氣相色譜檢測氯甲酸正戊酯中有關(guān)物質(zhì)的方法研究

王志鵬，王煥霞，王宏俠，唐海，周微

（江蘇天士力帝益藥業(yè)有限公司，天津 300410）

氯甲酸正戊酯是合成卡培他濱等藥物的重要工業(yè)原料[1-3]。它是以正戊醇與過量的氯甲酸三氯甲酯發(fā)生?；磻?yīng)得到的[4-6]。由于起始原料正戊醇中可能含有2-甲基丁醇和3-甲基丁醇兩個同分異構(gòu)體，它們可能引入副產(chǎn)物氯甲酸-2-甲基丁酯及氯甲酸-3-甲基丁酯。另外，可能存在副產(chǎn)物碳酸二戊酯以及未反應(yīng)完的正戊醇。因此，在制定氯甲酸正戊酯的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，應(yīng)對上述雜質(zhì)進行研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 7890A 氣相色譜儀（美國安捷倫公司）；chromeleon 7 色譜工作站（美國賽默飛公司）；Mettler XS105DU 電子天平（瑞士梅特勒公司）。

1.2 試藥氯甲酸正戊酯樣品

新沂市匯力精細化工有限公司，批號： 201711011；氯甲酸-2-甲基丁酯工作對照品：自制，批號20170501，含量99.7%；氯甲酸-3-甲基丁酯工作對照品：自制，批號20170501，含量99.1%。正戊醇：新沂市匯力精細化工有限公司，批號201702005，含量99.2%；碳酸二戊酯工作對照品：自制，批號20170501，純度99.3%。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件以100%二甲基聚硅氧烷為固定液的毛細管柱（安捷倫DB-1 30 m×0.53 mm， 3 μm 色譜柱適用）；進樣口溫度為150 ℃；檢測器溫度為250 ℃；起始溫度為80 ℃，維持5 min，以每分鐘20 ℃的速率升溫至200 ℃，維持10 min；進樣量1 μL，分流比為10∶1；載氣流速為2 mL/min。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品儲備液取氯甲酸-2-甲基丁酯、正戊醇、碳酸二戊酯、氯甲酸正戊酯適量，加二氯甲烷制成每1mL 分 別 約 含0.1 mg、0.12 mg、0.4 mg、0.1 mg 的單標(biāo)儲備液及同濃度的混合儲備液。另制備每1 mL含氯甲酸-3-甲基丁酯0.1 mg 的單標(biāo)儲備液。

2.2.2 供試品溶液稱取氯甲酸正戊酯樣品約200 mg，精密稱定，置10 mL 量瓶中，加二氯甲烷制成每1 mL 約含20 mg 的溶液，作為供試品溶液。

2.2.3 混合對照品溶液精密量取供試品溶液1 mL 置100 mL 量瓶中，加二氯甲烷稀釋至刻度，搖勻，精密量取2 mL 置20 mL 量瓶中，精密加入2.2.1 項下的對照品混合儲備液1 mL，用二氯甲烷稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗取上述“2.2”項下的對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液（二氯甲烷）。按照“2.1”項下的色譜條件分別進樣，結(jié)果該色譜條件下，對照品溶液中各色譜峰的對稱性良好，理論塔板數(shù)大于100 000，色譜峰間分離度大于6.7，符合2020年版《中國藥典》的相關(guān)規(guī)定。見圖1。

圖1 GC 色譜圖Fig.1 Gas chromatograms

2.3 專屬性試驗

采用強制降解試驗考查色譜系統(tǒng)的專屬性。取氯甲酸正戊酯對照品約200 mg，置20 mL 量瓶中，分別進行以下破壞性試驗：強酸降解：①0.1 mol/L HCl 1 mL 85 ℃水浴破壞40 min，中和。②強堿降解：0.1 mol/L NaOH 1 mL 85 ℃水浴破壞40 min，中和。③高溫破壞：85 ℃水浴加熱40 min。④氧化破壞樣品：3%雙氧水1 mL，85 ℃水浴40 min。精密量取10 mL 二氯甲烷萃取上述溶液，各取有機層1 μL 注入氣相色譜儀測定。結(jié)果表明，氯甲酸正戊酯遇水會水解產(chǎn)生少量正戊醇，堿性高溫條件下水解速率稍快，與主峰分離良好。

