不同栽培輔料誘導(dǎo)對(duì)3個(gè)香菇菌株液體發(fā)酵產(chǎn)漆酶活力的影響

熊雪　李鵬　王瑩　向準(zhǔn)　和耀威　萬(wàn)誠(chéng)　王成考

摘要：以南方香菇產(chǎn)業(yè)主栽品種香菇808、慶科R20以及貴州省特有香菇馬桑香菇為研究對(duì)象，通過(guò)拮抗反應(yīng)、系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)及溫度試驗(yàn)，對(duì)香菇菌株進(jìn)行了區(qū)別性鑒定，并利用堿性木質(zhì)素（純品）及4種食用菌栽培中常用的栽培輔料為誘導(dǎo)物，研究3種不同香菇菌株液體發(fā)酵產(chǎn)漆酶活力連續(xù)12 d的變化規(guī)律。研究結(jié)果表明，馬桑香菇、香菇808、慶科R20雖均同為有機(jī)香菇的下屬分支，但菌株間是有區(qū)別的，馬桑香菇同香菇808和慶科R20間的親緣性也較遠(yuǎn)，且兩兩間均有拮抗反應(yīng)，3種菌株菌絲生長(zhǎng)對(duì)適宜溫度的選擇也有較小差異，存在一定種源差異。此外，香菇液體產(chǎn)漆酶活力受菌株遺傳差異和5種不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基的影響差異均為極顯著（P<0.001），但各處理漆酶整體變化規(guī)律均呈現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)。對(duì)香菇808產(chǎn)漆酶誘導(dǎo)力最強(qiáng)的是玉米芯，其次為麥麩，最高漆酶活力分別為464.06、205.44 U/L;對(duì)慶科R20產(chǎn)漆酶誘導(dǎo)力最強(qiáng)的是麥麩，其次為玉米芯，最高漆酶活力分別為265.07、237.15 U/L;對(duì)馬桑香菇產(chǎn)漆酶誘導(dǎo)力最強(qiáng)的是米糠，其次為麥麩，最高漆酶活力分別為178.34、161.83 U/L。從誘導(dǎo)漆酶活力強(qiáng)度出發(fā)，香菇808、慶科R20和馬桑香菇培養(yǎng)的最佳輔料分別為玉米芯、麥麩和米糠。

關(guān)鍵詞：栽培輔料;香菇;液體發(fā)酵;漆酶活力

中圖分類(lèi)號(hào)：S646.1+20.4 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2021）19-0172-08

木質(zhì)纖維素作為自然界中儲(chǔ)量巨大的潛在綠色資源，廣泛存在于各種農(nóng)林廢棄物中，在自然界中主要靠微生物進(jìn)行降解，主要包含纖維素、半纖維素、木質(zhì)素和少量果膠^[1]。其中木質(zhì)素是一種以1個(gè)或多個(gè)苯酚丙烷為單位組成的復(fù)雜聚合物，這類(lèi)物質(zhì)在自然界中主要被真菌代謝產(chǎn)生的胞外酶——多酚氧化酶降解^[2-3]。這類(lèi)酶主要包括漆酶（Laccase）、多酚氧化酶（Polyphenolase）、過(guò)氧化物酶（Peroxidase）3類(lèi)^[4]。其中，漆酶是分解木質(zhì)素最具代表性的酶類(lèi)^[5]，也是目前被廣大學(xué)者研究最多的酶類(lèi)。漆酶是一種含銅的多酚氧化酶，主要存在于植物和真菌中，其中植物漆酶主要參與形成木質(zhì)素，而真菌漆酶的作用則是降解木質(zhì)素^[6]。早在1988年，Bollag等就曾指出，漆酶分解木質(zhì)素的同時(shí)會(huì)產(chǎn)生一些有毒物質(zhì)，主要是酚類(lèi)或醌類(lèi)化合物，這些物質(zhì)可抑制雜菌的生長(zhǎng)，是很好的殺菌劑^[7]。嚴(yán)培蘭等在對(duì)黑木耳（Auricularia auricula）的研究中也指出，漆酶活性高的黑木耳菌株，栽培產(chǎn)量也較高，其抗霉能力也高^[8]。任鵬飛等提出，菌絲的生物降解能力會(huì)受酶活大小的影響，通常來(lái)說(shuō)產(chǎn)漆酶能力強(qiáng)的菌株其菌絲生長(zhǎng)速度較快^[9-10]。唐菊等研究表明，漆酶在食用菌生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中除了參與培養(yǎng)料中木質(zhì)素的降解，對(duì)原基分化、子實(shí)體的形態(tài)建成和發(fā)育還具有調(diào)控作用^[11]。眾多研究表明，漆酶在食用菌生產(chǎn)中是一種可以間接反映食用菌菌絲活力、產(chǎn)量和品質(zhì)，直接反映木質(zhì)素降減情況的酶類(lèi)。

