肉豆蔻炮制研究進展

張賀，辛義周，馬傳江

(山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，山東省中藥臨方炮制研究所，山東 濟南 250011)

肉豆蔻(MyristicaeSemen)是肉豆蔻科(Nutmeg)肉豆蔻屬(MyristicaGronov.)植物肉豆蔻(MyristicafragransHoutt.)的干燥成熟種仁，味辛、性溫，有溫中行氣，澀腸止瀉等功效，用于脾胃虛寒，久瀉不止，脘腹脹痛，食少嘔吐[1]等癥?，F(xiàn)代藥理學研究表明，肉豆蔻有抗腫瘤、抗炎、鎮(zhèn)靜、催眠和抗菌等作用[2]，在臨床上多使用炮制品，炮制的目的是為了“減毒增效”，一方面減少揮發(fā)油中黃樟醚、肉豆蔻醚等毒性成分，另一方面增強其對腸蠕動的抑制，從而達到固腸止瀉的目的。肉豆蔻炮制最早見于南北朝劉宋《雷公炮炙論》“凡使，須以糯米作粉，使熱湯搜裹，于煻灰中炮?！蹦壳坝嘘P肉豆蔻的炮制方法多達18種，而應用較多的是麩煨、面裹煨、滑石粉煨[3]。本文對肉豆蔻炮制前后化學成分和藥理作用變化、炮制工藝方面的研究進行總結，以期為今后肉豆蔻炮制研究提供參考。

1 炮制對化學成分影響

肉豆蔻主要由揮發(fā)油、脂肪油、木脂素等其他物質組成。揮發(fā)油以萜類化合物為主，主要包含單萜、倍半萜和苯丙素類物質，以15個碳以下的小分子化合物為主[4]，其中4-亞甲基-1-(1-甲基乙基)-環(huán)己烯的含量最高(27.55%)，其余含量較高的成分為β-蒎烯(10.05%)和R-4-甲基-1-(1-甲基乙基)-3-環(huán)己烯-1-醇(7.96%)，上述3種化合物占揮發(fā)油總量的45.56%[5]，肉豆蔻醚作為揮發(fā)油中的主要成分，其含量為37.63%～47.06%[6]，脂肪油含量為25%～46%，主要包含三肉豆蔻酸甘油酯(trimyristin)和三油酸甘油酯(triolein)等?？偰局睾繛?.9%～2.2%，該化合物是肉豆蔻的主要活性成分，其中去氫二異丁香酚含量較高且具有較強的抑菌作用，《中國藥典》2015年版以去氫二異丁香酚作為肉豆蔻含量測定的指標性成分。肉豆蔻除含有揮發(fā)油、脂肪油、木脂素外，還含有淀粉(23%～32%)、蛋白質及少量的蔗糖、多聚木糖、戊聚糖、色素、果膠及皂苷[2]。

1.1 揮發(fā)油 黃鑫等[7]對肉豆蔻不同炮制品(蒸制、面煨、面炒、滑石粉煨、土煨和麩煨)中揮發(fā)油化學成分進行分析，結果顯示單萜類化合物占揮發(fā)油總量的69.15%～97.24%，芳香類化合物占揮發(fā)油總量的2.06%～25.51%，單萜類化合物為主要組成成分，以麩煨品中含量最高，面炒品次之；芳香類化合物為次要成分，以滑石粉煨品中含量最高，面煨品和土煨品次子，麩煨品最低。煨肉豆蔻(面裹煨)揮發(fā)油油含量下降26.52%。李迪等[8]對肉豆蔻不同炮制品中肉豆蔻醚的含量進行考察，結果顯示生品肉豆蔻中肉豆蔻醚的含量為0.215%，5種炮制品(蒸制品、面裹炒制品、小麥面炒制品、赤石烘烤品、土制品)中肉豆蔻醚的含量分別為 0.211%、0.210%、0.205%、0.203%、0.201%，各種炮制方法對肉豆蔻醚的含量影響不大，主要原因是肉豆蔻醚沸點(276～277 ℃)較高。耿媛媛等[9]分析二神丸中補骨脂和肉豆蔻炮制品對其4種組合揮發(fā)性成分的影響，結果顯示黃樟醚在二神丸組合Ⅳ(補骨脂鹽炙品+肉豆蔻煨制品)的含量為0.0676%，在二神丸組合Ⅰ(補骨脂生品+肉豆蔻生品)的含量為0.0706%，即肉豆蔻經(jīng)炮制后黃樟醚含量降低。

