李海琴，方紹培，譚美芳，曾艷兵，黃江南，季華員，張帆帆，譚 佳，陳小連，康昭風(fēng)，楊 群，韋啟鵬

（江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 畜牧獸醫(yī)研究所，江西 南昌 330200）

【研究意義】鴨坦布蘇病毒?。―uck Tembusu virus disease，DTMUVD）是由新型黃病毒——鴨坦布蘇病毒（Duck Tembusu virus，DTMUV）引起的一種以蛋鴨產(chǎn)蛋驟降、雛鴨出現(xiàn)頭頸震顫、四肢麻痹等神經(jīng)癥狀為主要特征的急性傳染病[1-2]。該病自2010年在我國(guó)東南地區(qū)陸續(xù)發(fā)生，并迅速蔓延至我國(guó)各個(gè)主要養(yǎng)鴨省市，給養(yǎng)鴨業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[3-6]。疫苗免疫接種是預(yù)防和控制該病的主要措施之一，目前市場(chǎng)上已有預(yù)防鴨坦布蘇病毒病的商品化疫苗。鴨瘟（Duck plague，DP）又稱鴨病毒性腸炎（Duck viral enteritis，DVE），是由皰疹病毒科的鴨瘟病毒（Duck plague virus，DPV）引起的雁形目水禽類的一種急性、熱性、敗血性傳染病[7]。目前我國(guó)采用的鴨瘟雞胚化弱毒活疫苗保護(hù)雛鴨免受強(qiáng)毒攻擊[8]。隨著養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，鴨病尤其是病毒性疾病的流行日趨嚴(yán)重，特別是鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟對(duì)養(yǎng)鴨業(yè)的打擊是毀滅性的[9-12]，迫切需要對(duì)江西地區(qū)規(guī)模化種鴨場(chǎng)鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟進(jìn)行免疫狀況調(diào)查?！厩叭搜芯炕A(chǔ)】酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）是血清學(xué)中最常用的檢測(cè)方法之一，已有研究應(yīng)用ELISA 方法進(jìn)行鴨坦布蘇病毒和鴨瘟血清流行病學(xué)調(diào)查和疫苗免疫效果評(píng)價(jià)[13-17]?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】江西地區(qū)的種鴨養(yǎng)殖發(fā)展迅速，但江西地區(qū)種鴨場(chǎng)鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟免疫狀況尚不清楚，應(yīng)用ELISA 方法對(duì)江西規(guī)?；N鴨場(chǎng)鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟免疫狀況調(diào)查是有效途徑。【擬解決的關(guān)鍵問題】本研究選定江西省部分規(guī)?；N鴨場(chǎng)，調(diào)查了鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟的抗體陽性率，并對(duì)不同季度的鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟抗體陽性率進(jìn)行了分析，旨在掌握江西地區(qū)種鴨場(chǎng)鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟的免疫狀況，為種鴨場(chǎng)有效防控鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 鴨血清 2020年4月—2021年3月，在江西省南昌、吉安、贛州、九江等地的規(guī)模化種鴨場(chǎng)，選取日齡為130～160日齡表觀健康種鴨，共抽取1 233份血清樣品。

1.1.2 試驗(yàn)試劑 鴨坦布蘇病毒抗體（DTMUV-Ab）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒和鴨瘟抗體（DPV-Ab）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒，購自上海臻科生物科技有限公司；配液所用雙蒸水，江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室制備。

1.1.3 儀器 全自動(dòng)酶標(biāo)儀（Thermo Multiskan Mk3），洗板機(jī)（Thermo Wellwash 4 MK2）；微量移液器（Eppendorf）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 ELISA 檢測(cè) 將待檢血清樣品編號(hào)。檢測(cè)步驟分別按照鴨坦布蘇酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒和鴨瘟酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒方法操作。

1.2.2 ELISA 檢測(cè)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 當(dāng)陽性對(duì)照孔OD450值≥1.00；陰性對(duì)照孔OD450值平均值≤0.15時(shí)，試驗(yàn)結(jié)果成立。當(dāng)樣品孔OD450值>陰性對(duì)照孔平均值+0.15，樣品判為陽性，否則判為陰性。