食用菌產(chǎn)業(yè)的大力發(fā)展作為脫貧攻堅(jiān)勝利的助力之一，也繼續(xù)成為鄉(xiāng)村振興的重要抓手，其栽培規(guī)模廣、用料大，給生態(tài)環(huán)境帶來(lái)了一定壓力。近年來(lái)，在貴州食用菌的栽培規(guī)模不斷加大，品種主要是以香菇（Lentinula edodes）、木耳等木腐菌，在產(chǎn)量與產(chǎn)值喜人的同時(shí)不可避免地增大了木材用量的壓力，其菌棒主要原料為木屑，棉籽殼、玉米芯、麥麩、秸稈、米糠等農(nóng)林廢棄物是常見(jiàn)的栽培輔料。本試驗(yàn)以南方香菇產(chǎn)業(yè)主栽品種香菇808、慶科R20以及貴州省特有香菇馬桑香菇為研究對(duì)象，研究香菇菌株間的區(qū)別性差異，并利用堿性木質(zhì)素（純品）及棉籽殼、玉米芯、麥麩和米糠4種輔料為誘導(dǎo)物，探索3種香菇菌株在不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基中液體發(fā)酵產(chǎn)漆酶活力變化，旨在為貴州省本土香菇生產(chǎn)中輔料的添加提供一定科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1供試菌株

馬桑香菇、香菇808及慶科R20菌株由貴州省食用菌工程技術(shù)研究中心提供，保存于貴州省生物研究所。

1.2培養(yǎng)基

1.2.1PDA培養(yǎng)基馬鈴薯（去皮）200 g，葡萄糖20 g，瓊脂粉20 g，去離子水1 000 mL，pH值自然，121 ℃滅菌30 min。

1.2.2PDA綜合培養(yǎng)基馬鈴薯（去皮）200 g，葡萄糖20 g，磷酸二氫鉀3 g，硫酸鎂1.5 g，維生素B1 10 mg，瓊脂粉20 g，去離子水1 000 mL，pH值自然，121 ℃滅菌30 min。

1.2.3種子液培養(yǎng)基馬鈴薯（去皮）200 g，葡萄糖 20 g、酵母膏10 g，定容至1 L，121 ℃滅菌30 min。

1.2.4基礎(chǔ)培養(yǎng)基（basic medium，BM）葡萄糖10 g、蛋白胨2 g、七水硫酸鎂0.5 g、三水磷酸氫二鉀1 g、磷酸二氫鉀0.46 g，定容至1 L，121 ℃滅菌30 min。

1.2.5誘導(dǎo)培養(yǎng)基在“1.2.4”節(jié)中基礎(chǔ)培養(yǎng)基配方基礎(chǔ)上分別加入3 g孔徑粒度為20～60目的堿性木質(zhì)素（CK，BM+MZS）、棉籽殼（BM+MZK）、玉米芯（BM+YMX）、麥麩（BM+MF）、米糠（BM+MK），定容至1 L，121 ℃滅菌30 min。

