基于層次分析法多指標(biāo)優(yōu)選三方益子方的水提工藝

隨家寧，陳海燕，馮婷，李芳嬋*，蔣林，2，3*，黃婉清，農(nóng)麗惠（.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，南寧 530200；2.廣西壯瑤藥工程技術(shù)研究中心，南寧 530200；3.廣西高校中藥制劑共性技術(shù)研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南寧 530200）

三方益子方由三個(gè)古代經(jīng)典名方加減化裁而來，由鹽益智、鹽補(bǔ)骨脂、烏藥、金櫻子、酒覆盆子、酒黃精、枸杞子、桑葚、芡實(shí)、酒蓯蓉和炙甘草11味藥組成，具有暖腎祛寒、溫脾養(yǎng)肝、縮尿止遺的功效。臨床以湯劑應(yīng)用多年，療效明顯，由于復(fù)方成分復(fù)雜，為保證臨床應(yīng)用湯劑能充分發(fā)揮出原有的臨床療效和安全性，將古人的臨床用藥經(jīng)驗(yàn)與現(xiàn)代工藝技術(shù)相結(jié)合[1]，即以水為溶媒提取，確保安全性和臨床療效的一致性[2]。

目前“整體觀思想”是破解中藥質(zhì)控碎片化，突破重圍的重要指導(dǎo)[1]，采用多指標(biāo)成分評(píng)價(jià)提取工藝可滿足本方物質(zhì)基礎(chǔ)的整體性[3]。中藥復(fù)方有“多成分、多靶點(diǎn)”的特點(diǎn)，為遵循復(fù)方制劑“整體”概念，借鑒特征圖譜分析手段，可較好地體現(xiàn)復(fù)方中各類成分與療效的相關(guān)性。得膏率和藥效成分是中藥提取最常用的評(píng)價(jià)指標(biāo)[3]，藥效成分是藥物發(fā)揮臨床療效的物質(zhì)基礎(chǔ)，最大限度地提取藥效成分可保證臨床療效及提高用藥效率[4]。因此選擇特征圖譜、主要藥效成分、得膏率為考察指標(biāo)，確定各項(xiàng)工藝參數(shù)。另外，對(duì)多指標(biāo)合理的綜合評(píng)價(jià)，直接影響著提取工藝參數(shù)的確定，各個(gè)評(píng)價(jià)因素的權(quán)重系數(shù)的確定又是科學(xué)、合理地作出評(píng)價(jià)的基礎(chǔ)[5]，層次分析法（AHP）是一種主觀結(jié)合客觀的評(píng)價(jià)方式，經(jīng)其確定各指標(biāo)的權(quán)重增強(qiáng)了評(píng)價(jià)結(jié)果的合理性和科學(xué)性。

故本研究在傳統(tǒng)水提取的基礎(chǔ)上，對(duì)三方益子方有效組分進(jìn)行提取工藝優(yōu)選并驗(yàn)證，得到最佳提取工藝參數(shù)，為處方的制劑工藝奠定基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器

高效液相色譜儀（安捷倫科技有限公司，型號(hào)：Anglient 1260 Ⅱ）；超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司，型號(hào)：KQ-500E）；SQP分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司）；超純水儀一體機(jī)（廣西南寧市博美生物科技有限公司，型號(hào)：Direct-Q5UV）；真空干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)：DZF-6090）。

1.2 試藥

鹽益智（Alpinia oxyphyllaMiq.）、鹽補(bǔ)骨脂（Psoralea corylifoliaL.）、烏藥（Lindera aggregata（Sims）kosterm.）、酒 黃 精（Polygonatum sibiricμmRed.）、酒覆盆子（Rubus chingiiHuu）、金櫻子（Rosa LaevigataMichx.）、枸杞子（Lycium barbarumL.）、桑葚（MorusalbaL .）、芡實(shí)（Euryale feroxSalisb.）、酒蓯蓉（C.tubulosa（Schenk）Wight）、炙甘草（Glycyrrhiza uralensisFisch）均購(gòu)自南寧市華泰中藥飲片有限責(zé)任公司，均由廣西中醫(yī)藥大學(xué)朱意麟老師鑒定為正品；原兒茶酸（批號(hào)：RP190605，純度≥99.99%）、補(bǔ)骨脂素（批號(hào)：RP190515，純度≥99.99%）、異補(bǔ)骨脂素（批號(hào)：RP190423，純度≥99.95%）、甘草酸（批號(hào)：RP190517，純度≥99.34%）（成都麥德生科技有限公司）；乙腈（色譜級(jí)，美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）；磷酸（分析純，成都金山化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20190606）；甲醇（分析純，成都市科隆化學(xué)品有限公司，批號(hào)：2020102902）。

