李海潔 郭國軍 郭朝輝 王林楓 王春秀 李 明 李國喜 劉變枝

(1. 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院, 鄭州 450046; 2. 河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院, 鄭州 450046)

杜仲(Eucommia ulmoides)是我國特有名貴藥用落葉喬木, 傳統(tǒng)以皮入藥。隨著對杜仲資源利用的深入挖掘, 現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)杜仲葉同樣含有木脂素類、黃酮類和苯丙素類等成分, 其化學(xué)組成和藥理作用與杜仲皮所含物質(zhì)相似, 具抑菌、抗氧化、調(diào)節(jié)機體免疫力和抗感染的作用。杜仲葉還具有脂肪和蛋白質(zhì)含量高, 含有多種氨基酸、微量元素及維生素等特點[1—3]。畜禽中的研究已經(jīng)證實在飼料中添加適量杜仲葉粉或其提取物可有效提高機體生產(chǎn)性能、免疫及抗氧化能力, 改善肉質(zhì)品質(zhì)[4]。

近年來水產(chǎn)品已成為人類動物蛋白質(zhì)的主要來源, 但隨著資源和環(huán)境約束的進一步加大, 水體環(huán)境保護和水產(chǎn)品質(zhì)量安全問題日益突出。在農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第194號公告發(fā)布后, 我國穩(wěn)步推進飼料行業(yè)“減抗”行動, 開發(fā)綠色、安全、高效和無抗的飼料成為水產(chǎn)飼料從業(yè)者的首要工作重點。在“無抗”背景下, 杜仲葉價廉易得、抗菌消炎的特性受到了廣泛關(guān)注。已有部分研究證實在飼料中添加杜仲葉或者杜仲提取物等可提高水產(chǎn)動物生長性能、免疫應(yīng)答水平及肌肉品質(zhì)[5—9], 說明杜仲葉及其提取物可作為潛在的中草藥應(yīng)用到水產(chǎn)養(yǎng)殖中。但鑒于現(xiàn)有研究多以幼魚為實驗對象, 缺乏大規(guī)格魚種和成魚階段的實驗數(shù)據(jù), 魚類對飼料物質(zhì)的利用效率又受種屬和食性等的影響, 即使同種魚,不同品種和不同規(guī)格間也存在物質(zhì)利用效率的差異[10,11]。因此, 開展杜仲葉粉在大規(guī)格魚種和成魚階段魚類飼料中的應(yīng)用評估, 將為更有效地利用杜仲葉這一生物資源提供有效數(shù)據(jù)支撐。

黃河鯉(Cyprinus carpio)是黃河流域主要優(yōu)質(zhì)魚類, 因金鱗赤尾、肉質(zhì)鮮美聞名, 是我國內(nèi)陸水域重要養(yǎng)殖品種, 深受廣大消費者歡迎。目前有關(guān)飼料中添加杜仲葉粉對黃河鯉影響的報道較少, 為滿足不同生長階段魚類對營養(yǎng)素利用差異性和集約化規(guī)模養(yǎng)殖下對精準(zhǔn)營養(yǎng)飼喂的需求, 本實驗以黃河鯉成魚為實驗對象研究不同添加水平杜仲葉粉對黃河鯉成魚生長、體成分、血液及肝臟抗氧化能力等方面的影響, 以期為黃河鯉成魚新型健康飼料的配制提供有效的數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗用魚和試驗分組管理

試驗用魚來源于河南省水產(chǎn)研究院黃河鯉育種中心, 正式試驗前入圓形暫養(yǎng)缸(直徑2.00 m, 高0.75 m, 有效水體積1.88 m3)暫養(yǎng)2星期, 以適應(yīng)實驗環(huán)境。在暫養(yǎng)結(jié)束后, 挑選表觀健康, 規(guī)格一致的試驗魚[初始規(guī)格: (505.13±1.37) g], 分別放入15個(直徑0.80 m, 高0.72 m, 有效水體積: 0.30 m3)水族缸內(nèi),每缸放魚15尾。