1.3香菇菌株間的區(qū)別性鑒定

2021年3月，于貴州省生物研究所微生物實(shí)驗(yàn)室，將保存的馬桑香菇、香菇808、慶科R20分別接種于PDA綜合培養(yǎng)基平板上，25 ℃恒溫活化培養(yǎng)8 d。

1.3.1拮抗試驗(yàn)接種組合為2組。第1組：同種供檢菌種，于同一PDA平板上各接種1個(gè)接種塊;第2組：供檢菌株兩兩接種于同一PDA平板上。25 ℃ 相峙培養(yǎng)。

1.3.2建立香菇系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)采用購(gòu)買(mǎi)的生工生物工程（上海）股份有限公司Ezup柱式真菌基因組DNA抽提試劑盒提取分離純化3種香菇菌株基因組DNA，提取之后的DNA選用真菌通用引物（ITS1：TCCGTAGGTGAACCTGCGG;ITS4：TCCTCCGCTTATTGATATGC）進(jìn)行PCR擴(kuò)增。采用25 μL的PCR反應(yīng)體系：Template（基因組20～50 ng/μL） 0.5 μL;10×Buffer（和Mg2+）;dNTP（各2.5 mmol/L）1 μL;Taq 0.2 μL;前向引物（10 μmol/L）0.5 μL;后向引物（10 μmol/L）0.5 μL;加雙蒸水至25 μL。反應(yīng)程序?yàn)?4 ℃預(yù)變性4 min;94 ℃變性45個(gè)循環(huán)，55 ℃退火45個(gè)循環(huán)，72 ℃延伸1 min，30個(gè)循環(huán);72 ℃延伸8 min，4 ℃終止反應(yīng)保存。擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物經(jīng)1.0%瓊脂糖電泳檢測(cè)擴(kuò)增結(jié)果后，送生工生物工程（上海）股份有限公司測(cè)序，測(cè)序后登錄GenBank對(duì)比，通過(guò)BLAST對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行比對(duì)分析，下載最相近菌株的ITS rDNA序列，并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。

1.3.3不同溫度生長(zhǎng)速度測(cè)定取3種香菇備用活化平板，使用打孔器打取直徑5 mm接種物，接種于PDA平板上，分別置于10、15、20、25、30 ℃下培養(yǎng)，觀察菌絲生長(zhǎng)情況。菌絲生長(zhǎng)速度測(cè)定采用“十”字交叉法，從菌絲萌發(fā)開(kāi)始，每2 h測(cè)量1次，同時(shí)記錄菌絲萌發(fā)時(shí)間，菌絲日均生長(zhǎng)速度以吃料后菌落平均每日直徑增長(zhǎng)量統(tǒng)計(jì)。菌絲鋪滿平板時(shí)，觀察記錄菌落的菌絲形態(tài)、色澤、菌落形狀、菌絲長(zhǎng)勢(shì)和邊緣特征等，用“+”“-”表示菌絲的長(zhǎng)勢(shì)，“+”越多表示菌絲生長(zhǎng)得越好、越健壯、均勻，“-”表示菌絲不生長(zhǎng)。

1.4漆酶活力測(cè)定

1.4.1發(fā)酵培養(yǎng)使用打孔器打取直徑5 mm接種物，每100 mL完全培養(yǎng)基中無(wú)菌條件下放入5個(gè)接種物，25 ℃、150 r/min 搖床避光培養(yǎng)。8 d后取勻漿機(jī)將三角瓶?jī)?nèi)的菌絲球攪拌30 s使其成均質(zhì)體。分別向100 mL含不同基質(zhì)培養(yǎng)料的誘導(dǎo)培養(yǎng)基（BM+MZS、BM+MZK、BM+YMX、BM+MF、BM+MK）中加入3 mL攪拌均勻的香菇均質(zhì)體，于25 ℃、150 r/min搖床避光培養(yǎng)，每個(gè)處理4個(gè)重復(fù)。

