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      IL-17F基因1507位點(diǎn)多態(tài)性與兒童腸道病毒71型感染嚴(yán)重程度的相關(guān)性

      2021-12-02 07:24:38吳思菲宋杰陳宗波
      精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)雜志 2021年5期
      關(guān)鍵詞:口病等位基因多態(tài)性

      吳思菲 宋杰 陳宗波

      (青島大學(xué)附屬醫(yī)院兒科,山東 青島 266003)

      腸病毒71型(EV71)是一種無(wú)包膜、單鏈RNA病毒,它屬于人腸道病毒A組。EV71可引起手足口病、無(wú)菌性腦膜炎、急性腦干腦炎等多種疾病,是嬰幼兒手足口病重癥感染的主要病原體之一[1-3]。EV71已成為一種神經(jīng)元侵襲性病毒,在亞太地區(qū)多次爆發(fā)。2008-2012年,我國(guó)出現(xiàn)EV71手足口病大爆發(fā),發(fā)病數(shù)超700萬(wàn)例,死亡2 457例[4]。EV71重癥感染致殘率和病死率均較高,而發(fā)病機(jī)制尚未明確。其感染與宿主易感性、病毒毒力、生活環(huán)境等多種因素有關(guān)。從宿主基因水平探討EV71感染的易感性與嚴(yán)重性是目前研究的主要方向之一。白介素17F(IL-17F)是由Th17細(xì)胞分泌的一種炎性因子,它可以誘導(dǎo)多種促炎因子和趨化因子的產(chǎn)生[5]。IL-17F基因與IL-17基因位于同一染色體區(qū),二者有50%的同源性[6]。IL-17F在多種感染性疾病及自身免疫性疾病中起重要作用,如慢性阻塞性肺疾病、自身免疫性腎臟疾病和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎[7-9]。已有研究表明IL-17F基因1507位點(diǎn)多態(tài)性與病毒感染有關(guān),但目前IL-17F基因1507位點(diǎn)多態(tài)性如何參與EV71感染尚不清楚,為了明確EV71易感人群及避免EV71重癥感染帶來(lái)的危害,本研究旨在探討IL-17F基因1507位點(diǎn)多態(tài)性與兒童EV71感染嚴(yán)重程度的關(guān)系。

      1 對(duì)象與方法

      1.1

      以2014年6月—2018年6月就診于青島大學(xué)附屬醫(yī)院和青島市婦女兒童醫(yī)院EV71病毒核酸檢測(cè)陽(yáng)性的360例患兒為感染組,其中男189例,女171例;年齡(4.02±1.76)歲。根據(jù)中國(guó)衛(wèi)生部發(fā)布的《手足口病診療指南(2010年版)》中的標(biāo)準(zhǔn)[10],將感染組分為輕癥組233例和重癥組127例。兩組兒童年齡、性別等一般資料比較差異無(wú)顯著性。以同時(shí)期就診于上述兩所醫(yī)院的350例健康查體兒童為對(duì)照組,男183例,女167例;年齡(5.03±2.12)歲。對(duì)照組兒童EV71病毒核酸檢測(cè)均為陰性,且咽拭子、糞便等標(biāo)本中無(wú)EV71,并除外其他感染、神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病的兒童。

      1.2

      采用上海吉?jiǎng)P基因技術(shù)有限公司開(kāi)發(fā)的多重連接檢測(cè)反應(yīng)技術(shù)檢測(cè)IL-17F基因1507位點(diǎn)的多態(tài)性。PCR反應(yīng)引物,正向:5′-GAGGGAGGACCCTTCCTGA-3′,反向:3′-GCCCACCTTTTCTCCCCAAG-5′。PCR條件:①95 ℃ 2 min,循環(huán)1次;②94 ℃ 20 s,65 ℃ 40 s,72 ℃ 1.5 min,循環(huán)11次;③94 ℃ 20 s,59 ℃ 30 s,72 ℃ 1.5 min,循環(huán)24次;④72 ℃ 2 min,循環(huán)1次。將1 μL堿性磷酸酶加入PCR產(chǎn)物中,并在75 ℃條件下滅活15 min。雙連接反應(yīng):95 ℃ 1 min,56 ℃ 4 min,循環(huán)38次;置于4 ℃下保存。最后采用GeenMapper 4.0(Applied Bio system,美國(guó))進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