試驗共分5個處理組, 以0添加組為對照, 以2%、4%、6%和8%杜仲葉粉添加組為試驗組, 每組3個平行。養(yǎng)殖系統(tǒng)為室內(nèi)循環(huán)水系統(tǒng), 試驗用水為曝氣24h的自來水, 實驗期間水溫維持在29—32℃, 光照周期12L∶12D(光照時間8: 00—20: 00),溶氧量≥6.00 mg/L, 氨氮≤0.70 mg/L。

實驗期間, 每天上午9: 00、下午15: 00各飽食投喂1次, 每次少量多次循環(huán)投喂1h, 投喂結(jié)束記錄每缸殘餌顆粒數(shù), 用以計算攝食數(shù)據(jù)。每天投喂量為魚體體重的2%—3%, 具體視魚的攝食情況適當(dāng)調(diào)整。

1.2 試驗飼料配置

試驗飼料以魚粉和豆粕為主要蛋白源, 以豆油和玉米油為脂肪源, 配制蛋白含量30.05%—31.27%,脂肪含量5.71%—7.27%的試驗飼料。試驗用杜仲葉粉(由國家林業(yè)局泡桐研究開發(fā)中心提供)來自河南省汝陽縣杜仲種植基地, 為秋后采集的鮮葉經(jīng)曬干和粉碎, 過40目篩制成, 其常規(guī)營養(yǎng)成分為干物質(zhì)(Dry matter, DM)89.46%、總能(Gross energy,GE)19.47 MJ/kg、粗蛋白質(zhì)(Crude protein, CP)12.38%、粗灰分(Crude ash)12.79%、鈣(Ca)2.06%和磷(P)0.05%。

所有原料經(jīng)粉碎機粉碎后, 過40目篩并充分混勻后加水, 制成粒徑大小2.50 mm左右的濕顆粒, 自然風(fēng)干后保存于-4℃冰箱備用。試驗飼料配方及成分組成見表 1。

表1 黃河鯉試驗飼料配方及營養(yǎng)組成Tab. 1 Formulation and nutrition composition of the experimental diet of yellow river carp

1.3 取樣方法

試驗結(jié)束時整缸稱重并計數(shù), 用以計算生長性能; 每缸取樣5尾魚, 經(jīng)間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽(3-Aminobenzoic acid ethyl ester methanesulfonate,MSS-22, 50 mg/L)麻醉后, 3尾用肝素鈉潤洗后的注射器在尾靜脈處采血, 轉(zhuǎn)入肝素鈉潤洗過的EP管中, 4000 r/min離心15min, 取上清液置于新的EP管中, 液氮速凍后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中冷凍保存, 用于血液生理指標(biāo)測定; 抽過血的黃河鯉于冰上解剖, 取其肝臟, 預(yù)冷生理鹽水沖洗干凈后, 濾紙吸干水分,放入EP凍存管中, 用于肝臟生理指標(biāo)測定; 同時解剖刀取背脊以下、側(cè)線以上肌肉放入樣品袋中, 液氮速凍后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中冷凍保存, 用于分析肌肉常規(guī)營養(yǎng)成分和氨基酸組成。剩余2尾稱重并記錄抹干重用于體成分分析。

1.4 樣品分析

試驗飼料、魚體背肌和全魚體成分組成采用AOAC(1995)方法進行測定, 具體方法如下: 水分(Moisture)含量在105℃烘箱中烘至恒定進行測定;粗蛋白質(zhì)(Crude protein)含量按照凱氏定氮法測定樣品中氮的含量后, 乘以系數(shù)6.25計算得出; 粗脂肪(Crude lipid)含量采用索氏抽提儀測定; 粗灰分(Crude ash)含量用馬弗爐550℃度灼燒至恒重測定。

魚體肌肉氨基酸組成測定根據(jù)GB5009.124-2016標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心(鄭州)檢測。血液和肝臟谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidase, GSH-PX)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)、丙二醛(Malondialdehyde, MDA)、堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,AKP)和酸性磷酸酶(Acid phosphatase, ACP)等用購自南京建成科技有限公司的試劑盒測定。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗魚的增重率(Weight gain rate,WGR)、特定生長率(Specific growth rate,SGR)和飼料轉(zhuǎn)化效率(Feed conversion rate,FCR)的計算公式如下:

增重率(WGR, %)=100×(終末體重-初始體重)/初始重量

特定生長率(SGR, %/d)=100×(ln魚體末重-ln魚體初重)/飼養(yǎng)天數(shù)

飼料轉(zhuǎn)化效率(FCR, %)=100×增重/投喂量

數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SE)”表示, 利用SPSS 25.0軟件進行分析處理。數(shù)據(jù)經(jīng)齊性檢驗后(Homogeneity of variances), 進行單因素方差分析(One-way ANOVA), 如果數(shù)據(jù)差異顯著(P＜0.05),進行Duncan’s多重比較(Duncan’s multiple range test)。

2 結(jié)果

2.1 飼料中添加杜仲葉粉對黃河鯉生長性能和飼料利用的影響

由表 2可知, 在飼料中添加不同含量杜仲葉粉對黃河鯉的增重率、特定生長率及飼料轉(zhuǎn)化效率均無顯著性差異影響(P＞0.05)。

表2 飼料中杜仲葉粉不同添加水平對黃河鯉生長性能和飼料利用的影響Tab. 2 Effects of dietary of Eucommia ulmoides leaf powder on growth and feed utilization of yellow river carp

2.2 飼料中添加杜仲葉粉對黃河鯉肌肉和魚體成分組成的影響

由表 3可知, 黃河鯉肌肉中水分含量以6%杜仲葉粉添加組最低, 顯著低于其他處理組(P＜0.05), 肌肉粗灰分含量在各處理組間無顯著差異(P＞0.05)。肌肉中粗脂肪含量隨著飼料中杜仲葉粉的添加量升高顯著下降, 以8%杜仲葉粉添加組最低, 顯著低于0添加組和2%添加組(P＜0.05); 粗蛋白含量則隨著飼料中杜仲葉粉的添加呈顯著上升趨勢, 于6%杜仲葉粉添加組魚體肌肉粗蛋白含量最高, 顯著高于對照組(P＜0.05)。

表3 飼料中杜仲葉粉不同添加水平對黃河鯉肌肉成分的影響Tab. 3 Effects of dietary of Eucommia ulmoides leaf powder on muscle composition of yellow river carp

由表 4可知, 在飼料中添加杜仲葉粉顯著影響黃河鯉魚體粗蛋白、粗脂肪、粗灰分和水分的含量(P＜0.05)。魚體水分含量隨飼料中杜仲葉粉含量的增加整體呈顯著下降趨勢, 以8%添加組水分含量最低(P＜0.05)。除6%添加組外, 魚體粗灰分、粗蛋白和粗脂肪含量均表現(xiàn)出隨飼料中杜仲葉粉含量升高而上升趨勢, 均以8%處理組最高(P＜0.05)。

表4 飼料中杜仲葉粉不同添加水平對黃河鯉體成分的影響Tab. 4 Effects of dietary of Eucommia ulmoides leaf powder on body composition of yellow river carp

2.3 飼料中添加杜仲葉粉對黃河鯉肌肉氨基酸組成的影響

對黃河鯉肌肉中16種氨基酸含量進行檢測發(fā)現(xiàn), 黃河鯉肌肉中蘇氨酸(Thr)、絲氨酸(Ser)和組氨酸(His)的含量隨飼料中杜仲葉粉含量的增加整體呈先升高后降低趨勢(P＜0.05; 表 5)。蘇氨酸(Thr)含量在4%和6%添加組顯著高于對照組(P＜0.05);絲氨酸(Ser)含量則在4%杜仲葉粉添加組最高(P＜0.05), 顯著高于對照組(P＜0.05); 組氨酸(His)含量在2%處理組顯著最高(P＜0.05)。各處理組總氨基酸含量、總必需氨基酸占總氨基酸比值、總非必需氨基酸占總氨基酸比值均無顯著性差異(P＞0.05)。