1.4.2漆酶活力的測(cè)定參照韓美玲等的研究^[12]測(cè)定漆酶活力。從培養(yǎng)后2 d開(kāi)始測(cè)定其漆酶活力，連續(xù)測(cè)至培養(yǎng)12 d。

1.5數(shù)據(jù)處理

利用EXCLE進(jìn)行圖表整理，SPSS Statistic 18.0對(duì)菌絲日均生長(zhǎng)速度、漆酶活力數(shù)據(jù)分別進(jìn)行顯著性分析和雙因素方差檢驗(yàn)（two‐way ANOVA）。

2結(jié)果與分析

2.1香菇菌株間的區(qū)別性鑒定

2.1.1拮抗試驗(yàn) 從圖1可以看出，馬桑香菇、香菇808、慶科R20菌株自身均無(wú)拮抗反應(yīng)，但馬桑香菇同香菇808之間有輕微的隆起，慶科R20之間有明顯的拮抗帶，而香菇808同慶科R20間也有明顯的拮抗帶。綜上說(shuō)明，3種香菇菌株彼此間皆有拮抗反應(yīng)，說(shuō)明3種香菇菌株種源存在一定差異性。

2.1.2建立香菇系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)3種香菇菌株的DNA提取結(jié)果見(jiàn)圖2，香菇菌株DNA條帶清晰，DNA的濃度、純度以及產(chǎn)率均比較高，可用于PCR擴(kuò)增。

經(jīng)PCR擴(kuò)增和序列測(cè)定，結(jié)果顯示3種香菇菌株rDNA ITS區(qū)段長(zhǎng)度在700～800 bp之間，且所得序列經(jīng)Blast搜索，擊中結(jié)果均為L(zhǎng)entinula edodes，下載其相近序列15條，并結(jié)合香菇屬其他種rDNA序列：Lentinula aciculospora、Lentinula boryana、Lentinula lateritia、Lentinula madagasiksrensis、Lentinula novaezelandiae 、Lentinula raphanica、Lentinula reticeps（每種隨機(jī)挑選3條），共同構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)（圖3）。系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)表明，同3種供試菌株rDNA序列親緣性較高的香菇屬種有Lentanus edodes、Lentinula lateritia、Lentinula novaezelandiae，且3種菌株集中于Lentanus edodes同一分支上，菌株間慶科R20和香菇808分支較近，相似系數(shù)較高，親緣性較近，同馬桑香菇的分支較遠(yuǎn)，相似系數(shù)低，親緣性較遠(yuǎn)。說(shuō)明3種香菇菌株雖同為香菇屬下有機(jī)香菇，但仍存在一定差異。

2.1.3不同溫度條件對(duì)3種香菇生長(zhǎng)的影響從表1可以看出，在所選供試溫度條件下，馬桑香菇菌落為絨毛狀白色圓形菌落，日均生長(zhǎng)速度隨溫度的升高呈現(xiàn)先增后降的趨勢(shì)，并于溫度25 ℃條件下達(dá)

到峰值0.89 cm/d，且顯著高于其他溫度處理（P<0.05），其次依次為20 ℃（0.49 cm/d）、30 ℃（0.40 cm/d），且在20～30 ℃，菌絲長(zhǎng)勢(shì)最佳，其次為15 ℃。說(shuō)明馬桑香菇菌絲生長(zhǎng)適宜溫度范圍為15～30 ℃，最佳生長(zhǎng)溫度為25 ℃。

在供試溫度范圍內(nèi)，香菇808菌絲呈絨毛狀白色圓形菌落，其日均生長(zhǎng)速度隨溫度升高先增加后減少，并于25 ℃達(dá)到最大值0.85 cm/d。日均生長(zhǎng)速度整體呈現(xiàn)出25 ℃>20 ℃（0.44 cm/d）>30 ℃（0.31 cm/d）>15 ℃（0.28 cm/d）的趨勢(shì)，且在25、30 ℃條件下菌絲長(zhǎng)勢(shì)最佳。說(shuō)明香菇808菌絲的適宜生長(zhǎng)溫度為20～30 ℃，最佳溫度為25 ℃。

