劉 鴿

新疆維吾爾自治區(qū)畜牧總站，新疆烏魯木齊 830000

0 引言

檢測(cè)奶牛乳房炎的常用方法有蘭州乳房炎檢測(cè)（LMT）法、pH值法、乳樣體細(xì)胞數(shù)（SCC）法等。SCC是指每毫升生乳中所含體細(xì)胞的數(shù)量，主要包括淋巴細(xì)胞、嗜中性白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、噬酸性細(xì)胞和乳腺上皮細(xì)胞，常作為反映奶牛乳腺健康程度的一項(xiàng)非常重要的指標(biāo)[1～4]，對(duì)診斷奶牛乳房炎具有十分重要的意義[5，6]。Melchior M B，郭慶等[7，8]發(fā)現(xiàn)，當(dāng)生乳中SCC高于3×106個(gè)/mL時(shí)會(huì)嚴(yán)重影響乳品質(zhì)；SCC過高還會(huì)抑制乳酸菌的繁殖，嚴(yán)重影響酸奶的生產(chǎn)，破壞酸奶的風(fēng)味。

奶牛乳房炎在世界各地普遍存在，我國各牛場(chǎng)乳房炎的患病率一般在20.00%～70.00%，其中隱性乳房炎的患病率在60.00%～80.00%，而臨床型乳房炎的患病率在10.00%～50.00%[9～11]，嚴(yán)重影響我國奶業(yè)的發(fā)展。本試驗(yàn)采用LMT法和SCC法檢測(cè)奶牛隱性乳房炎；通過臨床觀察，對(duì)有臨床型乳房炎典型癥狀的奶牛進(jìn)行采樣，同時(shí)使用LMT法和SCC法進(jìn)行確診，避免誤判。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來源

2016年，對(duì)新疆石河子地區(qū)某規(guī)?；膛?chǎng)的712 頭澳系荷斯坦泌乳牛進(jìn)行臨床觀察，挑選出具有臨床型乳房炎典型癥狀的奶牛，從每頭奶牛的每個(gè)乳區(qū)各采集乳樣100.0 mL。從未表現(xiàn)出臨床型乳房炎典型癥狀的剩余奶牛中隨機(jī)挑選180 頭奶牛進(jìn)行采樣，每頭奶牛的每個(gè)乳區(qū)各采集乳樣100.0 mL。

1.1.2 材料與儀器設(shè)備

0.50%碘伏溶液；蒸餾水；75.00%酒精；蘭州獸醫(yī)研究所乳房炎診斷試劑（LMT,蘭州獸醫(yī)研究所藥廠生產(chǎn)）；奶牛乳房炎診斷試劑盤；保溫箱；棉織毛巾；100.0 mL乳樣采集管（高壓滅菌）；1.5 mL EP管（高壓滅菌）；蒸餾水瓶；酒精噴壺；乳膠手套；乳樣體細(xì)胞數(shù)檢測(cè)儀（Comb i Scope FTIR 300 HP）。

1.2 方法

1.2.1 樣品采集及檢測(cè)

現(xiàn)場(chǎng)采樣：先用40 ℃左右的熱毛巾擦拭待取樣奶牛的乳房和乳頭（保持棉織毛巾的潔凈，1 頭牛換洗1 次毛巾），用0.50%碘伏溶液對(duì)待取樣乳頭消毒45 s左右，用75.00%的酒精擦拭乳頭。擠掉每個(gè)乳區(qū)的前3 把奶，將乳樣采集管置于乳頭正下方，將100.0 mL乳樣擠入收集管中，防止糞污污染。將采集的乳樣做好標(biāo)記（牛號(hào)、乳區(qū)、采樣時(shí)間），保存于內(nèi)置冰袋的保溫箱中，盡快送檢。每個(gè)乳樣取1.0 mL置于1.5 mL 的滅菌EP管中，4 ℃暫存，用于后續(xù)分菌試驗(yàn)。

LMT檢測(cè)：將2.0 mL待檢乳樣倒入檢測(cè)盤的檢測(cè)杯內(nèi)，再加入2.0 mL稀釋好的LMT，水平同心圓搖動(dòng)30 s，使乳樣和LMT充分混合。記錄測(cè)試結(jié)果。

SCC檢測(cè)：經(jīng)LMT檢測(cè)后，取40.0 mL乳樣倒入奶牛乳樣體細(xì)胞檢測(cè)管中（帶防腐劑顆粒），防腐劑顆粒溶解后，將待檢乳樣搖勻，待顏色變成淺粉紅色，進(jìn)行SCC檢測(cè)。

1.2.2 結(jié)果判定

LMT檢測(cè)結(jié)果判定：根據(jù)LMT的使用說明進(jìn)行：將待檢乳樣與LMT診斷試劑混合，充分搖勻。根據(jù)凝集物的狀態(tài)進(jìn)行判定，觀察時(shí)要傾斜檢測(cè)盤。