表5 不同杜仲葉粉添加水平對黃河魚肌肉氨基酸組成的影響Tab. 5 Effects of dietary of Eucommia ulmoides leaf powder on muscle amino acid composition of yellow river carpody

黃河鯉肌肉中呈味氨基酸總量、甜味氨基酸總量、苦味氨基酸總量、酸味氨基酸總量及鮮味氨基酸總量在各處理組間無顯著性差異(P＞0.05),但均在4%—6%杜仲葉粉添加組較高(表 6)。

表6 不同杜仲葉粉添加水平對黃河魚肌肉中功能氨基酸含量的影響Tab. 6 Effects of dietary of Eucommia ulmoides leaf powder on function amino acid composition of yellow river carp muscle

將各處理組呈味氨基酸與黃河鯉肌肉中氨基酸總量比較分析發(fā)現(xiàn), 酸味氨基酸與總氨基酸比值在2%添加組顯著高于其他處理組, 藥效氨基酸與總氨基酸的比值則在2%添加組最低, 顯著低于其他處理組(P＜0.05), 以6%添加組最高(表 7)。

表7 不同杜仲葉粉添加水平對黃河鯉肌肉中各功能氨基酸含量占肌肉總氨基酸百分比的影響Tab. 7 Effects of dietary of Eucommia ulmoides leaf powder on the rate of function amino acid to total amino acid of yellow river carp muscle

2.4 飼料中添加杜仲葉粉對黃河鯉血漿生理指標(biāo)的影響

由表 8可知, 在飼料中添加杜仲葉粉顯著影響黃河鯉血漿GSH-PX、SOD、ACP、AKP的活性和MDA含量(P＜0.05)。血漿GSH-PX、MDA和AKP隨飼料中杜仲葉粉含量的添加整體呈先升高后降低的趨勢, GSH-PX活性和MDA含量均在6%處理組顯著最高(P＜0.05)。ACP活性在8%添加組最高(P＜0.05), 顯著高于其他處理組(P＜0.05)。AKP活性在4%處理組顯著最高(P＜0.05), SOD活性則隨飼料中杜仲葉粉含量增加顯著, 以2%處理組顯著最低(P＜0.05), 至8%處理組升至對照水平。

表8 飼料中不同添加水平杜仲葉粉對黃河鯉血漿生理指標(biāo)的影響Tab. 8 Effects of dietary of Eucommia ulmoides leaf powder on plasma physiological indexes of yellow river carp

2.5 飼料中添加杜仲葉粉對黃河鯉肝臟生理指標(biāo)的影響

由表 9可知, 肝臟中GSH-PX、AKP、ACP活性及MDA的含量均隨飼料中杜仲葉粉含量的增加呈先上升后下降的趨勢, 其中GSH-PX活性和MDA含量在4%處理組顯著最高(P＜0.05), ACP活性在4%處理組顯著升至最高后維持在此水平(P＜0.05),AKP活性則在6%處理組顯著最高(P＜0.05)。肝臟SOD含量則隨著杜仲葉粉的添加持續(xù)上升, 至8%處理組升至最高, 顯著高于其他處理組(P＜0.05)。

表9 飼料中杜仲葉粉不同添加水平對黃河鯉肝臟生理指標(biāo)的影響Tab. 9 Effects of dietary of Eucommia ulmoides leaf powder on liver physiological indexes of yellow river carp

