□ 阮 麗 曾慶肖 張 文 西南科技大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院

維生素C是水溶性維生素的一種，也是具有不飽和結(jié)構(gòu)的己糖酸內(nèi)酯。作為一種較強(qiáng)的抗氧化劑及自由基清除劑，它主要具有預(yù)防衰老、增強(qiáng)機(jī)體的免疫和抗應(yīng)激能力，以及調(diào)節(jié)機(jī)體代謝反應(yīng)的功能[1]。維生素C在新鮮的水果、蔬菜中含量都較豐富，但人體不能合成及貯存維生素C[2]，必須從食物或藥品中獲得以維持機(jī)體的正常生理代謝過(guò)程。維生素C含量的測(cè)定對(duì)于飲食、保健、醫(yī)療等各個(gè)領(lǐng)域均有著非常重要的意義。目前，常采用的檢測(cè)方法有以下幾種。

1 滴定法

1.1 2,6-二氯靛酚滴定法

2,6-二氯靛酚也可稱作二氯酚靛酚，堿性條件下或其氧化態(tài)表現(xiàn)為深藍(lán)或藍(lán)色，反之則呈粉紅或紅色。2,6-二氯靛酚的標(biāo)準(zhǔn)溶液是一種堿性藍(lán)色染料，用于滴定含還原型維生素C的酸性樣液，維生素C發(fā)生氧化反應(yīng)轉(zhuǎn)變成脫氫抗壞血酸，2,6-二氯靛酚染料則發(fā)生還原反應(yīng)呈現(xiàn)無(wú)色。滴定終點(diǎn)處稍過(guò)量的染料使酸性樣液呈現(xiàn)微紅色。根據(jù)染料的消耗體積計(jì)算樣品中維生素C的含量。此方法檢測(cè)維生素C含量雖方便快捷，可以一次測(cè)定大量樣品，但只能測(cè)定還原型抗壞血酸，且易受其他還原性物質(zhì)和有色物質(zhì)[3]的干擾。

1.2 直接碘量法

直接碘量法或碘滴定法，常被應(yīng)用于維生素C的檢測(cè)中，其檢測(cè)原理基于碘單質(zhì)對(duì)維生素C的氧化能力。以淀粉作為指示終點(diǎn)的指示劑，用碘標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)含維生素C的樣液進(jìn)行滴定，待氧化還原反應(yīng)完成時(shí)，多余的碘單質(zhì)與指示劑將反應(yīng)生成藍(lán)色的絡(luò)合物，指示滴定終點(diǎn)。由滴定過(guò)程中滴定液的消耗體積換算數(shù)量關(guān)系得到樣品中維生素C的含量。直接碘量法測(cè)量成本較低、變色敏銳、結(jié)果可靠，但碘溶液本身的腐蝕性和不穩(wěn)定性導(dǎo)致其標(biāo)準(zhǔn)溶液配制和標(biāo)定過(guò)程煩瑣，耗時(shí)較長(zhǎng)[4]。

2 熒光法

熒光法或熒光分析法，以活性炭作為氧化劑，與樣品中沒(méi)有熒光的維生素C起氧化還原作用，生成脫氫抗壞血酸，脫氫抗壞血酸再與熒光底物鄰苯二胺反應(yīng)生成熒光物質(zhì)，其熒光強(qiáng)度與維生素C的濃度在某種條件下表現(xiàn)出正相關(guān)。在檢測(cè)試樣中的維生素C含量時(shí)，由于硼酸與脫氫抗壞血酸形成的絡(luò)合物不與鄰苯二胺發(fā)生反應(yīng)，空白試驗(yàn)組可加入硼酸作脫氫抗壞血酸的掩蔽劑，以此檢測(cè)試樣中各種雜質(zhì)的總熒光值，排除其光譜干擾[6]。熒光法測(cè)定維生素C的靈敏度高、線性關(guān)系好，可實(shí)現(xiàn)對(duì)維生素C和脫氫抗壞血酸的定量分析，但鄰苯二胺本身具有一定的光譜干擾性，且活性炭可吸附維生素C[5]。