慶科R20在所設(shè)溫度范圍內(nèi)，日均生長(zhǎng)速度也隨溫度升高先增加后減少，峰值出現(xiàn)在25 ℃條件下，達(dá)0.89 cm/d，且長(zhǎng)勢(shì)最佳。日均生長(zhǎng)速度其次依次為20 ℃（0.50 cm/d）、15 ℃（0.29 cm/d），長(zhǎng)勢(shì)也僅次于25 ℃。說(shuō)明慶科R20的適宜生長(zhǎng)溫度范圍為15～25 ℃，最佳溫度為25 ℃。

綜上可知，3種香菇菌株在所設(shè)溫度范圍下菌落形態(tài)受溫度影響較小，菌絲生長(zhǎng)隨溫度變化趨勢(shì)大致相同，且菌絲生長(zhǎng)速度在高溫和低溫下受脅迫明顯，最適溫度均為25 ℃，但3種菌株對(duì)中高溫和中低溫有不同的傾向性選擇。

2.2不同菌株對(duì)漆酶活力的影響

雙因素方差檢驗(yàn)結(jié)果顯示，香菇不同菌株在不同培養(yǎng)基中的產(chǎn)漆酶能力各不相同，且在整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程中，除培養(yǎng)3 d外，菌株和培養(yǎng)基交互影響為顯著（P<0.01）外，香菇液體產(chǎn)漆酶活力受菌株遺傳差異和5種不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基的影響均為極顯著（P<0.001）。

從表2、圖4可知，連續(xù)12 d測(cè)試中，同一誘導(dǎo)培養(yǎng)基上3種香菇菌株液體產(chǎn)漆酶活力差距明顯，且菌株對(duì)漆酶活力皆具有極顯著的影響（P<0001）。

整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程中，在僅含堿性木質(zhì)素的誘導(dǎo)培養(yǎng)基（BM+MZS）中馬桑香菇菌株較其他2種菌株表現(xiàn)出更高的漆酶活力，且最大漆酶活力為 62.77 U/L 出現(xiàn)在培養(yǎng)9 d，香菇808最大漆酶活力為44.86 U/L出現(xiàn)在培養(yǎng)8 d，慶科R20在培養(yǎng)6 d方檢測(cè)出較弱的漆酶活性，在培養(yǎng)11 d后漆酶活力較大，達(dá)30.97 U/L。在含棉籽殼（BM+MZK）、玉米芯（BM+YMX）的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，菌株香菇808分泌漆酶的能力明顯高于其他菌株，最大漆酶活力均出現(xiàn)在培養(yǎng)9 d，分別為129.85、464.06 U/L;菌株馬桑香菇和慶科R20最大漆酶活力值均在培養(yǎng)11 d，且馬桑香菇分泌漆酶的能力最低，在BM+MZK培養(yǎng)基中僅為23.82 U/L，在BM+YMX培養(yǎng)基中為11781 U/L。在含麥麩的誘導(dǎo)培養(yǎng)基（BM+MF）中，菌株慶科R20具有較高的分泌漆酶的能力，并在培養(yǎng)10 d后達(dá)到最高，為265.07 U/L;菌株馬桑香菇漆酶活力在培養(yǎng)8 d最先達(dá)到頂峰，但值較低，為161.83 U/L，且在達(dá)到極值后迅速下降;菌株香菇808在培養(yǎng)9 d出現(xiàn)極值，達(dá)205.44 U/L。在含米糠的誘導(dǎo)培養(yǎng)基（BM+MK）中，慶科R20的產(chǎn)漆酶能力最低，且培養(yǎng)前期較不穩(wěn)定，在培養(yǎng)11 d出現(xiàn)極值，為45.07 U/L;而香菇808在培養(yǎng)培養(yǎng) 6 d 后漆酶活力急速上升，在培養(yǎng)8 d達(dá)到峰值為12464 U/L后緩慢下降;馬桑香菇在培養(yǎng)到7 d后漆酶活力上升較快，并在培養(yǎng)11 d出現(xiàn)峰值為17834 U/L，隨后快速降低。