3 討論

3.1 飼料中添加杜仲葉粉對黃河鯉生長性能和飼料利用的影響

現(xiàn)有研究表明, 在飼料中添加杜仲葉粉、杜仲提取物或杜仲活性成分等并不都能改善魚類生長性能、降低飼料系數(shù)[6—9,12—15], 如冷向軍等[13]在飼料中添加4%的杜仲葉粉顯著提高規(guī)格為(425.8±37.6) g的草魚(Ctenopharyngodon idellus)增重率、降低飼料系數(shù), 但許曉瑩等[14]在飼料中添加2%的杜仲卻對規(guī)格為(215±0.4) g的草魚生長無顯著影響。飼料中添加20 g/kg的杜仲可顯著提高規(guī)格為(95.1±0.3) g的草魚增重率, 但對規(guī)格為(47.1±0.8) g的草魚生長無顯著促進作用[6,7]。飼料中添加0.5%—4.0%杜仲皮水提物也未能顯著提高虹鱒(Oncorhynchus mykiss)[規(guī)格: (145.56±4.12) g]的生長效率[9]。飼料中添加5和20 g/kg的杜仲葉粉甚至顯著降低大菱鲆(Scophthalmus maximus)的攝食率、終末體重和特定生長率[15]。這種不一致性可能與實驗魚種屬、規(guī)格、杜仲添加濃度及活性成分等直接相關(guān)。已有數(shù)據(jù)表明杜仲不同活性成分引起魚類生長效果差異顯著: 如與綠原酸相比, 杜仲提取物京尼平苷酸和京尼平苷對草魚魚種生長無促進作用[16], 在大鼠(Rattus norvegicus)飼料中添加京尼平苷酸甚至抑制其攝食, 導(dǎo)致體重下降[17]; 即使同一杜仲提取物對同一物種不同規(guī)格的魚類也可能產(chǎn)生不同的生長效果, 如杜仲提取物綠原酸對小規(guī)格草魚(3—40 g)的生長有促進作用[18], 但對較大規(guī)格草魚魚種[(95.1±0.3) g]作用不明顯[6]。與上述文獻報道相比, 本試驗中添加不同含量杜仲葉粉對黃河鯉成魚生長性能及飼料利用均無顯著作用, 推測可能因?qū)嶒烎~種屬、規(guī)格或者不同來源杜仲產(chǎn)品成分差異所致。

3.2 飼料中添加杜仲葉粉對黃河鯉體成分和氨基酸組成的影響

本實驗中添加適量杜仲葉粉可有效降低黃河鯉背肌粗脂肪含量, 提高背肌粗蛋白含量, 這和楊航等[5]、冷向軍等[13]、羅慶華等[19]的實驗結(jié)果相一致。也有研究表明在飼料中添加杜仲葉粉、杜仲皮或其提取物對魚類肌肉常規(guī)營養(yǎng)成分無顯著影響[9,14,20]。在虹鱒飼料中添加杜仲皮水提物顯著提高其肌肉中粗脂肪含量[21]。杜仲葉粉引起機體肌肉常規(guī)營養(yǎng)成分含量變化趨勢不一致的現(xiàn)象在哺乳類中也有報道[22]。這種不一致性可能受實驗動物物種、實驗條件和杜仲活性成分組成等影響, 如Sun等[7]研究發(fā)現(xiàn)綠原酸和京尼平苷可顯著降低草魚[規(guī)格: (47.1±0.6) g]肌肉脂肪含量, 但相同添加濃度(400 mg/kg)的京尼平苷酸卻對草魚肌肉脂肪含量無顯著影響。在規(guī)格為(18.50±0.40) g的草魚實驗中, 肌肉常規(guī)營養(yǎng)成分未受飼料中京尼平苷酸(400 mg/kg)和京尼平苷(400 mg/kg)的影響[5]。攝食不同杜仲提取物的草魚肌肉轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析結(jié)果顯示, 杜仲活性成分顯著影響草魚肌肉代謝通路, 槲皮素處理組、京尼平苷酸處理組和京尼平苷處理組顯著富集的KEGG通路分別為37條、4條和5條,其中槲皮素處理組37條通路中大部分參與肌肉收縮、脂質(zhì)代謝、免疫和抗氧化, 京尼平苷酸處理組的4條通路中有3條與脂質(zhì)代謝相關(guān), 而京尼平苷處理組的5條通路有4條與免疫相關(guān)。哺乳類的研究也表明杜仲葉或者杜仲成分可通過影響機體血液代謝組學(xué)、脂肪和糖類代謝相關(guān)基因mRNA的表達水平影響營養(yǎng)物質(zhì)在生物體內(nèi)的分配[23,24]。在本試驗飼料中添加一定量杜仲葉粉顯著降低黃河鯉肌肉粗脂肪的蓄積, 顯著提高肌肉粗蛋白及全魚魚體粗蛋白和粗脂肪含量, 應(yīng)該是杜仲葉中各活性成分共同作用調(diào)控營養(yǎng)物質(zhì)在黃河鯉體內(nèi)分配的結(jié)果。