2 方法與結(jié)果

2.1 水提濃縮液樣品的制備

按照處方比例的5倍量稱取處方藥材，按8倍、6倍、6倍加水量，2 h、1 h、1 h的提取時(shí)間，提取3次，合并藥液，濃縮至500 mL，置于4℃冰箱保存，備用。

2.2 特征圖譜研究

2.2.1 色譜條件 采用Agilent 5 TC-C18（2）（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱；以乙腈（B）-0.2%磷酸（A）為流動(dòng)相；梯度洗脫（0～5 min：5%～7%B；5～12 min：7%～15%B；12～26 min：15%～40%B；26～35 min：40%～50%B；35～45 min：50%～85%B；45～60 min：85%B），流 速1.0 mL·min－1，柱 溫30℃；進(jìn)樣量10 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)（0～18.5 min：260 nm；18.5～21 min：300 nm；21～30 min：350 nm；30～60 min：252 nm）。

2.2.2 供試品溶液的制備 取“2.1”項(xiàng)下樣品5 mL于蒸發(fā)皿中，揮干，精密加入25 mL甲醇轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，稱定重量，超聲30 min，待冷卻后，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減少的重量，即得。

2.2.3 各單味藥溶液的制備 按處方比例稱取各單味藥，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制得各單味藥材供試品溶液。

2.2.4 特征圖譜的建立及相似度評(píng)價(jià) 按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備10批次供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，記錄圖譜。將10個(gè)圖譜導(dǎo)入“中藥色譜特征圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)”（2012年版），以S1為參照?qǐng)D譜，時(shí)間窗寬度為0.1 s，通過多點(diǎn)校正后，采用中位數(shù)相關(guān)系數(shù)法進(jìn)行圖譜自動(dòng)匹配，生成10批次樣品共有模式圖譜，確定了19個(gè)共有峰，并建立對(duì)照?qǐng)D譜（R），結(jié)果見圖1，計(jì)算相似度，結(jié)果見表1。10批三方益子方的相似度均在0.982以上，表明不同批次間樣品相似度良好。

表1 相似度評(píng)價(jià)結(jié)果(n＝10) Tab 1 Similarity evaluation (n＝10)

圖1 10批樣品HPLC色譜疊加圖Fig 1 HPLC chromatogram stacking of 10 batches of samples

2.2.5 共有峰的分析 通過對(duì)10批樣品圖譜進(jìn)行分析，共標(biāo)定出19個(gè)共有峰，選擇峰面積較大、保留時(shí)間居中且穩(wěn)定性好的15號(hào)峰（補(bǔ)骨脂素）為參照峰，分別計(jì)算10批樣品共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，見表2和表3，表明不同批次間制備的三方益子方相應(yīng)色譜峰的峰面積存在差異。

表2 10批供試品19個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間結(jié)果(n＝10) Tab 2 Relative retention time of 19 common peaks of 10 batches of test samples (n＝10)

表3 10批供試品19個(gè)共有峰相對(duì)峰面積結(jié)果(n＝10) Tab 3 Relative peak area of 19 common peaks of 10 batches of samples (n＝10)

2.2.6 共有峰的歸屬及指認(rèn) 將供試品溶液和處方中各單味藥溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄圖譜，見圖2。與對(duì)照?qǐng)D譜進(jìn)行比較，其中鹽益智含有3、4、5號(hào)峰，補(bǔ)骨脂中含有8、9、15、16、18、19號(hào)峰，烏藥中含有2、6號(hào)峰，金櫻子中含有2、5、11號(hào)峰，覆盆子中含有2、11號(hào)峰，黃精中含有1、3、4號(hào)峰，枸杞子中含有1、3、4號(hào)峰，肉蓯蓉中含有2、3、4、7、11、12號(hào)峰，芡實(shí)中含有2號(hào)峰，桑葚中含有2、3、4、5號(hào)峰，甘草中含有3、10、11、14、17號(hào)峰。并且用對(duì)照品比對(duì)出，3號(hào)峰屬于5-羥甲基糠醛，5號(hào)峰屬于原兒茶酸，7號(hào)峰屬于松果菊苷，15號(hào)峰屬于補(bǔ)骨脂素，16號(hào)峰屬于異補(bǔ)骨脂素，17號(hào)峰屬于甘草酸。