1.2.3 群體免疫合格率 群體免疫抗體合格率達(dá)到70%判定為群體合格[15]。

2 結(jié)果

2.1 流行病學(xué)調(diào)查

對(duì)所采集樣本的種鴨場(chǎng)開展流行病學(xué)調(diào)查，飼養(yǎng)品種主要為花邊鴨及大麻鴨，雛鴨多引自四川、廣西等地。被調(diào)查種鴨場(chǎng)主要免疫鴨病毒性肝炎弱毒疫苗、重組禽流感滅活疫苗（H5+H7）、鴨坦布蘇病毒病滅活疫苗、鴨瘟活疫苗、禽霍亂-大腸桿菌二聯(lián)蜂膠滅活苗。場(chǎng)內(nèi)防疫設(shè)施設(shè)備較為落后，鴨場(chǎng)內(nèi)藥品保存及使用存在隱患。

2.2 不同場(chǎng)區(qū)鴨坦布蘇病毒病抗體水平調(diào)查

本次調(diào)查了江西地區(qū)11 個(gè)種鴨場(chǎng)，檢測(cè)樣品1 233 份。由表1 可知，調(diào)查的鴨場(chǎng)中鴨坦布蘇病毒病抗體水平普遍不高，總陽性率僅為61.1%，低于70%的國(guó)家合格率標(biāo)準(zhǔn)。只有E、H、I 3 個(gè)場(chǎng)的抗體陽性率超過70%，其中E 場(chǎng)最高，為80.4%；其次為I 場(chǎng)和H 場(chǎng)，合格率分別為73.4%和71.2%。其余場(chǎng)區(qū)均低于國(guó)家合格率標(biāo)準(zhǔn)。

表1 不同場(chǎng)區(qū)鴨坦布蘇病毒病抗體檢測(cè)結(jié)果Tab.1 The detection results of DTMUVD antibody in different fields

2.3 不同場(chǎng)區(qū)鴨瘟抗體水平調(diào)查

由表2 可知，本研究調(diào)查的11 個(gè)種鴨場(chǎng)的鴨瘟抗體水平總陽性率為80.5%，達(dá)到了國(guó)家的合格率標(biāo)準(zhǔn)。其中I 場(chǎng)最高，為90.8%。11 個(gè)場(chǎng)中9 個(gè)場(chǎng)鴨瘟抗體陽性率達(dá)到了國(guó)家合格率標(biāo)準(zhǔn)，場(chǎng)陽性率為81.8%，B場(chǎng)和F場(chǎng)僅為65.2%和63.6%，未達(dá)到國(guó)家合格率標(biāo)準(zhǔn)。

表2 不同場(chǎng)區(qū)鴨瘟抗體檢測(cè)結(jié)果Tab.2 The detection results of DP antibody in different fields

2.4 不同季度鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟抗體水平調(diào)查

不同季度規(guī)?；N鴨場(chǎng)鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟抗體陽性率結(jié)果（表3）顯示，4 個(gè)季度的鴨坦布蘇病毒病抗體水平全年均較低，只有第四季度（70.6%）超過70%的國(guó)家合格率標(biāo)準(zhǔn)，第一季度鴨坦布蘇病毒病抗體陽性率最低為54.0%。第二、三、四季度的鴨瘟抗體陽性率超過70%國(guó)家合格率標(biāo)準(zhǔn)，第四季度的鴨瘟抗體陽性率最高為89.3%；第一季度的鴨瘟抗體陽性率低于國(guó)家合格率標(biāo)準(zhǔn)。

表3 不同季度鴨坦布蘇病毒病與鴨瘟抗體檢測(cè)結(jié)果Tab.3 The detection results of DTMUVD、DP antibody in different quarters

3 結(jié)論與討論

本研究通過對(duì)江西省不同地區(qū)的11 個(gè)規(guī)模化種鴨場(chǎng)的1 233 份血清樣品進(jìn)行鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟抗體檢測(cè)，鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟抗體總陽性率分別為61.1%和80.5%。因?yàn)楸徽{(diào)查鴨場(chǎng)均免疫鴨坦布蘇病毒病疫苗和鴨瘟疫苗，使用鴨坦布蘇病毒和鴨瘟酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒能夠檢測(cè)鴨場(chǎng)的鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟抗體水平，從而評(píng)價(jià)其免疫水平狀態(tài)。