氨基酸是維持機體生命機能的重要物質(zhì), 大都因具有酸、甜、苦和鮮等味道決定了食物的風(fēng)味和營養(yǎng)功效, 部分氨基酸如Asp、Glu、Arg、Gly和Met等還因具有特殊功效被稱為藥效氨基酸。肌肉中氨基酸種類、含量和比例等是肉類營養(yǎng)價值評價的重要指標(biāo)和影響肉類風(fēng)味的重要因素。在本研究中, 飼料中添加杜仲葉粉對黃河鯉肌肉中人體必需氨基酸總量、非必需氨基酸總量、總氨基酸含量、甜味氨基酸總量、苦味氨基酸總量、酸味氨基酸總量及藥效氨基酸總量無顯著影響, 但顯著影響黃河鯉肌肉中Thr、Ser、His的含量及酸味氨基酸和藥效氨基酸與黃河鯉肌肉中總氨基酸的比值。黃河鯉肌肉Thr含量在4%—6%杜仲葉粉添加組、Ser含量在2%—4%添加組顯著高于對照組, 說明在飼料中添加一定量的杜仲葉粉可顯著提高肌肉中Thr和Ser的含量。楊航等[5]、Sun等[7]在草魚同樣觀察到杜仲產(chǎn)物促進肌肉中Thr和Ser含量的蓄積。張安青等[9]在虹鱒中也報道了杜仲水提物提高了虹鱒肌肉中Ser和His含量。本試驗中黃河鯉肌肉His含量隨杜仲葉粉添加顯著上升后又顯著下降,說明添加一定量杜仲葉粉對黃河鯉肌肉His沉積有促進作用, 添加量過高則降低黃河鯉肌肉中His的含量, 這與Sun等[7]在草魚中的研究結(jié)果相一致。杜仲產(chǎn)物促進肌肉Ser合成的現(xiàn)象在雞中也有報道[25]。也有文獻報道顯示在飼料中添加杜仲葉粉對肌肉Thr和Ser含量無顯著影響, 如張青紅[8]研究發(fā)現(xiàn)飼料中添加杜仲葉粉對青魚(Mylopharyngodon piceus)肌肉Gly、Asp、Ala和Glu四種呈鮮味氨基酸及Lys、Ile、Val和Met的合成有顯著促進作用, 但對Thr和Ser含量無顯著促進作用。在本試驗中, 黃河鯉肌肉中呈味氨基酸總量和各呈味氨基酸在各處理組間均無顯著差異, 但均以4%—6%添加組略高。酸味氨基酸總量與總氨基酸之比在2%處理組顯著最高, 藥效氨基酸總量與總氨基酸之比隨著杜仲葉粉添加量顯著上升, 說明杜仲葉粉添加對黃河鯉肌肉中呈味氨基酸有一定影響。但不同文獻報道間肌肉氨基酸數(shù)據(jù)受杜仲葉粉影響的差異性提示杜仲或其活性成分對機體肌肉氨基酸沉積的影響需進行更為深入和精準(zhǔn)的研究。