圖2 共有峰的指認(rèn)圖Fig 2 Identification of common peaks

2.2.7 特征圖譜方法學(xué)考察

① 精密度：取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液1份，連續(xù)進(jìn)樣6針，結(jié)果19個(gè)峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD值均分別在0.010%～0.18%和0.10%～1.9%，證明儀器精密度良好。

② 重復(fù)性：按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份，進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果19個(gè)共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD值分別為0.010%～0.50%和0.57%～2.8%，表明方法重復(fù)性良好。

③ 穩(wěn)定性：取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液1份，于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣，結(jié)果19個(gè)共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD值分別為0.030%～0.44%和0.28%～2.8%，表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3 三方益子方中4種成分含量測(cè)定

2.3.1 對(duì)照品溶液的制備 取原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素和甘草酸對(duì)照品適量，精密稱定，分別用甲醇溶解于10 mL量瓶并定容，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0.422、0.406、0.969和0.965 mg·mL－1的原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、甘草酸的對(duì)照品溶液。

2.3.2 樣品及陰性樣品溶液的制備 供試品溶液制備同“2.2.2”項(xiàng)下方法。按處方比例分別稱取除鹽益智、金櫻子、桑葚、枸杞子外的藥材，按“2.1”和“2.2.2”項(xiàng)下方法制備陰性樣品溶液①。

2.3.3 缺補(bǔ)骨脂陰性樣品溶液的制備 按處方比例分別稱取除補(bǔ)骨脂外的藥材，按“2.1”和“2.2.2”項(xiàng)下方法制備陰性樣品溶液②。

2.3.4 缺炙甘草陰性樣品溶液的制備 按處方比例分別稱取除炙甘草外的藥材，按“2.1”和“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備陰性樣品溶液③。

2.3.5 專屬性試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，結(jié)果見圖3。顯示原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素和甘草酸4個(gè)成分的色譜峰保留時(shí)間與樣品中相應(yīng)的色譜峰保留時(shí)間一致，各個(gè)峰分離度、對(duì)稱性較好，各陰性樣品對(duì)成分測(cè)定無影響，色譜柱理論塔板數(shù)以不低于20 000為準(zhǔn)。

圖3 三方益子方提取工藝專屬性試驗(yàn)結(jié)果Fig 3 Specificity test of the extraction process of Sanfang Yizi prescription

2.3.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密量取“2.3.1”項(xiàng)下各對(duì)照品溶液適量，于5 mL量瓶中，甲醇溶解并定容至刻度線，制成含原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素和甘草酸質(zhì)量濃度為0.041、0.0715、0.0969和0.11 mg·mL－1的 混 合 對(duì) 照品溶液，分別稀釋成系列濃度線性溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄各個(gè)指標(biāo)成分的峰面積，分別以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（μg，X）為橫坐標(biāo)，得原兒茶酸線性回歸方 程 為Y＝2.906×103X＋4.230，R＝1.000；補(bǔ)骨脂素為Y＝4.844×103X＋16.58，R＝1.000；異補(bǔ)骨脂素為Y＝6.073×103X＋29.92，R＝1.000；甘草酸為Y＝783.9X＋2.840，R＝1.000。結(jié)果表明原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、甘草酸分別在0.082～0.410 μg、0.143～0.715 μg、0.194～0.969 μg、0.22～1.10 μg內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.3.7 方法學(xué)考察

① 精密度考察：精密吸取“2.3.6”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液10 μL，進(jìn)樣測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素和甘草酸的平均峰面積RSD值分別為0.80%、0.60%、0.60%和0.61%，表明儀器精密度良好。

② 穩(wěn)定性考察：按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素和甘草酸的平均峰面積RSD值分別為0.64%、0.73%、0.49%和0.33%，表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。 ③ 重復(fù)性考察：按“2.2.2”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液6份，進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素和甘草酸的平均峰面積RSD值分別為2.3%、1.9%、1.9%和2.8%，表明方法重復(fù)性良好。

