任江珊，顧雪琪，蒲婭，黃河

（北京林業(yè)大學(xué)園林學(xué)院，北京 100083）

國內(nèi)外對菊花進(jìn)行組織培養(yǎng)研究，主要體現(xiàn)在以菊花莖段、腋芽作為外植體[6]，后又發(fā)展出以莖間薄層、葉盤、葉柄、花瓣等組織作為外植體。與其他組織相比，花瓣外植體具有再生芽發(fā)生率高，且平均每外植體再生芽數(shù)多等優(yōu)勢[7]。本研究以葫蘆島野菊舌狀花為外植體，以MS 為基本培養(yǎng)基，設(shè)計9 種添加不同濃度6-BA 和NAA 組合的培養(yǎng)基，探究不同激素濃度對葫蘆島野菊再生的影響；以1/2MS 為基本培養(yǎng)基，附加激素NAA，設(shè)計4 種培養(yǎng)基配方，探究NAA 對葫蘆島野菊舌狀花再生芽生根的影響，從而建立葫蘆島野菊高效再生體系。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

前期通過野外收集和擴繁獲得葫蘆島野菊，保存于北京林業(yè)大學(xué)試驗室。用于組培和煉苗的組培室和氣候箱環(huán)境為，溫度25±1℃、日光燈光源、光照強度2000Lx、光周期16h、光照8h。

1.2 試驗方法

1.2.1 無菌外植體材料的獲得。外植體用洗滌劑流水沖洗0.5～1.0h，75%酒精消毒處理30s，無菌水沖洗1 次3min，再用1%NaClO 消毒處理3min，無菌水沖洗4～5次，每次3min。

1.2.2 不定芽的誘導(dǎo)。以MS 培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，將外植體分別接種在不同濃度的6-BA（1.0、2.0、3.0mg/L）和NAA（0.5、1.0、2.0mg/L）9 種濃度組合MS 培養(yǎng)基上。在25℃、光照強度2000Lx 下培養(yǎng)，20d 時統(tǒng)計愈傷組織誘導(dǎo)率（出愈率），35d 時統(tǒng)計再生芽分化率和繁殖系數(shù)。

1.2.3 生根培養(yǎng)及煉苗。待再生芽長至2～3cm 時，將其轉(zhuǎn)移到不同NAA（0、0.2、0.5、1mg/L）配比的1/2MS 培養(yǎng)基中，分別于25d 和40d 后統(tǒng)計其生根情況。當(dāng)試管苗具有4～5 片葉，5～6 條粗壯根時，取出試管苗，用清水洗凈瓊脂，移栽至已消毒的基質(zhì)中（泥炭∶蛭石∶珍珠巖=1∶1∶1）。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基對不定芽誘導(dǎo)的影響

以葫蘆島野菊舌狀花為外植體，經(jīng)過對不同培養(yǎng)基配方中愈傷組織誘導(dǎo)和分化再生的差異統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，當(dāng)培養(yǎng)基6-BA 為2.0mg/L、NAA 為2.0mg/L 時，愈傷組織誘導(dǎo)率（100%）和再生芽分化率（65.60%）最高；在一定范圍內(nèi)，當(dāng)6-BA/NAA 比值較低時，花瓣外植體愈傷組織誘導(dǎo)率較高，再生芽分化率稍低；當(dāng)6-BA/NAA 比值較高時，再生芽分化率較高，愈傷組織誘導(dǎo)率稍低；當(dāng)6-BA和NAA 濃度均較高時，愈傷組織誘導(dǎo)率和再生芽分化率都會顯著下降，隨著激素濃度的升高，平均誘導(dǎo)芽數(shù)有增多的趨勢。確定葫蘆島野菊花瓣外植體再生的最佳培養(yǎng)基配方為：MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 2.0mg/L。

圖1 葫蘆島野菊花瓣再生體系的建立

表1 不同培養(yǎng)基配方中愈傷組織誘導(dǎo)和分化再生的差異

表2 不同NAA 濃度對再生苗生根的影響

2.2 不同培養(yǎng)基對生根誘導(dǎo)的影響

約15d 后再生芽開始生根，根據(jù)統(tǒng)計結(jié)果發(fā)現(xiàn)，4種培養(yǎng)基均可誘導(dǎo)生根。當(dāng)NAA 濃度為0.2mg/L 時，促進(jìn)生根效果最顯著，再生植株生根較快。25d 時生根率已達(dá)到68.97%，40d 時生根率為100%，平均根長4.0cm，且發(fā)根條數(shù)多、新根較粗壯，黃白色，須根較多，可作為葫蘆島野菊舌狀花再生的最佳生根培養(yǎng)基。

圖2 葫蘆島野菊再生苗生根情況

2.3 移栽成活情況

將試管苗移栽至已消毒的基質(zhì)中，經(jīng)統(tǒng)計，移栽成活率達(dá)100%，幼苗生長狀態(tài)良好。

3 結(jié)論與討論

3.1 結(jié)論

以葫蘆島野菊為試驗材料，以舌狀花為外植體，建立葫蘆島野菊高效再生體系。結(jié)果表明，葫蘆島野菊舌狀花外植體最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為：MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 2.0mg/L，最佳生根培養(yǎng)基配方為：1/2MS+NAA 0.2mg/L。

3.2 討論

野生菊屬植物是栽培菊花起源和進(jìn)化中的重要親本，因而對野菊屬植物高效再生體系的建立和菊花起源研究具有重要意義。我國自20 世紀(jì)80 年代開始研究建立菊花花瓣再生體系[8]，以舌狀花作為外植體，篩選出誘導(dǎo)愈傷組織、愈傷組織分化、試管苗生根最佳培養(yǎng)基配方，并探究和分析影響花瓣組織培養(yǎng)高效再生體系建立的因素。本試驗觀察發(fā)現(xiàn)，6-BA 和NAA 這2 種激素的配比，是影響舌狀花外植體出愈和再生的重要因素；在一定范圍內(nèi)，當(dāng)6-BA/NAA 比值較低時，舌狀花外植體的愈傷組織誘導(dǎo)率較高，再生芽分化率稍低；當(dāng)6-BA/NAA 比值較高時，再生芽分化率較高，愈傷組織誘導(dǎo)率稍低，這與司懷軍、魏曼曼等[9-10]試驗結(jié)果一致。但本試驗中，當(dāng)6-BA 和NAA 濃度均較高時，愈傷組織誘導(dǎo)率和再生芽分化率都會顯著下降，李辛雷等[11]也證明了生長素或細(xì)胞分裂素濃度過高時，會引起愈傷組織褐化壞死。