1.2 木脂素 劉歡等[10]對肉豆蔻、麩煨肉豆蔻、切片后麩煨肉豆蔻中肉豆蔻木脂素、去氫二異丁香酚兩種木脂素類成分同時進行含量測定，考察麩煨前后含量變化，結果顯示肉豆蔻麩煨后木脂素、去氫二異丁香酚這兩種成分含量均降低，麩煨對肉豆蔻木脂素影響較小，對去氫二異丁香酚含量影響較大。耿媛媛等[11]對二神丸中藥物炮制前后化學成分含量變化進行研究，結果顯示5個批次二神丸中肉豆蔻經(jīng)炮制(麩煨)后，去氫二異丁香酚的含量降低。袁子民等[12]對麩煨肉豆蔻中去氫二異丁香酚的含量進行測定，結果顯示10批市售麩煨肉豆蔻飲片中去氫二異丁香酚的含量為0.076%～0.345%。

1.3 其他 趙啟苗等[13]利用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)法分析比較肉豆蔻及其炮制品中無機元素的含量。結果顯示肉豆蔻中富含Mg、Ca、Fe、Na、K等無機常量必需元素和Mn、Cu、Zn、Se、Cr、Co、V、Ni 等微量必需元素，經(jīng)炮制后Ca、Fe、Na等元素的含量有所升高，Mg、K有所降低。肉豆蔻中Al、Sb、Be等潛在有毒元素含量較低，炮制后基本沒有變化。趙光云等[14]對肉豆蔻95 %乙醇提取物進行化學成分分析，分離得到9個化合物，其中3個為馬拉巴酮衍生物，在生品中未能發(fā)現(xiàn)該類成分，推測該類化合物在肉豆蔻種仁中含量較少，但經(jīng)炮制加工后，此類化合物卻容易分離得到。

2 炮制對藥理作用及毒性影響

肉豆蔻藥理作用廣泛，具有止瀉、抗氧化、抗炎、抗腫瘤、抗菌、抗痙攣、抗抑郁、保肝、降血糖血脂等作用，新的藥理作用在被不斷發(fā)現(xiàn)。肉豆蔻揮發(fā)油具有一定的中樞抑制作用，給予小鼠灌胃肉豆蔻揮發(fā)油半數(shù)致死量LD50為7.67 g·kg-1，大多數(shù)中毒小鼠做環(huán)形運動，呼吸急促，步態(tài)蹣跚[15-16]。

2.1 止瀉 陳麗坤等[17]對肉豆蔻炮制品固腸止瀉作用進行研究，結果顯示各炮制品對腸管的抑制和對抗乙酚膽堿的作用較生品大，證明肉豆蔻炮制后用于固腸止瀉的科學性。袁子民等[18]采用番瀉葉致小鼠腹瀉模型和正常小鼠小腸推進實驗考察肉豆蔻及炮制品90% 乙醇提取物的止瀉作用，結果顯示止瀉作用為：面煨肉豆蔻>麩煨肉豆蔻>肉豆蔻，體內止瀉實驗進一步驗證了肉豆蔻及炮制品止瀉的有效部位除揮發(fā)油外還有脂溶性活性成分。另外，揮發(fā)油含量炮制后雖然降低，但止瀉作用卻增強，可能與炮制后脂溶性成分(木脂素類)在體內吸收增加有關。除了研究單味藥外，也有將肉豆蔻其放在經(jīng)典組方中研究。潘新等[19]等探討補骨脂、生品肉豆蔻與炮制品分別配方組成的古方“二神丸”對“脾腎陽虛泄瀉”小鼠止瀉作用的差異，結果顯示補骨脂鹽炙品+肉豆蔻煨炙品組成的“二神丸”對“脾腎陽虛泄瀉”型小鼠有明顯的止瀉作用，可明顯延長番瀉葉所致急性腹瀉小鼠的首次泄瀉時間，降低稀便率、稀便級和腹瀉指數(shù)，提示“二神丸”中藥物補骨脂和肉豆蔻分別經(jīng)過鹽炙和煨炙后止瀉作用增強。曹永翔等[20]研究表明肉豆蔻炮制品能顯著抑制新斯的明引起的小腸推進功能亢進，其作用強度依次為：面品>麩品>滑品>生品，肉豆蔻各炮制品中面品和麩品能明顯對抗番泄瀉葉引起的腹瀉，滑石粉煨品無此作用，生品表現(xiàn)出止瀉作用。