2.4 線性關(guān)系試驗

取“2.2.1”項下的對照品儲備液3 mL，2 mL，1 mL，0.5 mL，0.2 mL，140 μL，40 μL 置10 mL 量瓶中，用二氯甲烷稀釋至刻度，搖勻，作為線性關(guān)系1-7 號溶液。重復(fù)上述操作，單獨配制氯甲酸-3-甲基丁酯溶液。分別進樣，以質(zhì)量濃度 C（μg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積 A 為縱坐標(biāo)，進行線性回歸，結(jié)果見表 1。

2.5 定量限與檢測限

取混合對照品溶液，用二氯甲烷逐步稀釋，按“2.1”項下色譜條件測定，分別以S/N=10、 S/N=3 求得各雜質(zhì)的定量限（ LOQ）和檢測限（ LOD），結(jié)果見表 1。

表1 氯甲酸正戊酯中5 種成分線性方程、LOD 及LOQTab.1 The LOD， LOQ and the linear equation of 5 ingredients in pentyl chloroformate

2.6 儀器精密度

按“2.2.3”項下方法制備混合對照品溶液，連續(xù)進樣 6 次，測定峰面積，結(jié)果正戊醇、氯甲酸-2-甲基丁酯、氯甲酸正戊酯、碳酸二戊酯峰面積的 RSD 分別為 1.6%、 1.6% 、1.9%和1.2%，表明儀器精密度良好。

2.7 重復(fù)性樣品

取氯甲酸正戊酯（批號：201711011）按照“2.2”項下制成6 份供試品溶液和對應(yīng)的混合對照品溶液，分別進樣，按外標(biāo)法測定樣品中氯甲酸-2-甲基丁酯、正戊醇、碳酸二戊酯含量，結(jié)果見表2。

表2 重復(fù)性試驗數(shù)據(jù)Tab.2 Data of repeatability test

2.8 準(zhǔn)確度試驗

取氯甲酸正戊酯3 份，每份約200 mg，置10 mL 容量瓶中，分別加氯甲酸-2-甲基丁酯儲備液2.2 mL，正戊醇儲備液2.9 mL，碳酸二戊酯儲備液2.0 mL，用二氯甲烷稀釋至刻度，搖勻，作為150%水平回收率樣品溶液。

100%水平回收率樣品溶液：取氯甲酸正戊酯6份，每份約200 mg，置10 mL 量瓶中，分別加氯甲酸-2-甲基丁酯儲備液1.2 mL，正戊醇儲備液1.9 mL，碳酸二戊酯儲備液1.0 mL，加二氯甲烷制成100%水平回收率樣品溶液。取氯甲酸-3-甲基丁酯制備回收率試驗溶液，雜質(zhì)添加量同氯甲酸-2-甲基丁酯。分別進樣，測定雜質(zhì)回收率，結(jié)果見表3。

表3 回收率試驗Tab.3 Data of the recovery test

（續(xù)表3）

2.9 溶液穩(wěn)定性

將對照品溶液和供試品溶液在室溫下放置24 h，分別于0，6，12，18，24 h 進樣，測定雜質(zhì)峰面積。結(jié)果表明，對照品溶液在室溫下24 h 內(nèi)穩(wěn)定，而供試品溶液中正戊醇有增加趨勢，應(yīng)臨用現(xiàn)配。

2.10 耐用性試驗

對方法耐用性進行試驗，通過改變流速（2.0±0.1） mL/min、升溫速率（20±1） ℃/min、進樣口溫度（150±2） ℃、檢測器溫度（250±2） ℃等試驗條件，考察各色譜峰分離情況，結(jié)果各色譜峰之間分離良好。表明本試驗方法的耐用性良好。

3 討論

（1）氯甲酸-2-甲基丁酯和氯甲酸-3-甲基丁酯均為工藝雜質(zhì)，為同分異構(gòu)體，一般色譜條件無法將二者分離，本試驗條件可以對二者總量按照單一雜質(zhì)進行控制，標(biāo)準(zhǔn)更加嚴格。

（2）本試驗條件可以有效對正戊醇、氯甲酸-2-甲基丁酯（氯甲酸-3-甲基丁酯）、碳酸二戊酯進行分離，峰形良好，能準(zhǔn)確控制氯甲酸正戊酯中的有關(guān)物質(zhì)。