④ 加樣回收率：精密吸取“2.1”項(xiàng)下樣品2.5 mL，共6份，分別精密加入新配制的質(zhì)量濃度為0.95、1.049、1.057、0.53 mg·mL－1的原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、甘草酸對(duì)照品溶液適量，平行制備供試品溶液6份，進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素和甘草酸的平均加樣回收率分別為100.58%、102.73%、98.83%和101.78%，RSD值 分 別 為1.4%、1.6%、2.0%和1.4%。

2.4 正交試驗(yàn)優(yōu)化三方益子方最佳提取工藝

2.4.1 綜合評(píng)分計(jì)算公式[6-7]

其中，A為特征圖譜峰面積和，A＝A1＋A2＋……＋A19；B為原兒茶酸；C為補(bǔ)骨脂素；D為異補(bǔ)骨脂素；E為甘草酸；F為得膏率；Wi為指標(biāo)權(quán)重系數(shù)。

其中，m為干膏重，M為藥材重。

其中，i為指標(biāo)，αi為指標(biāo)評(píng)分?jǐn)?shù)，m為受檢驗(yàn)?zāi)繕?biāo)層次數(shù)。

其中，CR為一致性比例因子；RI為一致性指標(biāo)，具體參照表4。

表4 平均隨機(jī)一致性指標(biāo)RI值 Tab 4 Average random consistency index RI value

2.4.2 指標(biāo)權(quán)重的確定[9]根據(jù)三方益子復(fù)方中藥味的君臣佐使配伍規(guī)律、各成分藥理作用強(qiáng)弱以及有效成分所歸屬的藥味多少，本研究將特征圖譜峰面積總和，原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、甘草酸峰面積和得膏率作為權(quán)重指標(biāo)予以量化，即將6項(xiàng)指標(biāo)分成5個(gè)層次，各層次評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見表5，并確定優(yōu)先順序：特征圖譜峰面積總和＞原兒茶酸＞補(bǔ)骨脂素＝異補(bǔ)骨脂素＞甘草酸＞得膏率，構(gòu)建優(yōu)先判斷矩陣，見表6。

表5 各層次評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) Tab 5 Grading criteria for each level

表6 指標(biāo)成對(duì)比較判斷優(yōu)先矩陣 Tab 6 Pairwise comparison judgment priority matrix of indicators

按照“2.4.1”項(xiàng)下綜合評(píng)分計(jì)算公式得出特征圖譜峰面積總和，原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、甘草酸和得膏率的權(quán)重系數(shù)分別為0.3939、0.2372、0.1346、0.1346、0.0655、0.0343，一致性比例因子（CR）＝0.016 47＜0.10，指標(biāo)優(yōu)先比較判斷矩陣具有滿意的一致性，求得的權(quán)重系數(shù)有效。

2.4.3 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果 在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇影響因素為提取時(shí)間（A，2 h、2.5 h、3 h）、料液比（B，1∶12、1∶14、1∶16）、提取次數(shù)（C，1、2、3次），L9（34）為正交表進(jìn)行正交試驗(yàn)，以特征圖譜峰面積總和，原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、甘草酸的峰面積，以及得膏率的綜合評(píng)分為評(píng)價(jià)指標(biāo)，根據(jù)“2.4.1”項(xiàng)下方法計(jì)算綜合總評(píng)分，并進(jìn)行直觀分析與方差分析。因素與水平見表7，正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)直觀分析結(jié)果見表8，方差分析結(jié)果見表9。

表7 因素與水平表 Tab 7 Factor and level

表8 三方益子方提取正交試驗(yàn)直觀分析結(jié)果(n＝2) Tab 8 Visual analysis of orthogonal experiment of Sanfang Yizi prescription (n＝2)

表9 三方益子方正交試驗(yàn)的方差分析結(jié)果 Tab 9 ANOVA of Sanfang Yizi prescription of orthogonal test

直觀分析結(jié)果示3個(gè)因素的主次關(guān)系為B＞C＞A，方差分析結(jié)果表明B、C因素對(duì)綜合評(píng)分結(jié)果均具有顯著影響，A不顯著，正交試驗(yàn)結(jié)果表明最佳工藝為A3B2C3，即加14倍水，提取3次，每次3 h，但結(jié)合生產(chǎn)成本、經(jīng)濟(jì)效益等因素，即最佳提取工藝為加14倍水，提取3次，每次2 h。

