(tài)指標(biāo)的測(cè)定? 選取16個(gè)與藥材品質(zhì)相關(guān)的表型性狀進(jìn)行測(cè)定[9， 14]。地上性狀包括株高、莖粗、葉片數(shù)、葉長、葉寬、葉形指數(shù)、葉柄長、花梗長、萼片數(shù)、萼片長、萼片寬、花瓣數(shù)、花瓣長;地下性狀包括根莖長、根莖直徑、根莖鮮重。以上性狀每一種群測(cè)定株數(shù)見表 每一植株的每個(gè)性狀重復(fù)測(cè)定3次，取平均值。株高、葉長、葉寬、葉柄長、花梗長、根莖長采用直尺測(cè)量;莖粗、萼片長、萼片寬、花瓣長和根莖直徑采用游標(biāo)卡尺測(cè)量。根莖鮮重用感量0.01 g電子天平稱重。

1.2.2? 數(shù)據(jù)處理? 表型性狀的平均值、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)及遺傳多樣性指數(shù)用Excel計(jì)算，單因素方差分析、相關(guān)性分析用SPSS 20.0計(jì)算;PCA、PLS-DA、PLS-R和VIP分析用SIMCA 14.1完成。

單因素方差分析（one-way ANOVA）和scheffé test用于比較5種重樓屬植物表型性狀的種間異性;變異系數(shù)（coefficient of variation， CV）用于評(píng)價(jià)滇重樓及其近緣種的表型變異程度;依據(jù)表型性狀平均值（Mean）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD）計(jì)算遺傳多樣性指數(shù)（H=-∑PilinPi，Pi表示第i級(jí)的頻率）[18];主成分分析（principal component analysis， PCA）、偏最小二乘-判別分析（partial least squares-discrimination analysis， PLS-DA）用于重樓樣品的分類研究;相關(guān)性分析（pearson correlation analysis）初步研究各性狀間的相互關(guān)系，

利用偏最小二乘-回歸分析（partial least squares- discrimination analysis， PLS-R）構(gòu)建表型性狀與藥材產(chǎn)量間的關(guān)系模型[19];變量投影重要性指標(biāo)（variable projection importance indicator， VIP）用于篩選影響根莖產(chǎn)量的關(guān)鍵性狀[19]。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 5種重樓屬植物的表型性狀比較

單因素方差分析顯示（表2），‘滇重樓花部萼片寬度、花瓣長度數(shù)值較高，與其他物種差異顯著（P<0.05）?！现貥呛汀鳟犞貥堑娜~長、葉寬、葉柄長、花梗長數(shù)值較高，‘多葉重樓中數(shù)值最低，呈顯著差異（P<0.05）?！现貥禽嗥L、花瓣長數(shù)值較高，與其他重樓屬植物有顯著差異（P<0.05）。‘滇重樓‘南重樓和‘西疇重樓葉片形狀較接近，葉形指數(shù)為1.99～2.20;‘七葉一枝花葉片狹長，葉形指數(shù)最高，葉形指數(shù)為（4.99±0.56）;‘多葉重樓葉片數(shù)目最多，七葉一枝花次之，其他重樓樣品間差異不顯著（P>0.05）。地下性狀中，‘西疇重樓根莖鮮重、根莖長和根莖直徑數(shù)值均最高，而‘多葉重樓地下各性狀數(shù)值均最低，二者差異顯著（P<0.05），其他重樓屬植物地下性狀差異未達(dá)顯著水平（P>0.05）。

2.2? 表型變異與遺傳多樣性分析

從表3可見，16個(gè)性狀中，株高、莖粗、葉形、葉寬、葉柄長、花梗長、花瓣長和根莖鮮重是種間變化較大的性狀，以上性狀CV值均大于40.00%。其中，地下性狀根莖鮮重CV值達(dá)92.69%;花部性狀萼片長、萼片數(shù)、花瓣數(shù)種間變化較小，CV值均小于25.00%;莖葉性狀中，葉片數(shù)變化較?。–V值為25.73%），其余性狀均有明顯變異。