      1.3

      采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,不同組間基因型以及等位基因分布的比較采用卡方檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      2 結(jié) 果

      2.1

      感染組TT基因型頻率和T等位基因頻率均較對(duì)照組高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.399、6.722,P<0.05)。見(jiàn)表1。

      表1 兩組IL-17F基因1507位點(diǎn)基因型和等位基因分布比較

      2.2

      重癥組TT基因型頻率和T等位基因頻率均較輕癥組高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.119、9.277,P<0.05)。見(jiàn)表2。

      表2 重癥組和輕癥組IL-17F基因1507位點(diǎn)基因型和等位基因分布

      3 討 論

      EV71感染已經(jīng)在全世界多個(gè)國(guó)家和地區(qū)流行,其臨床表現(xiàn)輕重不一,輕者僅表現(xiàn)為自限性手足口病或者皰疹性咽峽炎,重者則可能出現(xiàn)腦炎、急性遲緩性麻痹、神經(jīng)源性肺水腫或肺出血,甚至心肺衰竭[11-13]。其中腦干腦炎、神經(jīng)源性肺水腫、心肺衰竭等并發(fā)癥是導(dǎo)致死亡的主要原因。EV71感染引起嚴(yán)重并發(fā)癥的機(jī)制尚未明確,其感染主要取決于病毒、宿主和環(huán)境等多重因素。目前已有多種研究表明細(xì)胞因子的基因多態(tài)性與EV71感染有關(guān),其中LV等[14]發(fā)現(xiàn)IL-17F基因多態(tài)性與EV71腦炎相關(guān),且IL-17F基因7488位點(diǎn)C等位基因?yàn)楦腥镜谋Wo(hù)因素。

      IL-17家族是具有獨(dú)特結(jié)構(gòu)的新型細(xì)胞因子家族,其家族成員在炎性疾病中起著積極作用。該家族包括6個(gè)成員的配體(IL-17A~I(xiàn)L-17F)和5個(gè)受體(IL-17RA~I(xiàn)L-17RE)[15]。IL-17A與IL-17F有58%的同源性,它們的細(xì)胞來(lái)源和功能也非常相似,且在連鎖基因上共同表達(dá),通常由Th17細(xì)胞產(chǎn)生[16]。KAWAGUCHI等[17]研究發(fā)現(xiàn)IL-17F基因7488位點(diǎn)與激活靶細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子和趨化因子的能力低下有關(guān),并對(duì)野生型IL-17F的炎癥作用可能具有保護(hù)性。已有研究證實(shí),Th1、Th17以及細(xì)胞因子IL-17A、IL-6等均與EV71感染發(fā)病機(jī)制有關(guān)[18-20]。由于IL-17F和IL-17A存在同源性,并且IL-17F基因1507位點(diǎn)的多態(tài)性與多種免疫性及炎性疾病有關(guān)?;谏鲜鰴C(jī)制,本次主要研究IL-17F基因1507位點(diǎn)多態(tài)性與EV71嚴(yán)重感染的關(guān)系。

      本研究結(jié)果顯示,感染組TT基因型和等位基因T頻率較對(duì)照組高,且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。重癥組中TT基因型頻率較輕癥組高出約2倍,其T等位基因頻率也較輕癥組高,且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果提示IL-17F基因1507位點(diǎn)基因型TT及等位基因T與EV71感染相關(guān),尤其是EV71重癥感染,這與之前有關(guān)報(bào)道的結(jié)果一致[21]。

      本研究存在幾點(diǎn)不足:第一,由于各組樣本量少,且研究對(duì)象局限于青島地區(qū),可能存在地域差異;第二,未探討IL-17F基因多態(tài)性在EV71感染過(guò)程中的調(diào)控機(jī)制。

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