2.4.4 正交試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果 按照最佳提取工藝提取3批藥，根據(jù)建立的含量測(cè)定方法和特征圖譜方法，進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算綜合評(píng)分，結(jié)果表明工藝穩(wěn)定，重復(fù)性好，可作為該方的水提工藝（見表10）。

表10 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果 Tab 10 Verification test

3 總結(jié)與討論

質(zhì)量標(biāo)志物基于有效、特有、傳遞與溯源、可測(cè)和處方配伍的“五要素”為核心，既反映了與有效性（和安全性）的關(guān)聯(lián)關(guān)系，又體現(xiàn)中藥成分的專屬性、差異性特征，特別是基于方-證對(duì)應(yīng)的配伍環(huán)境，使質(zhì)量研究回歸到中醫(yī)藥理論，體現(xiàn)針對(duì)疾病的中藥有效性表達(dá)方式及其物質(zhì)基礎(chǔ)的客觀實(shí)質(zhì)[10]。中藥特征圖譜現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用于整體反映中藥成分復(fù)雜性的研究中，可對(duì)某些特征成分進(jìn)行指認(rèn)及分析，是中藥的有效質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)方法[11]。三方益子復(fù)方成分繁多復(fù)雜，采用單一指標(biāo)考察工藝，一味追求個(gè)別成分含量最大，使得結(jié)果太過片面，應(yīng)全面綜合權(quán)衡，與現(xiàn)代技術(shù)特征圖譜等結(jié)合，盡可能覆蓋君臣佐使藥材中的有效成分來反映中藥復(fù)方的有效成分群體，嘗試用未知的結(jié)構(gòu)成分的模糊數(shù)據(jù)（特征色譜峰的總面積之和）相結(jié)合的方法，進(jìn)行多指標(biāo)的綜合評(píng)定[12]。

三方益子方中質(zhì)量標(biāo)志物基于“君”藥首選原則，兼顧“臣”“佐”“使”藥的有效成分來篩選，君藥鹽益智中原兒茶酸可通過抗氧化應(yīng)激作用抗氧化應(yīng)激保肝[13]，尚可改善老年大鼠的認(rèn)知能力，具神經(jīng)保護(hù)功能[14]，且本方中臣藥金櫻子，佐藥桑葚、枸杞子中亦含原兒茶酸成分。君藥補(bǔ)骨脂中補(bǔ)骨脂素可改善腎虛的癥狀，提升老年人的記憶力和認(rèn)知能力[15]，保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞，預(yù)防阿爾茨海默病的發(fā)生[16]，補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素均可抑制小鼠前列腺增生，改善夜尿增多的癥狀[17]，也是治療老年人易患疾病骨質(zhì)疏松癥的活性成分[18]。佐藥炙甘草中甘草酸成分被用作炙甘草配方顆粒的評(píng)價(jià)指標(biāo)，具有很好的改善肝臟功能的作用[19]，對(duì)各種慢性腎臟疾病具有一定的療效，保護(hù)藥物性腎臟損傷[20]，也能夠促進(jìn)腦功能恢復(fù)，提升老年人的記憶力和認(rèn)知能力，降低阿爾茨海默病的發(fā)生[21]，尚可提高機(jī)體免疫力[22]。 多指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)的方式已成為復(fù)方制劑優(yōu)選提取工藝的重要手段，AHP是一種將評(píng)價(jià)指標(biāo)定性與定量相結(jié)合的決策分析方法，不僅考慮了主觀意識(shí)對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)的重視程度，又考慮了各項(xiàng)指標(biāo)原始數(shù)據(jù)之間的相互聯(lián)系及影響，增強(qiáng)了總體評(píng)價(jià)結(jié)果的科學(xué)性及合理性[6]。本研究采用HPLC建立三方益子水提液特征圖譜，標(biāo)定涵蓋了11味藥材的19個(gè)共有峰，建立了原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、甘草酸含量測(cè)定方法，選用共有峰總面積，原兒茶酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、甘草酸和得膏率作為指標(biāo)進(jìn)行考察，避免了以單一指標(biāo)的局限性，與中藥復(fù)方的多組成、多靶點(diǎn)作用特點(diǎn)相吻合[9]。