2.2 抗氧化 馬可等[21]對肉豆蔻揮發(fā)油(VOMF)抗氧化活性進行研究，結果顯示VOMF中含有大量的單萜類和芳香族類化合物，具有顯著的抗氧化和清除自由基的能力。李榮等[22]對肉豆蔻精油(NEO)抗氧化性能及清除自由基能力進行研究，結果顯示NEO具有良好的抗氧化效果，在一定濃度范圍內，NEO抗氧化活性比合成抗氧劑2,6-二叔丁基對甲酚(BHT)和沒食子酸丙酯(PG)大，其清除羥自由基、DPPH自由基和超氧陰離子自由基能力優(yōu)于合成抗氧劑。袁子民等[23]對肉豆蔻及炮制品(麩煨、面煨)醇提物的體外抗氧化作用進行研究，豆蔻及其炮制品醇提液對羥自由基(·OH)和超氧陰離子(O2-·)清除能力不同，其清除能力為：肉豆蔻>面煨肉豆蔻>麩煨肉豆蔻，肉豆蔻及其炮制品醇提物均具有抗氧化能力，但炮制后抗氧化作用降低，可能與炮制后揮發(fā)油、木脂素類成分含量降低有關。

2.3 抗炎 肉豆蔻中發(fā)揮抗炎作用的物質主要是木脂素類成分，金宏等[24]采用體外抗炎模型對肉豆蔻木脂素抗炎機理進行研究，結果顯示肉豆蔻揮發(fā)油對急性放射性腸炎腸黏膜有保護作用[25]。張慧等[26]采用大孔吸附樹脂法富集純化肉豆蔻總木脂素，采用二甲苯致小鼠耳腫脹模型，通過測定腫脹度、抑制率考察其抗炎活性，進一步確認肉豆蔻總木脂素具有明顯的抗炎活性。袁子民等[18]對肉豆蔻及其炮制品醇提取物的抗炎作用進行研究，結果顯示抗炎作用為麩煨肉豆蔻>面煨肉豆蔻>肉豆蔻，麩煨肉豆蔻與面煨肉豆蔻作用無顯著性差異。

2.4 抗腫瘤 有研究發(fā)現(xiàn)肉豆蔻乙酸乙酯部位能引起人肝癌細胞BEL-7402細胞線粒體膜電位降低，誘導胞內ROS產(chǎn)生，且能促進BEL-7402細胞中細胞色素C從線粒體大量釋放到胞質中，導致相關蛋白Bcl-2和Bax的表達，進而激活caspase-9/3，使細胞進入線粒體凋亡程序[27]。牛玉秋[28]采用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法(MTT法)對肉豆蔻不同炮制品(生品、面煨、滑石粉煨、麩煨)提取物進行體外抗腫瘤作用比較，評價炮制對肉豆蔻抗腫瘤作用的影響，結果顯示肉豆蔻不同炮制品對體外培養(yǎng)的人黑色素瘤細胞、人宮頸癌細胞HeLa、人肝癌細胞HepG和人肺癌細胞H460的抑制作用均強于生品，并呈現(xiàn)出一定的時間、濃度依賴關系，且炮制品中以面煨炮制品的癌細胞抑制作用較強。

2.5 減毒 研究發(fā)現(xiàn)，肉豆蔻揮發(fā)油具有明顯的毒性(主要表現(xiàn)為中樞神經(jīng)系統(tǒng)毒性)，主要的毒性成分可能是揮發(fā)性成分[29]，賈天柱等[30]對肉豆蔻不同炮制品的急性毒性進行比較研究，已證明肉豆蔻炮制后止瀉作用增強，毒性降低，具減毒、增效的雙重意義。王靜等[31]采用尿液代謝組學法對肉豆蔻麩煨炮制前后對大鼠長期毒性作用機制的差異性進行研究，研究結果表明肉豆蔻生品組長期給藥會導致機體出現(xiàn)泛酸、肉毒堿C2∶O和氨基酸代謝異常，引起肝損傷，具有一定的肝毒性，麩煨炮制后這些代謝異常得到了一定程度的調整，降低了肝損傷和肝毒性，起到一定的肝臟保護作用。生品組尿樣中肌酐含量較正常組顯著降低，肉豆蔻麩煨炮制后，尿樣中肌酐含量與正常組無顯著差異，表明肉豆蔻麩煨炮制后能減低腎臟毒性。

