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      番茄灰葉斑病人工接種技術(shù)研究及抗病種質(zhì)資源篩選

      2021-12-30 01:28:30張子君孫亞男王濤張逸鳴鄒慶道
      園藝與種苗 2021年11期
      關(guān)鍵詞:葉期葉斑病感病

      張子君,孫亞男,王濤,張逸鳴,鄒慶道

      (遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所,遼寧沈陽 110161)

      番茄灰葉斑病在傳統(tǒng)番茄生產(chǎn)上并不是主要病害,但近20年來由于國外品種的引進(jìn)推廣,番茄灰葉斑病逐漸從次要病害上升為主要病害,并呈現(xiàn)出暴發(fā)流行的趨勢。遼寧省番茄保護(hù)地栽培面積大,栽培環(huán)境長年溫暖潮濕,很適合番茄灰葉斑病發(fā)生。近年來,該病在遼寧地區(qū)發(fā)病日趨嚴(yán)重,對該病的研究也越來越受到科研人員的關(guān)注與重視。選育抗病品種是最經(jīng)濟(jì)有效的防病措施,研究、選擇適宜的抗病性鑒定方法,從而真實地反映材料抗性水平,是抗性資源篩選及抗病品種選育的關(guān)鍵和基礎(chǔ)。該研究對番茄灰葉斑病抗性鑒定方法進(jìn)行了研究,并對抗病資源進(jìn)行了篩選,以期為抗病育種工作的深入開展提供一定指導(dǎo)依據(jù)。

      1 材料與方法

      1.1 材料

      供試番茄材料:LN89、LN163、金棚一號、L-402、多麗、金冠五號、金冠九號、粉太郎5號、佳寶十八、金圓寶抗T y新組合29、金圓寶抗T y新組合35、荷蘭金粉番茄抗T y、倍盈、凱美瑞、瑞菲、齊達(dá)利、粉娘、園藝紅瑪瑙。L N89是由品種桃太郎8號經(jīng)7代自交分離篩選出的穩(wěn)定自交系,LN163是由品種歐貝經(jīng)7代自交分離篩選出的穩(wěn)定自交系,經(jīng)田間觀察和預(yù)備試驗篩選,LN89對番茄灰葉斑病抗性良好,L N163易感番茄灰葉斑??;供試病原菌匍柄霉屬茄匍柄霉(Stemphylium solani Weber)在PDA培養(yǎng)基上擴(kuò)繁,20℃培養(yǎng)10 d;供試番茄和番茄灰葉斑病病原菌材料均由遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所番茄課題組提供。

      1.2 方法

      1.2.1 番茄灰葉斑病人工接種。以抗病材料L N89和感病材料L N163為試材,選取6~7片真葉的番茄幼苗,分別采用噴霧法、涂抹法和菌片貼接法3種方法接種,考察不同接種方法的發(fā)病情況。其中噴霧法和涂抹法病原菌孢子濃度為7×104個/mL,噴霧法用噴壺將孢子懸浮液均勻噴霧于葉片至有水滴滴落,涂抹法用膠頭滴管吸取孢子懸液2 mL均勻涂抹在番茄植株葉片上;菌片貼接法從菌落邊緣打取直徑0.4 cm的菌片,將帶有PDA培養(yǎng)基的菌片粘貼在番茄植株葉片上,每個羽狀葉接1個菌片。接種前1 d營養(yǎng)缽中澆足水,接種后24 h之內(nèi)保持相對濕度100%,24 h后濕度降至60%~80%,溫度控制在(23±2)℃,每天光照12 h。

      采用4葉期、6葉期、8葉期的番茄幼苗,噴霧法接種,病原菌孢子濃度為7×104個/mL,考察不同苗齡接種后的發(fā)病情況。接種后保濕時間、溫度、光照條件同前。

      選取6~7片真葉的番茄幼苗采用噴霧法接種,研究病原菌孢子濃度和保濕時間與發(fā)病的關(guān)系,設(shè)5×104個/mL、7×104個/mL、10×104個/mL共3個孢子濃度梯度,接種后保持相對濕度100%,設(shè)24 h、48 h、72 h、96 h共4個保濕時間梯度,接種后溫度、光照條件同前。以上每個處理接種10株,3次重復(fù),隨機(jī)排列。

      1.2.2 番茄種質(zhì)資源的抗病性鑒定。采用苗期噴霧法進(jìn)行抗病性鑒定,采用6~7葉期的番茄幼苗,病原菌孢子濃度為7×104個/mL,接種后保濕24 h。接種后溫度、光照條件同前,每個處理接種10株,3次重復(fù),隨機(jī)排列。

      1.3 測定方法

      接種7 d后調(diào)查番茄植株發(fā)病情況,病害調(diào)查標(biāo)準(zhǔn)參照Cho等致病力分級方法進(jìn)行分級調(diào)查。番茄灰葉斑病病情分為5級:1級,葉片上無癥狀;2級,有黑色枯死點,占葉面積10%以下;3級,病斑面積占葉片面積的11%~20%;4級,病斑占葉面積21%~50%;5級,病斑占葉面積50%以上。根據(jù)單株病害等級計算病情指數(shù),再根據(jù)病情指數(shù)劃分為不同抗感類型:0≤病情指數(shù)≤15為高抗(HR);15<病情指數(shù)≤30為抗?。≧);30<病情指數(shù)≤50為中抗(M R);50<病情指數(shù)≤70為感?。⊿);70<病情指數(shù)≤100為高感(HS)。