綜上所述，在培養(yǎng)初期所有處理下，3種香菇菌株產(chǎn)漆酶活力均較低，在培養(yǎng)中后期漆酶活力

較為旺盛，峰值也主要集中在培養(yǎng)8～11 d內(nèi)。故以培養(yǎng)期所有處理漆酶活力均較為旺盛的培養(yǎng)9 d數(shù)據(jù)為依據(jù)可知，在含堿性木質(zhì)素（BM+MZS）、米糠（BM+MK）的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，馬桑香菇產(chǎn)漆酶活力高于其他菌株，分別為62.77、178.34 U/L;在含棉籽殼（BM+MZK）、玉米芯（BM+YMX）的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，香菇808產(chǎn)漆酶活力高于其他菌株，分別為129.85、464.06 U/L;而在含麥麩（BM+MF）的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，慶科R20分泌漆酶的能力最強(qiáng)，達(dá) 205.44 U/L。

2.3不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基對(duì)漆酶活力的影響

由表2、圖5可知，連續(xù)12 d測(cè)試中，3種香菇菌株液體產(chǎn)漆酶活力在不同培養(yǎng)基上均有不同表現(xiàn)，且5種誘導(dǎo)培養(yǎng)基對(duì)漆酶活力均具有極顯著的影響（P<0.001）。

菌株馬桑香菇、香菇808和慶科R20在5種不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基發(fā)酵產(chǎn)漆酶活力均隨培養(yǎng)時(shí)間呈現(xiàn)先增后降的趨勢(shì)，達(dá)到峰值的時(shí)間有所差異，但主要集中在培養(yǎng)8～11 d。馬桑香菇在5種不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基上連續(xù)培養(yǎng)9 d時(shí)，在含米糠的誘導(dǎo)培養(yǎng)基（BM+MK）中分泌漆酶的能力最強(qiáng)，漆酶活力達(dá)137.76 U/L;其次為BM+MF培養(yǎng)基和BM+YMX培養(yǎng)基，分別達(dá)到88.67、63.13 U/L;而在含棉籽殼的誘導(dǎo)培養(yǎng)基（BM+MZK）中酶活僅為 19.27 U/L。香菇808在連續(xù)培養(yǎng)9 d時(shí)，在含玉米芯的誘導(dǎo)培養(yǎng)基（BM+YMX）上分泌漆酶的能力明顯強(qiáng)于其他培養(yǎng)基，且出現(xiàn)峰值，酶活達(dá)464.06 U/L，同時(shí)在該天出現(xiàn)酶活峰值的還有BM+MZK、BM+MF培養(yǎng)基，酶活分別為129.85、209.44 U/L;而在僅含堿性木質(zhì)素的培養(yǎng)基（BM+MZS）中，香菇808產(chǎn)漆酶的能力最低，僅為28.16 U/L，且該種培養(yǎng)基下，整個(gè)培養(yǎng)期日平均酶活力最高不超過(guò)34.86 U/L。因此，玉米芯對(duì)香菇808分泌漆酶的誘導(dǎo)能力明顯強(qiáng)于麥麩、米糠、棉籽殼和堿性木質(zhì)素。而對(duì)于慶科R20在培養(yǎng)初期（培養(yǎng)2 d），含麥麩的誘導(dǎo)培養(yǎng)基（BM+MF）中檢測(cè)到的漆酶活力最強(qiáng)，達(dá) 5.58 U/L;含棉籽殼的誘導(dǎo)培養(yǎng)基（BM+MZK）在培養(yǎng)3 d才檢測(cè)到微弱的漆酶活力，僅為0.51 U/L;酶活力最弱的是僅含堿性木質(zhì)素的誘導(dǎo)培養(yǎng)基（BM+MZS），一直到培養(yǎng)6 d方才檢測(cè)出較低的漆酶活力，僅為1.56 U/L;而在培養(yǎng)9 d時(shí)，BM+MF誘導(dǎo)培養(yǎng)基依舊保持最高的漆酶活力，達(dá)246.88 U/L，其次為BM+YMX誘導(dǎo)培養(yǎng)基，5種不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基的漆酶活力趨勢(shì)大致表現(xiàn)為BM+MF>BM+YMX>BM+MZK>BM+MK>BM+MZS;因此，慶科R20在含麥麩的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中分泌漆酶的能力是最強(qiáng)的。