SCC檢測(cè)結(jié)果判定：根據(jù)國際奶牛聯(lián)合會(huì)測(cè)SCC的方法判定奶牛乳房炎的規(guī)定[12～14]進(jìn)行判定。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)分析

使用SPSS軟件和Excel軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，統(tǒng)計(jì)奶牛乳房炎患病率，并分析待檢奶牛的年齡、胎次、乳區(qū)與乳房炎患病率的關(guān)系。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 臨床型奶牛乳房炎的患病率

本試驗(yàn)對(duì)712 頭奶牛進(jìn)行乳房炎患病率調(diào)查，發(fā)現(xiàn)40 頭奶?；寂R床型乳房炎，占5.62%。為避免肉眼觀察造成的失誤，將這40 頭奶牛的72 個(gè)乳區(qū)（160 個(gè)乳區(qū)中有15 個(gè)瞎乳頭，剩余的145 個(gè)乳區(qū)中有72 個(gè)呈現(xiàn)臨床型乳房炎典型癥狀）的乳樣分別進(jìn)行LMT法和SCC法檢測(cè)，結(jié)果均為乳房炎，具有臨床型乳房炎典型癥狀的奶牛瞎乳頭率為9.38%（表1）。

表1 奶牛臨床型乳房炎患病率

2.2 隱性乳房炎的患病率

從剩余的未表現(xiàn)出臨床乳房炎癥狀的672 頭奶牛中隨機(jī)選出180 頭分別進(jìn)行LMT法和SCC法檢測(cè)。經(jīng)LMT法診斷發(fā)現(xiàn)，180 頭奶牛中56 頭患隱性乳房炎，患病率為31.11%；682 個(gè)乳區(qū)（720 個(gè)乳區(qū)中有38 個(gè)瞎乳頭）中有150 個(gè)患隱性乳房炎，乳區(qū)患病率為21.99%（表2）。使用SCC法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，180 頭奶牛中有60 頭患隱性乳房炎，患病率為33.33%；682 個(gè)乳區(qū)中有132 個(gè)患隱性乳房炎，乳區(qū)患病率為19.35%（表2）。

表2 使用LMT和SCC法進(jìn)行隱性乳房炎檢測(cè)的結(jié)果

2.3 不同乳區(qū)奶牛隱性乳房炎的患病率

180 頭奶牛的682 個(gè)乳區(qū)，其中左前、右前、左后、右后被檢乳區(qū)數(shù)依次為160 個(gè)、166 個(gè)、177個(gè)、179 個(gè)。使用LMT法檢測(cè)：患隱性乳房炎乳區(qū)數(shù)依次為34 個(gè)、36 個(gè)、39 個(gè)、41 個(gè)，患病乳區(qū)率依次為21.25%、21.69%、22.03%、22.91%。使用SCC法檢測(cè)：患隱性乳房炎乳區(qū)數(shù)依次為28 個(gè)、31 個(gè)、34 個(gè)、39 個(gè)，患病乳區(qū)率依次為17.50%、18.67%、19.21%、21.79%（表3）。綜上，各乳區(qū)患病率差異不顯著（P＞0.05）。

其中，瞎乳頭數(shù)依次為6 個(gè)、8 個(gè)、10 個(gè)、14個(gè)，瞎乳頭率依次為3.33%、4.44%、5.55%、7.77%（表3）。

表3 使用LMT法和SCC法對(duì)奶牛不同乳區(qū)的檢測(cè)結(jié)果

2.4 不同年齡奶牛隱性乳房炎的患病率

統(tǒng)計(jì)180 頭試驗(yàn)?zāi)膛＃?～3歲、4～5歲、6歲及以上的奶牛頭數(shù)依次為72 頭、63 頭、45 頭。使用LMT法對(duì)試驗(yàn)?zāi)膛＿M(jìn)行診斷：共檢出56頭患隱性乳房炎奶牛，患病率為31.11%，其中2～3歲、4～5歲、6歲及以上的奶牛隱性乳房炎患病數(shù)依次為19頭、18 頭、19 頭，患病率依次為26.39%、28.57%、42.22%（表4）。使用SCC法對(duì)試驗(yàn)?zāi)膛＿M(jìn)行診斷：共檢出60 頭患隱性乳房炎奶牛，患病率為33.33%，其中2～3歲、4～5歲、6歲及以上的奶牛隱性乳房炎患病數(shù)依次為21 頭、19 頭、20 頭，患病率依次為29.17%、30.16%、44.44%（表4）。綜上，6歲及以上奶牛的隱性乳房炎患病率與2～3歲、4～5歲的患病率相比差異顯著（P＜0.05）。

