鄭甌翔，夏雷

溫州市公安局刑事科學技術研究所，浙江 溫州 325000

1 案 例

1.1 簡要案情

本實驗室在人員建庫工作中，通過對32 000余份無關個體樣本進行常染色體檢驗，發(fā)現(xiàn)2 例D12S391基因座具有四等位基因現(xiàn)象，發(fā)生率約為0.006 25%。為驗證該樣本檢驗的準確性及探究四等位基因形成的原因，本實驗室對其進行了復核檢驗。

1.2 檢測方法

采用直接擴增法進行DNA擴增。

分別采用華夏TM白金PCR 擴增試劑盒（美國Applied Biosystems 公司），人類STRtyper-21G 擴增熒光檢測試劑盒、SureID? PanGlobal 人類DNA 身份鑒定試劑盒（寧波海爾施公司），在9700型PCR 儀（美國Applied Biosystems 公司）上按各試劑盒說明書進行STR復合擴增，擴增體系為10μL，擴增產(chǎn)物應用3500xL基因分析儀（美國Applied Biosystems 公司）進行檢測，并使用GeneMapperTMID-X軟件（美國Applied Bio?systems公司）進行分型。

1.3 檢測結(jié)果

首次采用華夏TM白金PCR 擴增試劑盒進行擴增，結(jié)果顯示，除D12S391基因座表現(xiàn)為四等位基因外，其余基因座均表現(xiàn)為正常分型。1號樣本D12S391基因座基因型依次為19，21，22，23，峰高比約為1∶1∶1∶1（圖1）；2 號樣本D12S391基因座基因型依次為16，21，22，23，峰高比約為1∶1∶1∶1（圖2）。

圖1 1號樣本采用華夏TM白金PCR擴增試劑盒的擴增結(jié)果Fig.1 The amplification results of sample 1 with HuaxiaTM Platinum PCR Amplification Kit

圖2 2號樣本采用華夏TM白金PCR擴增試劑盒的擴增結(jié)果Fig.2 The amplification results of sample 2 with HuaxiaTM Platinum PCR Amplification Kit

隨后分別采用人類STRtyper-21G 擴增熒光檢測試劑盒、SureID? PanGlobal 人類DNA 身份鑒定試劑盒進行復核，結(jié)果一致。

2 討論

目前，國內(nèi)外法庭科學中個體識別、親子鑒定主要采用STR 分型方法。正常人常染色體單個STR 基因座只有2 個等位基因，純合子個體圖譜表現(xiàn)為只有1 個峰或1 條帶，而雜合子個體圖譜表現(xiàn)為2 個峰或2 條帶，也有報道[1-3]稱個別基因座檢出3 個峰或3 條帶。四等位基因是指個體圖譜單個STR 基因座表現(xiàn)為4個峰或4條帶，并且通過不同試劑盒驗證，可以得到確認，情況極為罕見。本文涉及的2 個樣本在分別采用華夏TM白金PCR擴增試劑盒、人類STRtyper-21G擴增熒光檢測試劑盒、SureID? PanGlobal 人類DNA身份鑒定試劑盒復合擴增后，在D12S391基因座檢出相同的基因型，且除D12S391基因座表現(xiàn)為四等位基因外，其余基因座均表現(xiàn)為正常分型，可以排除樣本污染、實驗室污染、PCR 擴增異常、熒光燃料污染、Pull-up 峰、某基因座過大或過小的off-ladder（OL）等位基因落在了相鄰基因座范圍內(nèi)[4-5]以及試劑盒引物設計等因素。在確定樣本為單一來源的情況下，某個STR 基因座檢出多等位基因，這種拷貝數(shù)變異（copy number variation，CNV）現(xiàn)象產(chǎn)生的原因是由于樣本中存在多余的染色體片段，采用PCR 引物擴增時產(chǎn)生了額外的PCR 擴增片段[6]。多等位基因的形成機制尚不明確，可能是由于遺傳因素，如染色體在減數(shù)分裂時出現(xiàn)不等價交換，或有絲分裂時異常分離導致三體綜合征、體細胞突變，或受精卵發(fā)育階段，染色體不分離產(chǎn)生嵌合體等，也可能是骨髓移植后形成了嵌合體。而根據(jù)遺傳學發(fā)育特征及D12S391基因座所在的染色體的特點，推測本文2 例樣本出現(xiàn)四等位基因的原因可能是局部基因重復，具體需要進一步開展基因座測序才可明確。關于峰高，本文2例在D12S391基因座中形成的4 個峰的峰高比均為1∶1∶1∶1，推測應該是該基因座的引物區(qū)存在相鄰的結(jié)合位點，且實現(xiàn)了均衡擴增。

在個體識別或親子鑒定中，四等位基因可能導致錯誤判斷，因此，出現(xiàn)基因座分型異常時應引起重視，使用多種試劑盒、多個基因座分型進行復核確認，排除各種因素的干擾和影響，降低錯誤分析的風險，確保鑒定意見的準確性，同時，可以考慮將四等位基因座作為特征基因座在個體識別中加以應用。