3討論與結(jié)論

漆酶作為主要的木質(zhì)素降解酶，參與香菇生長(zhǎng)發(fā)育的每一個(gè)階段^[13-14]。本試驗(yàn)以南方香菇產(chǎn)業(yè)主栽品種香菇808、慶科R20以及貴州省特有香菇馬桑香菇為研究對(duì)象，研究香菇菌株間的區(qū)別性差異，并利用堿性木質(zhì)素（純品）及4種食用菌栽培中常用的基質(zhì)培養(yǎng)料為誘導(dǎo)物，研究3種不同香菇菌株液體發(fā)酵產(chǎn)漆酶活力。研究結(jié)果表明，馬桑香菇、香菇808和慶科R20雖均同為有機(jī)香菇的下屬分支，但菌株間是有區(qū)別的，馬桑香菇同香菇808和慶科R20間的親緣性也較遠(yuǎn)，且兩兩間均有拮抗反應(yīng)，3種菌株菌絲生長(zhǎng)對(duì)適宜溫度的選擇也有較小差異，是存在一定種源差異的。此外，香菇液體產(chǎn)漆酶活力受菌株遺傳差異和5種不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基的影響均為極顯著（P<0.001），但各處理漆酶整體變化規(guī)律均呈現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)。說(shuō)明菌株和培養(yǎng)基的差異僅對(duì)漆酶活性大小有影響，但不影響漆酶的變化規(guī)律。本結(jié)果同Mata 等對(duì)香菇的研究結(jié)果^[15]相似，且在韓美玲等對(duì)糙皮側(cè)耳的研究中也有類(lèi)似趨勢(shì)存在^[12，16]。此外，本試驗(yàn)培養(yǎng)前期，3種香菇菌株不同處理下產(chǎn)漆酶活力均較低，慶科R20菌株部分處理下甚至無(wú)法檢測(cè)出漆酶活力，而在培養(yǎng)中后期漆酶活力較為旺盛，峰值也主要集中在培養(yǎng) 8～11 d內(nèi)，表明香菇對(duì)木質(zhì)素降解吸收時(shí)間普遍較晚。張權(quán)等研究發(fā)現(xiàn)，香菇生長(zhǎng)過(guò)程中對(duì)營(yíng)養(yǎng)的利用存在一定的先后順序，在香菇液體發(fā)酵培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)淀粉優(yōu)于纖維素和木質(zhì)素被利用^{[13，17]}。楊舒貽等指出，香菇808液體培養(yǎng)中碳源淀粉較木質(zhì)素更早被降解利用，且淀粉酶的最高活性出現(xiàn)在培養(yǎng)4 d，漆酶活力出現(xiàn)在培養(yǎng)13 d^[18]。本研究漆酶活力變化規(guī)律與之吻合。