3.3 飼料中添加杜仲葉粉對黃河鯉血液和肝臟生理指標(biāo)的影響

血液是維持生物體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的重要組成部分, 肝臟是生命體物質(zhì)代謝的重要器官, 血液和肝臟生理指標(biāo)可直觀反應(yīng)生物體健康程度。GSHPX和SOD是機體內(nèi)2種重要的抗氧化酶, 是機體抵抗外界應(yīng)激的重要屏障。AKP和ACP作為溶酶體的重要組成部分, 可作用于病原體表面結(jié)構(gòu)進而促進巨噬細胞對病原體的識別和吞噬, 在提高機體免疫力、轉(zhuǎn)移磷酸基團和物質(zhì)消化吸收中發(fā)揮重要作用[26]。MDA是機體脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物,反映機體氧化損傷的程度。本試驗數(shù)據(jù)表明隨飼料中杜仲葉粉含量增加黃河鯉血漿和肝臟中GSHPX和AKP活性均先顯著上升后下降。在飼料中添加一定量的杜仲葉粉可顯著提高血漿和肝臟中ACP活性和SOD活性, 這和張青紅等[8]、張純等[27]、李軍濤等[28]、彭密軍等[29]的研究結(jié)果相一致, 說明在飼料中添加一定含量的杜仲葉粉有助于促進黃河鯉成魚機體抗氧化和非特異性免疫力的提升。

在本試驗中, 黃河鯉血漿和肝臟MDA含量隨杜仲葉粉含量呈先顯著上升后下降, 說明本實驗所用杜仲葉粉可在一定程度上引起魚體脂質(zhì)過氧化反應(yīng), 這和Yang等[20]在草魚中的研究結(jié)果相異, 但和李軍濤等[28]在凡納濱對蝦(Penaeus vannamei)中得到的結(jié)果相一致。Yang等[20]研究發(fā)現(xiàn)杜仲葉和杜仲皮提取物顯著降低草魚機體MDA含量, 李軍濤等[28]研究卻發(fā)現(xiàn)飼料中添加0.1—0.7 g/kg杜仲葉提取物導(dǎo)致凡納濱對蝦血清MDA含量先顯著升高后又降至對照水平, 肝胰腺中MDA含量則在0.7 g/kg處理組顯著高于其他處理組。劉波等[12]的研究也發(fā)現(xiàn)飼料中杜仲添加量過低或者過高均可導(dǎo)致凡納濱對蝦血清MDA含量升高, 這可能和杜仲葉添加水平及其含有的活性成分有關(guān)。杜仲和杜仲葉中含有100多種活性物質(zhì)[30], 其藥效活性成分因采收季節(jié)、產(chǎn)地、生長年限、采收部位和加工貯存方法等而異[31]。劉榮華等[32]對國內(nèi)17個不同產(chǎn)地杜仲葉活性成分測定數(shù)據(jù)表明河南產(chǎn)杜仲葉中京尼平苷酸、桃葉珊瑚苷含量較高, 提示河南產(chǎn)杜仲葉中環(huán)烯醚萜苷類物質(zhì)含量較高。哺乳類中的研究已經(jīng)表明杜仲或其活性成分可致慢性毒性作用[33],杜仲活性成分環(huán)烯醚萜苷類物質(zhì)(京尼平苷、京尼平苷酸等)可能是導(dǎo)致杜仲慢性毒性作用的主要物質(zhì)[34,35]。京尼平苷在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物京尼平可引起HepG2細胞內(nèi)總活性氧水平明顯升高, 且呈顯著濃度依賴效應(yīng)[36]。本實驗所用杜仲葉粉來自河南汝陽縣杜仲種植基地, 可能含有較多環(huán)烯醚萜苷類物質(zhì), 這或許是導(dǎo)致本試驗中黃河鯉血漿和肝臟中MDA含量上升的原因。在本試驗中隨著杜仲葉粉添加量的進一步增加黃河鯉血漿和肝臟MDA含量下降說明此時杜仲葉粉中活性物質(zhì)的抗氧化作用超過了氧化作用, 這可由黃河鯉血漿和肝臟中GSH-PX及SOD含量隨杜仲葉粉添加整體呈上升趨勢證實。

整體而言, 綜合考慮本實驗血液和肝臟生理指標(biāo), 建議黃河鯉成魚飼料中杜仲葉粉的添加量以4%—6%為宜。

致謝:

本實驗所用杜仲葉粉和黃河鯉分別由國家林業(yè)局泡桐研究開發(fā)中心和河南省水產(chǎn)科學(xué)研究院水產(chǎn)養(yǎng)殖與遺傳魚種研究室提供。感謝在實驗魚養(yǎng)殖過程中張言浩、張苗苗、楊奧昆和丁仕萍四位同學(xué)給予的幫助！