3 紫外-可見分光光度法

紫外-可見分光光度法，利用紫外可見分光光度計(jì)檢測(cè)維生素C，即在紫外光區(qū)200～400 nm范圍內(nèi)，酸性條件下維生素C在紫外光譜 245 nm[6]左右有最大吸收峰，通過(guò)建立維生素C含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)樣品中所含維生素C進(jìn)行定量測(cè)定。該方法的操作簡(jiǎn)單快速、檢測(cè)限低，不必再進(jìn)行基準(zhǔn)試劑的標(biāo)定，且試劑易得，適用于維生素C的快速檢測(cè)[7]，但維生素C易受溫度、光照等的影響，儀器價(jià)格也較昂貴。

4 高效液相色譜法

高效液相色譜法是國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中食品中抗壞血酸含量的檢測(cè)方法之一，它以磷酸二氫鉀、十六烷基三甲基溴化銨、磷酸、甲醇的混合試劑為流動(dòng)相，用偏磷酸溶液溶解樣品中的維生素C，再經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的超聲提取、反向色譜柱分離后用液相色譜儀于 245 nm波長(zhǎng)處測(cè)定。檢測(cè)并排除樣品中脫氫抗壞血酸的含量，需先使用L-半胱氨酸溶液還原脫氫抗壞血酸，再利用紫外檢測(cè)器于相同波長(zhǎng)處測(cè)定其含量，或減去已測(cè)得的維生素C含量。使用HPLC檢測(cè)食品中維生素C含量，具有分離效率高、檢測(cè)靈敏、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于食品、藥品中維生素C含量的檢測(cè)研究，但HPLC檢測(cè)成本高、耗時(shí)長(zhǎng)[8]，且偏磷酸帶有劇毒。

5 鉬藍(lán)比色法

鉬藍(lán)比色法常被應(yīng)用于水果、蔬菜中還原型維生素C含量的測(cè)定[9]，其檢測(cè)原理基于分光比色法，利用鉬酸銨與偏磷酸-醋酸反應(yīng)生成磷鉬酸銨，磷鉬酸銨與還原型維生素C發(fā)生氧化還原作用，生成一種藍(lán)色的鉬藍(lán)化合物，通過(guò)分光光度計(jì)檢測(cè)試樣中還原型維生素C的含量[10]。鉬藍(lán)比色法操作相對(duì)簡(jiǎn)單、反應(yīng)迅速、準(zhǔn)確度較高，不易受樣液提取液顏色和其他還原性物質(zhì)的影響[11]，但在檢測(cè)應(yīng)用中，此方法的最大吸收波長(zhǎng)各有不同，應(yīng)根據(jù)具體試驗(yàn)條件做進(jìn)一步優(yōu)化。

6 其他檢測(cè)方法

此外，國(guó)內(nèi)外對(duì)于維生素C檢測(cè)還有許多常見或新型的檢測(cè)方法。例如，伏安法[12]可快速測(cè)定果汁中維生素C的含量。李詠梅等[13]利用2,4-二硝基苯肼比色法對(duì)熟制前后蔬菜的維生素C含量進(jìn)行測(cè)定，驗(yàn)證了該方法的可行性。在新型的檢測(cè)方法中，張巧云等[14]通過(guò)酸腐蝕制備納米多孔金，并用納米多孔金修飾玻碳電極成功構(gòu)建納米多孔金電化學(xué)傳感器，實(shí)現(xiàn)對(duì)飲料中維生素C含量的快速檢測(cè)。

7 結(jié)語(yǔ)

因維生素C是人體重要的必需營(yíng)養(yǎng)素之一，其含量檢測(cè)在食品、藥品等領(lǐng)域都具有重要意義，特別是在各種水果、蔬菜以及藥品的檢測(cè)中。關(guān)于維生素C含量的檢測(cè)方法還有很多，每種檢測(cè)方法都具有其相應(yīng)的優(yōu)缺點(diǎn)，應(yīng)根據(jù)具體試驗(yàn)條件選擇合適的維生素C含量檢測(cè)方法。