此外，5種誘導(dǎo)物中，除堿性木質(zhì)素（純品）外，其他4種較為復(fù)雜的木質(zhì)纖維素基質(zhì)均為常見(jiàn)食用菌栽培輔料，也是農(nóng)林生產(chǎn)中常見(jiàn)的二次資源。在眾多研究中，麥麩一致被認(rèn)為是有利于漆酶分泌的基質(zhì)^[19-21]。本研究同樣發(fā)現(xiàn)基質(zhì)麥麩對(duì)香菇表現(xiàn)出較強(qiáng)的產(chǎn)漆酶誘導(dǎo)力，它能促使馬桑香菇、慶科R20產(chǎn)酶時(shí)間提前，酶活峰值分別于8 d（馬桑香菇，161.83 U/L）、10 d（慶科R20，265.07 U/L）出現(xiàn)。并且在麥麩誘導(dǎo)下慶科R20產(chǎn)酶能力最高，其次為基質(zhì)玉米芯，麥麩誘導(dǎo)馬桑香菇和香菇808的產(chǎn)酶能力分別僅次于米糠和玉米芯，表明輔料麥麩對(duì)慶科R20、馬桑香菇和香菇808均有較強(qiáng)的漆酶誘導(dǎo)力。此外，玉米芯也表現(xiàn)出較高的產(chǎn)漆酶誘導(dǎo)力，香菇808在含玉米芯的誘導(dǎo)培養(yǎng)基下產(chǎn)漆酶能力最強(qiáng)，最高能達(dá)到464.06 U/L;玉米芯誘導(dǎo)慶科R20產(chǎn)漆酶的能力僅次于麥麩，最高達(dá)237.15 U/L;玉米芯對(duì)馬桑香菇產(chǎn)漆酶的誘導(dǎo)能力相對(duì)米糠和麥麩較低，最高時(shí)能達(dá)117.81U/L。表明麥麩和玉米芯對(duì)香菇808和慶科R20均具有較強(qiáng)的產(chǎn)漆酶誘導(dǎo)力;而馬桑香菇產(chǎn)漆酶活力受米糠和麥麩影響更大。這樣的選擇性差異可能是由于3種菌株遺傳差異以及胞外蛋白質(zhì)含量變化造成的。通過(guò)漆酶活性的對(duì)比研究，可初步得出香菇808、慶科R20和馬桑香菇最佳輔料分別為玉米芯、麥麩和米糠，且3種菌株共同的最佳輔料為麥麩。馬桑香菇在實(shí)現(xiàn)生產(chǎn)以來(lái)，菌棒配方均有別于香菇808和慶科R20，但生產(chǎn)中利用含米糠、麥麩和玉米芯的香菇栽培種配方生產(chǎn)馬桑香菇在理論上是可行的，但更為具體的反應(yīng)機(jī)制和降解過(guò)程還需結(jié)合其他幾種胞外酶進(jìn)行綜合分析，而且能否保證馬桑香菇的口感和豐富營(yíng)養(yǎng)成分還需進(jìn)一步研究。

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基金項(xiàng)目：貴州科學(xué)院青年基金（編號(hào)：黔科院J字[2021]18號(hào)）;貴州省科技計(jì)劃（編號(hào)：黔科合重大專(zhuān)項(xiàng)字[2019]3004-4號(hào)、黔科合支撐[2019]2451-8-11號(hào)、黔科合重大專(zhuān)項(xiàng)字ZWCQ[2019]號(hào)3013-3、黔科合支撐[2019]2332號(hào)、黔科合支撐[2021]一般196）;貴州省食用菌產(chǎn)業(yè)體系項(xiàng)目野生菌保護(hù)撫育與馴化功能實(shí)驗(yàn)室建設(shè)專(zhuān)項(xiàng)。

作者簡(jiǎn)介：熊雪（1992—），女，貴州貴陽(yáng)人，碩士，研究實(shí)習(xí)員，主要從事菌物生態(tài)及食用菌栽培相關(guān)研究。E-mail：604051569@qq.com。

通信作者：向準(zhǔn)，碩士，副研究員，主要從事食用菌品種選育與栽培研究。E-mail：Xiangzhun@163.com。