遺傳多樣性指數(shù)計(jì)算顯示（表4），5種重樓屬植物16個(gè)性狀的遺傳多樣性指數(shù)為2.03～0.82，其中花梗長、根莖直徑在‘滇重樓中數(shù)值最大，分別為2.00和2.03;株高、葉寬及葉形指數(shù)在‘多葉重樓中也較高，數(shù)值分別為2.01、2.01和2.02;葉片數(shù)在‘滇重樓及‘西疇重樓中遺傳多樣性指數(shù)最低，數(shù)值分別為0.82和0.86;萼片數(shù)、花瓣數(shù)在‘七葉一枝花和‘西疇重樓中最低，數(shù)值均≤0.98。綜合比較發(fā)現(xiàn)，‘滇重樓和‘多葉重樓16個(gè)性狀的遺傳多樣性指數(shù)平均值最高;各性狀中，株高、葉形、花梗長、萼片長等表型變異式樣豐富，具有較高的遺傳多樣性。

2.3? 基于表型性狀的PCA與PLS-DA分析

以‘滇重樓‘七葉一枝花‘南重樓‘西疇重樓和‘多葉重樓的16個(gè)性狀為變量利用主成分分析對(duì)樣品間的分類與聚集趨勢(shì)進(jìn)行初步探索。結(jié)果顯示（圖1A），基于表型數(shù)據(jù)大部分樣品依照其所屬類群進(jìn)行劃分，‘七葉一枝花與‘滇重樓‘多葉重樓形態(tài)較為接近;‘多葉重樓及其變種與‘南重樓及‘西疇重樓在形態(tài)上差異較明顯，而‘南重樓和‘西疇重樓樣品間分離趨勢(shì)不明顯共同聚為另一類。結(jié)合主成分分析載荷圖發(fā)現(xiàn)（圖1B），葉片數(shù)、葉形指數(shù)、花瓣數(shù)、萼片數(shù)是區(qū)分‘多葉重樓與其他重樓屬植株的重要性狀;萼片寬、萼片長及花瓣長在區(qū)分‘滇重樓時(shí)貢獻(xiàn)較大;而‘南重樓與‘西疇重樓的莖粗、株高、葉寬、根莖長、根莖直徑、根莖鮮重、根莖長等性狀與其他重樓屬植物差異較明顯。

在PCA分析基礎(chǔ)上，采用有監(jiān)督的偏最小二乘-判別分析建立5種重樓屬植物的分類模型。結(jié)果顯示（圖2A），藥用重樓樣品可被明顯的區(qū)分為4類，‘滇重樓聚為第1類;‘七葉一枝花‘多葉重樓分別聚為第2類和第3類，但兩個(gè)物種間有少量樣品難以區(qū)分;‘南重樓與‘西疇重樓最難區(qū)分，總體聚為第4類。為證明分類模型的有效性，對(duì)分類結(jié)果進(jìn)行了200次置換重要性檢驗(yàn)，結(jié)果顯示（圖2B），位于圖形左邊的R2Y和Q2Y均低于右側(cè)的R2Y和Q2Y值，且R2回歸線截距小于0. Q2回歸線截距小于0，表明模型預(yù)測(cè)結(jié)果未出現(xiàn)過擬合，分類結(jié)果較準(zhǔn)確。

2.4? 性狀間的相關(guān)性分析

Pearson相關(guān)性分析顯示，‘滇重樓‘七葉一枝花和‘多葉重樓地上多個(gè)性狀數(shù)值變化與植株根莖長、根莖直徑呈顯著或極限顯著相關(guān)（P<0.05或P<0.01）。株高、莖粗?jǐn)?shù)值的增加有助于上述3種重樓地下性狀數(shù)值的增長（P<0.05或P<0.01）;葉部性狀中，葉長、葉寬、葉片數(shù)與根莖鮮重和根莖直徑呈顯著正相關(guān)（P<0.05或P<0.01）;花部性狀中，‘滇重樓‘多葉重樓地下性狀與花梗長、花萼數(shù)、花瓣數(shù)等性狀呈顯著或極顯著正相關(guān)（P<0.05或P<0.01）。‘南重樓和‘西疇重樓地上性狀與地下性狀數(shù)值的相關(guān)性較弱，但葉柄長與根莖直徑、根莖鮮重呈顯著正相關(guān)（P<0.05）。