3 炮制工藝

肉豆蔻的炮制方法較多，主要有凈制、切、煨、炮、炒及浸等，炮制工藝中常用的輔料有糯米粉、面、大麥麩、醋、紙、生姜等十余種[32]。目前，對肉豆蔻炮制工藝的研究相對較少，主要集中在煨法、炒法和制霜3種炮制方法。

3.1 煨法 王少俠[33]對肉豆蔻面裹煨法加以改進，將等量面粉用適量的水混合后拌成稠膏狀，肉豆蔻投入其中，攪拌，待面粉全部黏附在藥物表面后置鍋內，先用中火拌炒，待部分水分蒸發(fā)后，改用文火，繼續(xù)拌炒到面粉全部脫落，藥物呈棕黃色并且果皮破裂時出鍋，篩去面粉，放涼即可。此法省時省力且容易操作。代冬梅[34]以甲基丁香酚、甲基異丁香酚、肉豆蔻醚和黃樟醚含量為指標，采用綜合評分法優(yōu)選出肉豆蔻最佳炮制工藝為：浸泡6 h，溫度170～180 ℃，麩煨25 min，每100 kg肉豆蔻用麥麩40 kg，對已確定的最佳工藝進行中試放大試驗，中試測定結果與實驗室小樣的測定結果接近，故認為該麩煨工藝可行。袁子民[35]等對肉豆蔻切片后再進行麩煨的炮制新工藝進行研究，結果得最佳炮制工藝為：100 g肉豆蔻加40 g麥麩，110～120 ℃煨制20 min，傳統(tǒng)麩煨溫度為150～160 ℃，切片后麩煨溫度為110～120 ℃，溫度降低利于有效成分的穩(wěn)定。

3.2 炒法 李宏斌[36]將肉豆蔻粉碎成直徑0.3～0.5 cm左右的小顆粒后，拌入適量赤石脂細粉(1∶1.2)，置鍋內炒至肉豆蔻起焦斑時取出，篩去赤石脂細粉，即可。該法克服了傳統(tǒng)方法中裹面皮的缺點，赤石脂粉吸收油質較面粉強，保溫效果好，另外，赤石脂本身也具有止瀉作用，因此該方法較裹面煨肉豆蔻炮制法好。李楠等[37]以揮發(fā)油與去氫二異丁香酚含量為指標，以滑石粉用量、滑石粉粒徑、炮制溫度、炮制時間4個因素為考察對象，優(yōu)選滑石粉炒肉豆蔻工藝，結果顯示滑石粉用量與滑石粉粒徑對揮發(fā)油含量有顯著性影響，最優(yōu)炮制工藝為：滑石粉的用量為0.5倍藥材量，溫度為170 ℃，200目滑石粉翻炒時間為20 min。

3.3 制霜 胡娜等[38]采用機械壓榨法對肉豆蔻的制霜工藝進行改進，并與傳統(tǒng)法進行比較，機械壓榨制霜使肉豆蔻中脂肪油和揮發(fā)油含量明顯降低，起到了去油減毒作用。與傳統(tǒng)制霜法比較，本方法處理藥材量大，制霜效率高，可用于工業(yè)化生產(chǎn)。

4 結語

肉豆蔻炮制目的一方面是為了減少揮發(fā)油中的毒性成分，另一方面是為了增強固腸止瀉作用。揮發(fā)油中有毒成分和有效成分共存，某些毒性成分亦是有效成分，如肉豆蔻醚既有致幻麻醉作用，也有癌癥預防作用；肉豆蔻的藥理作用不僅僅局限于固腸止瀉，還有抑菌、抗炎、抗氧化、抗癌、保肝、降血糖血脂等多種藥理學活性，因此肉豆蔻的油性物質尤其是揮發(fā)油的去除問題應辨證看待。

有關肉豆蔻揮發(fā)油含量和組分的研究相對較多，但對木脂素類中等或大極性組分的含量及藥理活性研究較少，研究發(fā)現(xiàn)木脂素類化合物是肉豆蔻屬植物的主要活性成分，新木脂素衍生物也被從肉豆蔻中分離出來[39-40]，因此肉豆蔻中除揮發(fā)油之外的其他活性組分有待深入研究。肉豆蔻藥理活性研究較多集中在不同溶劑提取物上，對單體活性成分的研究較少，肉豆蔻經(jīng)炮制后的藥理活性變化研究缺乏系統(tǒng)及廣泛的臨床研究。隨著化學成分和藥理活性研究的不斷深入，肉豆蔻炮制品在臨床上會得到合理而準確的使用。