鴨坦布蘇病毒病是危害我國(guó)種蛋鴨養(yǎng)殖業(yè)的主要疫病之一，黃瑜等[19]對(duì)蛋鴨主要病毒性感染檢測(cè)與分析結(jié)果顯示江西未開產(chǎn)蛋鴨坦布蘇病毒感染陽性率51.1%，該病給江西省養(yǎng)鴨業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。張英[20-21]等在感染坦布蘇病毒種鴨的種蛋、鴨胚、雛鴨中檢測(cè)到坦布蘇病毒，證實(shí)鴨坦布蘇病毒可在種鴨中經(jīng)種蛋垂直傳播。鴨坦布蘇病毒既可以通過感染的母鴨發(fā)生垂直傳播，也可感染公鴨，導(dǎo)致公鴨睪丸出血、萎縮，精液質(zhì)量下降，通過感染坦布蘇病毒的公鴨發(fā)生垂直傳播[20,22]。本研究對(duì)江西不同地區(qū)的11個(gè)免疫種鴨場(chǎng)進(jìn)行鴨坦布蘇病毒病的血清抗體檢測(cè)結(jié)果顯示，鴨坦布蘇病毒病抗體陽性率較低；11個(gè)鴨場(chǎng)僅有3個(gè)場(chǎng)達(dá)到國(guó)家合格率標(biāo)準(zhǔn)，其中兩個(gè)達(dá)到合格率場(chǎng)的陽性率僅為71.2%和73.4%。鴨坦布蘇病毒病抗體水平的季度性調(diào)查結(jié)果顯示，4個(gè)季度的鴨坦布蘇病毒病抗體陽性率只有第四季度達(dá)到國(guó)家合格率標(biāo)準(zhǔn)，其他3個(gè)季度均低于70%。

鴨瘟自1957年在我國(guó)被發(fā)現(xiàn)以來已有60多年，盡管各地陸續(xù)出現(xiàn)報(bào)道，但各分離毒株的抗原性高度保守，疫苗的使用對(duì)該病的控制取得了顯著效果[18]。然而，近年來，臨床上病例報(bào)道日漸增多[12]，2019 年11月，江西免疫過鴨瘟疫苗的某大型種鴨場(chǎng)出現(xiàn)160日齡麻鴨疑似鴨瘟感染病例，每天死亡200多羽，病死率20%，損失慘重。研究還發(fā)現(xiàn)鴨瘟病毒感染鴨后，可侵害鴨的多種組織器官，為全身各組織感染和廣泛的組織嗜性創(chuàng)造條件[23]。鴨瘟的地方性流行已不容忽視，迫切需要對(duì)鴨瘟抗體定期監(jiān)測(cè)。本研究調(diào)查的11 個(gè)種鴨場(chǎng)的鴨瘟總陽性率為80.5%，場(chǎng)陽性率為81.8%；不同場(chǎng)區(qū)之間的陽性率差異較大。不同場(chǎng)區(qū)間的陽性率差異可能與飼養(yǎng)管理、疫苗使用、生物安全措施等多種因素有關(guān)。鴨瘟抗體水平的季度性調(diào)查結(jié)果顯示，鴨瘟抗體陽性率在第二、三、四季度達(dá)到國(guó)家合格率標(biāo)準(zhǔn)，第四季度鴨瘟抗體陽性率最高為89.3%；不同季度抗體合格率的差異結(jié)果表明氣候是影響種鴨疫苗免疫的重要因素之一，氣溫等環(huán)境因素造成應(yīng)激可能影響疫苗免疫效果。

江西部分地區(qū)種鴨坦布蘇病毒病及鴨瘟免疫狀況調(diào)查結(jié)果表明，種鴨疫苗防疫狀況不容樂觀。鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟等對(duì)種鴨場(chǎng)危害極大，一旦發(fā)病，會(huì)給養(yǎng)殖場(chǎng)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。種鴨場(chǎng)必須加強(qiáng)種鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟防疫，定期監(jiān)測(cè)疫苗免疫抗體水平，根據(jù)監(jiān)測(cè)情況和疫病流行情況制定科學(xué)的免疫程序，加強(qiáng)對(duì)防疫人員的專業(yè)培訓(xùn)，嚴(yán)格規(guī)范疫苗接種操作程序，確保免疫劑量和效果。