為進(jìn)一步建立藥用重樓高產(chǎn)種源的快速篩選方法，將85份藥用重樓的株高、莖粗、葉片數(shù)等15個(gè)性狀作為自變量（X），樣品根莖部位鮮重為因變量（Y）進(jìn)行偏最小二乘-回歸分析。結(jié)果顯示，回歸模型R2X（cum）為0.749，即模型對(duì)變量X的解釋能力為74.90%;R2Y（cum）為0.872，表明提取的主成分能解釋的因變量變異87.20%;Q2（cum）為0.813，大于0.50，顯示預(yù)測(cè)結(jié)果較理想。繪制VIP得分圖顯示（圖3A），根莖直徑、根莖長、葉柄長、葉寬、葉長、花梗長和株高共7個(gè)性狀的VIP值大于1.00，表明上述性狀對(duì)預(yù)測(cè)重樓根莖鮮重具有重要作用是篩選藥用重樓高產(chǎn)種源的關(guān)鍵性狀。

此外，利用‘滇重樓‘七葉一枝花‘多葉重樓及‘西疇重樓地上性狀與藥材根莖鮮重進(jìn)行回歸分析發(fā)現(xiàn)，回歸模型R2X（cum）為0.64，R2Y（cum）為0.772，Q2（cum）為0.67 表明上述4種藥用重樓僅依據(jù)地上性狀也能對(duì)藥材產(chǎn)量進(jìn)行預(yù)測(cè)。其中重要地上性狀排序依次為（VIP值大于0.80）：葉柄長>葉長>葉寬>花梗長>株高>莖粗>葉片數(shù)（圖3B）。

3? 討論

采用ISSR（inter simple sequence repeat）、RSAP（restriction site amplification polymorphism）、SCOT（start codon targeted polymorphism）等分子標(biāo)記對(duì)多葉重樓、滇重樓、狹葉重樓（P. polyphylla var. stenophylla）、球藥隔重樓（P. fargesii var. fargesii）等物種的研究發(fā)現(xiàn)，該屬植物遺傳多樣性水平較高，種內(nèi)和種間具有豐富的遺傳變異[20-23]。本實(shí)驗(yàn)研究顯示，5種重樓屬植物16個(gè)性狀的遺傳多樣性指數(shù)為2.03～0.82，表型性狀種間呈現(xiàn)豐富多樣的變異式樣。根莖是重樓的入藥部位?！嶂貥恰呷~一枝花‘西疇重樓和‘多葉重樓的研究發(fā)現(xiàn)，根莖鮮重種間變異達(dá)92.69%。豐富的性狀變異有助于后續(xù)栽培馴化及特異種質(zhì)資源的發(fā)掘。

重樓屬種及種下形態(tài)分類較困難，如‘南重樓在云南文山西疇、紅河建水一帶形態(tài)與‘滇重樓較接近，而在瑞麗至西雙版納勐臘一帶與‘多葉重樓較接近[10]。李恒等[10]依據(jù)重樓屬植物形態(tài)特征及演化趨勢(shì)，將重樓分為2個(gè)亞屬，8個(gè)組，24個(gè)種。其中，‘滇重樓‘七葉一枝花‘多葉重樓‘西疇重樓和‘南重樓均屬側(cè)膜亞屬的植物，‘西疇重樓為凌云重樓的變種，‘南重樓為獨(dú)立種，‘滇重樓和‘七葉一枝花為多葉重樓的變種。Ji等[20]基于細(xì)胞核ITS序列和質(zhì)體DNA序列數(shù)據(jù)對(duì)21種重樓屬植物進(jìn)行分類研究，結(jié)果顯示，‘南重樓與‘西疇重樓親緣關(guān)系較接近，‘七葉一枝花與以上物種親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，與‘多葉重樓親緣關(guān)系更近。國內(nèi)學(xué)者利用葉綠體matK基因和RSAP分子標(biāo)記對(duì)重樓屬植物的遺傳關(guān)系進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)‘滇重樓‘七葉一枝花和‘多葉重樓可劃分為一類，并建議將‘滇重樓‘七葉一枝花作為多葉重樓的變形處理[21-22]。本研究基于16個(gè)表型性狀的PCA及PLS-DA分析顯示，‘西疇重樓和‘南重樓樣品多聚為一類;‘滇重樓‘七葉一枝花是多葉重樓的變種，3個(gè)物種各性狀的數(shù)量特征具有一定的相似性，但大部分樣品可以被區(qū)分。各性狀中，葉部和花部性狀是區(qū)分‘多葉重樓及其變種的關(guān)鍵性狀，而地下性狀在區(qū)分‘南重樓‘西疇重樓時(shí)貢獻(xiàn)較大。

