豬圓環(huán)病毒3型感染情況的初步調(diào)查

肖 興 ，蔣小玲 ，芮 雪 ，賀曉霜 ，段燕方 ，周雙海 ＊

（1.衡陽市畜牧水產(chǎn)事務(wù)中心，湖南 衡陽 421001；2.北京農(nóng)學(xué)院動物科技學(xué)院，北京 102206）

豬圓環(huán)病毒（porcine circovirus，PCV）是目前已知的最小的動物病毒，其屬于DNA病毒。在20世紀(jì)，豬圓環(huán)病毒1型（PCV1）和豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）相繼被發(fā)現(xiàn)，其中前者對豬沒有致病性，后者則能引起包括母豬繁殖障礙在內(nèi)的多種疾病，并被認(rèn)為和豬皮炎與腎病綜合征（porcine dermatitis and nephropathy syndrome，PDNS）有關(guān)，給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了較大經(jīng)濟(jì)損失[1]。2016年，一篇文獻(xiàn)報道在PDNS病豬與流產(chǎn)母豬體內(nèi)檢出一種新型豬圓環(huán)病毒，并被命名為PCV3[2]；同年，另一篇文獻(xiàn)報道在心肌炎與多系統(tǒng)炎癥病豬體內(nèi)也檢出大量的PCV3[3]；最近，一篇文獻(xiàn)報道用PCV3單獨感染試驗成功復(fù)制出PDNS病例[4]。這些資料表明PCV3也對豬具有致病性。一些文獻(xiàn)報道，PCV3已在中國一些豬場存在[5-6]。PCV3作為正在傳播的一種新的豬病病原，了解當(dāng)前其流行情況是有必要的。

1 材料與方法

1.1 臨床血清樣品

湖南地區(qū)160頭斷奶仔豬和京津冀地區(qū)363頭斷奶仔豬的血清都采集于2020年。

1.2 主要實驗材料

病毒DNA提取試劑盒和PCR試劑Taq Master Mix都是湖南艾科瑞生物工程有限公司產(chǎn)品；檢測PCV3核酸的上游引物P1（序列為5-TGCCAGGGCTTGT TATTCTGA-3）和下游引物P2（序列為5-GGACACT CGTAGCAC CACAAAA-3）[6]由生工生物工程（上海）有限公司合成。

1.3 實驗方法

按照試劑盒說明書提取血清中的病毒DNA，用常規(guī)PCR方法檢 測PCV3核 酸。PCR體 系 為：10 μL Taq Master Mix、5 μL病毒DNA、10 pmol上 游 引 物P1、10 pmol下游引物P2，體系總體積為20 μL。PCR程序為：95 ℃ 5 min；95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，循環(huán)40次；72 ℃ 10 min。取10 μL PCR產(chǎn)物在1.8%瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳30 min后，在凝膠成像儀上觀察是否有381 bp大小的特異性目的條帶。

1.4 統(tǒng)計分析

用卡方檢驗對不同豬場的個體陽性率數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

對國內(nèi)部分地區(qū)16個豬場的523頭斷奶仔豬的病毒核酸檢測結(jié)果（表1）顯示，豬場陽性率為68.75%，總的個體陽性率為31.74%，不同豬場的個體陽性率介于0%~80.00%之間，整體存在極顯著（χ2=147.4，P<0.01）差異。

表1 病毒核酸檢測的整體結(jié)果

鑒于所有檢測豬場的個體陽性率的整體存在極顯著差異，于是進(jìn)行再分割分析。結(jié)果（表2）顯示，可以按照個體陽性率的高低分割成4個組，即個體陽性率為0%的組（占31.25%）、個體陽性率大于0%但不大于20%的組（占18.75%）、個體陽性率大于20%但不大于70%的 組（占31.25%）、個 體 陽性率大于70%的組（占18.75%），這4個組之間差異達(dá)到極顯著（χ2=145.9，P<0.01）水平。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，有半數(shù)豬場的個體陽性率超過20%，其中超過70%的占18.75%（3/16）；低于20%的也占半數(shù)，其中個體陽性率為0%的占31.25%（5/16）。

表2 病毒核酸檢測的分組結(jié)果

3 討論

目前，PCR方法是檢測PCV3感染的最常用方法。對采集于湖南省和京津冀地區(qū)共16個豬場的523頭斷奶仔豬血清的PCR檢測結(jié)果顯示，豬場陽性率為68.75%，超過三分之二，說明多數(shù)檢測豬場存在PCV3感染；總的個體陽性率為31.74%，接近三分之一，說明有不少檢測個體感染了PCV3；同時，不同豬場之間的個體陽性率的差異非常顯著，有的高達(dá)80%，有的低到為0。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，PCV3感染率超過20%以上的豬場達(dá)到50%，超過70%的豬場接近20%，而低于20%的豬場也達(dá)到50%，還有超過30%的豬場為0%。張帆帆等[7]對2016-2017年江西省256份樣品進(jìn)行PCR檢測后發(fā)現(xiàn)PCV3感染率為1.17%，季程遠(yuǎn)等[8]對2017年廣西地區(qū)63份豬淋巴結(jié)樣品進(jìn)行PCR檢測后發(fā)現(xiàn)PCV3感染率為19.0%，溫海京等[9]對2018—2019年京津冀地區(qū)120份仔豬樣品進(jìn)行PCR檢測后發(fā)現(xiàn)PCV3感染率為40.8%，這些文獻(xiàn)報道了近年來我國一些地區(qū)的PCV3感染率，不同地區(qū)表現(xiàn)為高低不一。本次對2020年湖南省和京津冀地區(qū)的初步調(diào)查也顯示出類似的結(jié)果，并且進(jìn)一步分析了不同豬場的感染率數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)PCV3感染率在接近20%的豬場高達(dá)70%以上、在大約半數(shù)的豬場低于20%、在超過30%的豬場仍然為0%。由于PCV3被認(rèn)為與母豬繁殖障礙、PDNS和心肌炎等疾病有關(guān)[2-3]，并且已有試驗證實PCV3感染能夠引起PDNS[4]，充分表明PCV3對豬具有明顯致病性。因此，存在母豬繁殖障礙和PDNS等疾病的豬場，有必要關(guān)注和防范臨床上的PCV3感染。