      2 結(jié)果與分析

      2.1 番茄灰葉斑病人工接種技術(shù)研究

      2.1.1 不同接種方法的致病效果。不同接種方法下,抗病材料L N89病情級數(shù)都是0級,沒有發(fā)病,植株正常生長。感病材料L N163的發(fā)病情況以噴霧法發(fā)病最重,全株萎蔫干枯,植株基本停止生長;涂抹法發(fā)病也較重,下部葉片基本已枯萎,上部葉片有大量病斑;菌片貼接法發(fā)病最輕,病斑基本未擴(kuò)展。由表1可知,噴霧法和涂抹法都能有效區(qū)分出抗感材料,抗病材料L N89表現(xiàn)為抗病,感病材料L N163表現(xiàn)為感病,真實地反映出材料的抗性水平;由于菌片貼接法發(fā)病最輕,感病材料L N163葉片只有少量病斑,表現(xiàn)為抗病,沒有真實反映出該材料的感病程度,可見菌片貼接法不是適宜的接種鑒定方法。噴霧法和涂抹法均是適宜番茄灰葉斑病人工接種的方法,但苗期大規(guī)模接種,以噴霧法更為簡便適用。

      表1 不同接種方法番茄幼苗的病情指數(shù)

      2.1.2 不同苗齡番茄幼苗接種的致病效果。從表2可以看出,不同苗齡番茄幼苗接種后發(fā)病差異顯著。4葉期時感病材料L N163發(fā)病較輕,表現(xiàn)為抗病,不能真實反映出材料的抗性水平,不是適宜的接種苗齡。而6葉期和8葉期的番茄幼苗接種后均能有效地區(qū)分出抗感材料,因此,6葉期和8葉期是適宜的番茄幼苗接種苗齡。

      表2 不同苗齡番茄幼苗接種番茄灰葉斑病的病情指數(shù)

      2.1.3 不同接種濃度和保濕時間的致病效果。在相同的保濕時間條件下(表3),孢子濃度越大,感病材料發(fā)病越嚴(yán)重。在相同的孢子濃度下,保濕72 h和保濕96 h,植株葉片脫落嚴(yán)重,影響調(diào)查結(jié)果和后續(xù)植株定植。接種孢子濃度為5×104個/mL,保濕48 h和接種孢子濃度為7×104個/mL,保濕24 h這2個處理都能使植株充分發(fā)病。因此,6~7葉期苗齡的番茄材料適宜接種的孢子濃度和保濕時間是5×104個/mL,48 h或7×104個/mL,24 h。

      表3 不同孢子濃度和保濕時間處理的番茄幼苗的病情指數(shù)

      2.2 番茄主栽品種的抗病性鑒定

      從表4可以看出,多麗、金冠五號和粉太郎5號表現(xiàn)為抗病;金冠九號、佳寶十八、金圓寶抗T y新組合35、荷蘭金粉番茄抗T y和倍盈表現(xiàn)為中抗;金棚一號、L-402、凱美瑞、瑞菲、粉娘和園藝紅瑪瑙表現(xiàn)為感??;金圓寶抗T y新組合29和齊達(dá)利表現(xiàn)為高感。這一結(jié)果與生產(chǎn)實踐中的觀察基本吻合,品質(zhì)粉果番茄對灰葉斑病往往有一定的抗性。

      表4 不同番茄主栽品種的病情指數(shù)

      3 結(jié)論與討論

      噴霧接種法是番茄灰葉斑病人工接種最適宜的方法,6~8葉期為植株的適宜接種時期,適宜接種的孢子濃度和保濕時間分別為5×104個/mL,48 h或7×104個/mL,24 h。對主栽品種采用噴霧接種法進(jìn)行抗病性鑒定,篩選出3個抗病品種多麗、金冠五號和粉太郎5號,5個中抗品種金冠九號、佳寶十八、金圓寶抗T y新組合35、荷蘭金粉番茄抗T y和倍盈,其余主栽品種全部感病。

      當(dāng)前生產(chǎn)上番茄灰葉斑病日趨嚴(yán)重,抗病育種工作勢在必行,而抗病資源的篩選是選育抗病品種的基礎(chǔ)和前提,建立適宜的人工接種技術(shù)體系,真實地反映資源材料的抗性水平,才能夠有效地進(jìn)行抗病資源的篩選。該試驗結(jié)果表明,噴霧法和涂抹法是適宜的灰葉斑病接種方法,兩種方法各有優(yōu)點,噴霧法效率高,可以用于大量材料的接種鑒定;涂抹法效率相對較低,但可以定量接種,從而更精準(zhǔn)地反映材料的抗性水平。關(guān)于接種時期,該試驗結(jié)果認(rèn)為6~8葉期苗齡較為適宜,但考慮到后續(xù)定植,建議選用6葉期番茄幼苗更為適宜。植物的階段抗病性較為復(fù)雜,若成株期與苗期抗性差異較大,建議結(jié)合成株期鑒定,以使結(jié)果更加可靠。接種濃度和保濕時間也是影響接種鑒定結(jié)果的重要因素,該試驗建議適宜的接種濃度和保濕時間是5×104個/mL,48 h或7×104個/mL,24 h。該試驗中主栽品種的抗病性鑒定中,篩選出3份抗病品種、5份中抗品種,這與生產(chǎn)實踐中的觀察結(jié)果基本一致。了解主栽品種對主要病害的抗性水平,選擇適宜當(dāng)?shù)胤N植的番茄品種,可有效降低番茄生產(chǎn)中品種選擇的盲目性,為農(nóng)民增產(chǎn)增收提供保障。

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