植物性狀間常存在相互聯(lián)系，以上關(guān)系可輔助根莖類藥材地下性狀的篩選[24]。地黃（Rehmannia glutinosa）研究顯示，植株塊根鮮重與莖葉性狀相關(guān)性顯著，通過對(duì)冠幅、莖粗、葉片大小等性狀的選擇可提高地黃單株塊根產(chǎn)量[25]。高曉霞等[26]對(duì)不同品系黃芩（Scutellaria baicalensis）農(nóng)藝性狀的相關(guān)性進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)蘆頭直徑與根鮮重存在極顯著的相關(guān)性，該結(jié)論可協(xié)助黃芩藥材的品種選育?！嶂貥恰呷~一枝花及‘多葉重樓是目前栽培較多、經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高的藥用重樓，市場(chǎng)對(duì)高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)種源需求迫切。然而實(shí)際生產(chǎn)中重樓根莖性狀在選育過程中難以直接觀測(cè)。5種重樓屬植物表型性狀相關(guān)性分析顯示，地上、地下多對(duì)性狀間存在正相關(guān)關(guān)系?！嶂貥恰呷~一枝花‘多葉重樓地上性狀與地下根莖鮮重相關(guān)性較強(qiáng)，通過建立回歸模型，葉柄長、葉長、葉寬、花梗長、株高、莖粗和葉片數(shù)可間接預(yù)測(cè)地下藥用部位產(chǎn)量，今后研究可進(jìn)一步增加樣本量完善預(yù)測(cè)模型，服務(wù)實(shí)際生產(chǎn)，提高種源的篩選效率，縮短篩選周期。

參考文獻(xiàn)

[1]? 國家藥典委員會(huì). 中華人民共和國藥典（一部）[M]. 北京： 中國醫(yī)藥科技出版社， 2020： 271-272.

[2]? 陶愛恩， 趙飛亞， 李若師， 等. 重樓產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀及發(fā)展對(duì)策[J]. 中草藥， 2020， 51（18）： 4809-4815.

[3]? Cunningham A B， Brinckmann J A， Bi Y F， et al. Paris in the spring： a review of the trade， conservation and opportunities in the shift from wild harvest to cultivation of Paris Polyphylla （Trilliaceae）[J]. Journal of Ethnopharmacology， 2018， 222： 208-216.

[4]? 趙飛亞， 陶愛恩， 管? 鑫， 等. 重樓多指標(biāo)UPLC定量分析及其化學(xué)品質(zhì)綜合評(píng)價(jià)[J]. 中草藥， 2020， 51（18）： 4763-4770.

[5]? Wang Y Z， Liu E H， Li P. Chemotaxonomic studies of nine Paris species from China based on ultra-high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry and Fourier transform infrared spectroscopy[J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis， 2017， 140： 20-30.

[6]? 楊遠(yuǎn)貴， 張? 霽， 張金渝， 等. 重樓屬植物化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展[J]. 中草藥， 2016， 47（18）： 3301-3323.

[7] 張深梅， 奚建偉， 洪俊彥， 等. 大別山山核桃果實(shí)與葉片性狀的表型多樣性研究[J]. 林業(yè)科學(xué)研究， 2020， 33（1）： 152-161.

[8]? 李秀詩， 付瑜華， 周? 祥， 等. 基于表型性狀的薏苡初級(jí)核心種質(zhì)庫構(gòu)建[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào)， 2020， 41（4）： 669-675.

