臨床微生物實(shí)驗(yàn)室B族鏈球菌檢測(cè)進(jìn)展

滕潔麗

【摘要】傳統(tǒng)的GBS的檢測(cè)方法包括臨床樣本直接涂片染色鏡檢和細(xì)菌培養(yǎng)，一些新的檢測(cè)方法包括乳膠凝聚實(shí)驗(yàn)、免疫層析法、基因組學(xué)法（熒光原位雜交法、斑點(diǎn)印跡法、實(shí)時(shí)熒光定量PCR法）、蛋白質(zhì)組學(xué)法，這些檢測(cè)方法的使用顯著提高了疾病的早期診斷水平，但仍有必要進(jìn)一步了解與總結(jié)。本文就GBS實(shí)驗(yàn)檢測(cè)方法及進(jìn)展進(jìn)行綜述。

【關(guān)鍵詞】B族鏈球菌;細(xì)菌培養(yǎng);PCR

B族鏈球菌（Streptococcus agalactiae，GBS）正常寄居在人的陰道與直腸，其感染對(duì)母嬰危害非常大，能誘發(fā)孕產(chǎn)婦絨毛膜膜炎、子宮內(nèi)膜炎等，嚴(yán)重可致早產(chǎn)和死胎，因此早發(fā)現(xiàn)早預(yù)防十分必要。隨著臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)的快速發(fā)展，為臨床早發(fā)現(xiàn)早預(yù)防提供便利。本文主要內(nèi)容包括：GBS標(biāo)本直接檢測(cè)法、細(xì)菌培養(yǎng)法及分子生物學(xué)檢測(cè)法。

1 標(biāo)本直接染色鏡檢

GBS屬于兼性厭氧的β溶血性革蘭氏陽性鏈球菌，單個(gè)、成雙、鏈狀排列、長(zhǎng)短不一，有經(jīng)驗(yàn)的檢驗(yàn)人員可通過直接鏡檢可初步判斷。直接染色鏡檢操作簡(jiǎn)便，結(jié)果直觀，比較快速，但總體敏感度從34%-100%不等，特異性普遍低為61%-72%，陽性預(yù)測(cè)值為13%-33%。在用涂片染色鏡檢法檢測(cè)GBS時(shí)，需要采用多次取材并做多張涂片，以提高檢測(cè)的陽性率。此法簡(jiǎn)便適用于基層，可作為帶菌者的篩選方法。

2 細(xì)菌培養(yǎng)法

細(xì)菌培養(yǎng)法是GBS檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)。采樣一般為陰道拭子（采用無菌拭子，于陰道口約1/3處旋轉(zhuǎn)取樣，不需要使用陰道擴(kuò)張器）和直腸拭子（在肛門口深2cm左右輕輕旋轉(zhuǎn)采樣）。

2.1普通培養(yǎng)法

將標(biāo)本直接種在血平板上，接種后置于5% CO2、35℃孵育箱，孵育2d觀察菌落生長(zhǎng)情況，如有菌落生長(zhǎng)則作鑒定。提高檢測(cè)率可先將標(biāo)本經(jīng)肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)12小時(shí)后再轉(zhuǎn)血平板培養(yǎng)。

2.2液體顯色培養(yǎng)

將標(biāo)本置于液體顯色培養(yǎng)基中，利用GBS具有產(chǎn)生橙色類蘿卜素天然色素的獨(dú)特性，使培養(yǎng)基顯色。特異性和敏感度較高，結(jié)果可以通過肉眼判讀。缺點(diǎn)：一些弱陽性結(jié)果會(huì)呈點(diǎn)狀散于培養(yǎng)基中或出現(xiàn)在沉淀物與上清液交界面，不可震蕩培養(yǎng)基。

2.3顯色平板培養(yǎng)

顯色平板培養(yǎng)是傳統(tǒng)培養(yǎng)法的改良，在平板上添加某類抑制劑和指示劑，使GBS菌落顯色為特定的顏色。如安圖的GBS顯色平板，GBS菌落為粉紅色，非目標(biāo)菌多數(shù)為藍(lán)色或綠色，易于辨認(rèn)。

細(xì)菌培養(yǎng)法優(yōu)點(diǎn)可以做藥敏，缺點(diǎn)因其操作過程復(fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)（需要24～48 h），并且由于陰道及肛門周圍雜菌較多，檢測(cè)結(jié)果會(huì)有一定的假陽性和假陰性，但準(zhǔn)確性高。

3 ? CAMP試驗(yàn)

CAMP試驗(yàn)為觸酶陰性和協(xié)同溶血試驗(yàn)，挑取可疑菌落進(jìn)行CAMP實(shí)驗(yàn)，在血瓊脂平板上用產(chǎn)生β-溶血素的金黃色葡萄球菌培養(yǎng)物劃一條直線，然后將鏈球菌培養(yǎng)物劃一條線，與金黃色葡萄球菌培養(yǎng)物的劃線相互垂直，二者相距3～5mm，各鏈球菌分離菌劃線間距10～20mm。置37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。在兩劃線交界處是否出現(xiàn)箭頭樣的溶血區(qū)，出現(xiàn)為陽性，反之陰性。這是一種特異性診斷試驗(yàn)，但試驗(yàn)時(shí)間長(zhǎng)，操作步驟繁瑣，容易受到部分β-溶血鏈球菌（如假豕鏈球菌等）及血平板各批綿羊血不同的干擾，還有其他很多因素影響。

4 ? 聚合酶鏈反應(yīng)

聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction， PCR）快速診斷GBS的原理是通過設(shè)計(jì)特異性引物和探針，對(duì)GBS中保守序列進(jìn)行擴(kuò)增，用熒光的強(qiáng)度檢測(cè)產(chǎn)物的數(shù)量。靶基因快速準(zhǔn)確的擴(kuò)增百萬倍，達(dá)到迅速、敏感檢測(cè) GBS的目的。熒光定量PCR法是通過實(shí)時(shí)熒光PCR儀檢測(cè)熒光強(qiáng)度以判斷孕婦是否具有GBS感染，有快速、準(zhǔn)確、敏感度高等特點(diǎn)，在臨床上更為實(shí)用，是目前臨床上應(yīng)用較普遍的GBS檢測(cè)方式，已在許多醫(yī)院中投入使用，但是其儀器昂貴、技術(shù)要求較高的特點(diǎn)限制了該技術(shù)在基層醫(yī)院的廣泛應(yīng)用。

5 ?結(jié)束語

GBS檢測(cè)方法很多，直接涂片染色操作簡(jiǎn)便直觀實(shí)惠。培養(yǎng)法準(zhǔn)確率高，還可以做藥敏，但耗時(shí)長(zhǎng)。PCR簡(jiǎn)單、快速具有高靈敏度和特異度，但對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件要求高。每個(gè)方法都有優(yōu)缺點(diǎn)，我們可以根據(jù)自己的實(shí)際情況選擇合適的檢測(cè)方法。隨著科學(xué)的不斷進(jìn)步，檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展未來有能通過先進(jìn)技術(shù)解決現(xiàn)在方法的局限性。

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