[9]? 王春芳， 余興華， 王先宏， 等. 基于主要表型性狀的不同采集地斑茅種質(zhì)資源遺傳多樣性分析[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào)， 2020， 41（6）： 1108-1116.

[10]????? 李? 恒. 重樓屬植物[M]. 北京： 科學(xué)出版社， 1998： 12-64.

[11]????? 趙萬順， 高文遠(yuǎn)， 黃賢校， 等. 重樓屬藥用植物的數(shù)量分類學(xué)研究[J]. 中國中藥雜志， 2010， 35（12）： 1518-1520.

[12]????? 王? 騫， 丁? 媛， 楊? 敏， 等. 滇重樓品質(zhì)與產(chǎn)地和表型性狀相關(guān)性分析[J]. 中國中藥雜志， 2019， 44（15）： 3203-3212.

[13]????? SONG Y， LI M F， XU J， et al. Polymorphic microsatellite markers in the traditional Chinese medicinal plant Paris Polyphylla var. Yunnanensis[J]. Genetics and Molecular Research， 2015， 14（3）： 9939-9942.

[14]????? 李? 戈， 王艷芳， 唐? 玲， 等. 滇重樓表型性狀變異、主成分、相關(guān)及通徑分析[J]. 中藥材， 2015， 38（7）： 1339-1342.

[15]????? 唐? 玲， 王艷芳， 李榮英， 等. 滇重樓不同居群的表型多樣性研究[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報(bào)， 2013， 29（18）： 89-95.

[16]????? 翁? 周， 王? 麗， 唐? 銳， 等. 多葉重樓的形態(tài)變異研究[J]. 四川大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）， 2008， 45（5）： 1228-1234.

[17]????? 童? 凱， 孫? 旭， 姜美杰， 等. 華重樓的形態(tài)多樣性及其與單株產(chǎn)量和質(zhì)量的關(guān)系[J]. 中國中藥雜志， 2017， 42（7）： 1300-1303.

[18]????? 劉三才， 鄭殿升， 曹永生， 等. 中國小麥選育品種與地方品種的遺傳多樣性[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2000， 33（4）： 20-24.

[19]????? 崔丹丹， 曾令杰， 黃嘉玲， 等. 基于主成分聚類和PLS回歸分析的穿心蓮質(zhì)量等級(jí)評(píng)價(jià)研究[J]. 中草藥， 2019， 50（13）： 3200-3206.

[20]????? Ji Y H， Fritsch P W， Li H， et al. Phylogeny and classification of Paris （Melanthiaceae） inferred from DNA sequence data[J]. Annals of Botany， 2006， 98（1）： 245-256.

[21]????? 馬? 劍， 李迪強(qiáng)， 張于光， 等. 基于matK基因的幾種重要重樓屬植物遺傳關(guān)系分析[J]. 中國中藥雜志， 2010， 35（1）： 18-21.

[22]????? 辛本華， 田孟良， 吳鑌鑼， 等. 重樓屬植物遺傳多樣性的RSAP標(biāo)記[J]. 中國中藥雜志， 2011， 36（24）： 3425-3427.

[23]????? 李? 壯， 辛本華， 楊? 華， 等. 重樓屬植物遺傳多樣性的SCOT標(biāo)記[J]. 廣西植物， 2014， 34（3）： 315-319， 368.

[24]????? 王國勛， 于順利， 方偉偉， 等. 植物群落構(gòu)件的協(xié)同性研究進(jìn)展[J]. 生態(tài)學(xué)雜志， 2014， 33（10）： 2824-2833.

[25]????? 王豐青， 田云鶴， 黃? 勇， 等. 18個(gè)地黃種質(zhì)的表型性狀及相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析[J]. 植物資源與環(huán)境學(xué)報(bào)， 2015， 24（1）： 28-35.

[26]????? 高曉霞， 陳? 君， 徐? 榮， 等. 不同品系黃芩主要表型性狀的差異與相關(guān)分析[J]. 中國中藥雜志， 2016， 41（2）： 205-210.

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