表4 使用LMT法和SCC法檢測(cè)不同年齡奶牛隱性乳房炎的患病率

2.5 不同胎次奶牛隱性乳房炎的患病率

統(tǒng)計(jì)分析180 頭試驗(yàn)?zāi)膛０l(fā)現(xiàn)：1胎、2胎、3胎、4胎、5胎、6胎及以上的奶牛頭數(shù)依次為45 頭、20 頭、28 頭、32 頭、35 頭、20 頭。使用LMT法診斷，患隱性乳房炎奶牛頭數(shù)依次為10 頭、5 頭、7 頭、9 頭、10 頭、15 頭，患病率依次為22.22%、25.00%、25.00%、28.13%、28.57%、75.00%（表5）。使用SCC法診斷，患隱性乳房炎奶牛頭數(shù)依次為11 頭、5 頭、8 頭、10 頭、11 頭、15 頭，患病率依次為24.44%、25.00%、28.57%、31.25%、31.43%、75.00%（表5）。綜上，6胎及以上的奶牛乳房炎患病率與其他胎次之間差異均極顯著（P＜0.01）。

表5 使用LMT法和SCC法檢測(cè)不同胎次奶牛隱性乳房炎的患病率

3 討論與分析

3.1 奶牛場(chǎng)臨床型乳房炎的發(fā)病情況

乳房炎嚴(yán)重影響奶牛乳腺細(xì)胞的泌乳功能，影響奶牛場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益。本試驗(yàn)對(duì)某規(guī)?；膛?chǎng)的712 頭奶牛進(jìn)行了乳房炎患病率調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)40頭奶?；寂R床型乳房炎，占5.62%，低于國際統(tǒng)計(jì)的臨床型乳房炎10.00%～50.00%的發(fā)病率[15～17]。這得益于該奶牛場(chǎng)積極有效的生產(chǎn)管理，早發(fā)現(xiàn)早治療，積極改善圈舍的環(huán)境衛(wèi)生條件。

3.2 奶牛場(chǎng)隱性乳房炎的發(fā)病情況

從剩余的未表現(xiàn)出臨床型乳房炎癥狀的672 頭奶牛中隨機(jī)選出180 頭奶牛，共682 個(gè)乳區(qū)（720 個(gè)乳區(qū)中有38 個(gè)瞎乳頭），分別進(jìn)行LMT法和SCC法檢測(cè)。經(jīng)LMT法診斷發(fā)現(xiàn)，180 頭奶牛中有56 頭患隱性乳房炎，患病率為31.11%；經(jīng)SCC法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，180 頭奶牛中有60 頭患隱性乳房炎，患病率為33.33%。兩種方法檢測(cè)的隱性乳房炎患病率均低于周林（2009年）[18]報(bào)道的89.68%，低于郭小雅（2005年）[19]報(bào)道的38.79%。經(jīng)LMT法診斷發(fā)現(xiàn)，682 個(gè)乳區(qū)中有150 個(gè)乳區(qū)患隱性乳房炎，隱性乳房炎乳區(qū)患病率為21.99%，高于郭小雅（2005年）[19]報(bào)道的19.35%；使用SCC法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，682 個(gè)乳區(qū)中有132 個(gè)乳區(qū)患隱性乳房炎，隱性乳房炎乳區(qū)患病率為19.35%，均低于周林（2009年）[18]報(bào)道的59.81%。

定期調(diào)查奶牛乳房炎十分必要，早發(fā)現(xiàn)早治療是防治奶牛隱性乳房炎的關(guān)鍵措施。如果隱性乳房炎轉(zhuǎn)變?yōu)榕R床型乳房炎，不但增加治療費(fèi)用，還會(huì)延長治療周期，增加奶牛場(chǎng)的人力、物力和財(cái)力支出。季節(jié)變化會(huì)使奶牛產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，降低奶牛自身免疫力。如新疆北疆地區(qū)的4—6月是春夏交接之季，冰雪融化，奶牛運(yùn)動(dòng)場(chǎng)上污水遍地，糞污容易污染奶牛乳頭，導(dǎo)致奶牛感染乳房炎致病菌。為預(yù)防奶牛乳腺炎，奶牛場(chǎng)需要加強(qiáng)消毒工作，搞好環(huán)境衛(wèi)生，適當(dāng)增強(qiáng)泌乳奶牛的營養(yǎng)，提高自身免疫力。

3.3 不同乳區(qū)奶牛隱性乳房炎患病率的差異性分析

本試驗(yàn)使用LMT法對(duì)試驗(yàn)?zāi)膛Ｈ閰^(qū)診斷發(fā)現(xiàn)，共檢測(cè)180 頭奶牛的682 個(gè)乳區(qū)，左前、右前、左后、右后乳區(qū)的患病率依次為21.25%、21.69%、22.03%、22.91%；使用SCC法對(duì)試驗(yàn)?zāi)膛Ｈ閰^(qū)診斷發(fā)現(xiàn)，共檢測(cè)180 頭奶牛的682 個(gè)乳區(qū)，左前、右前、左后、右后乳區(qū)的患病率依次為17.50%、18.67%、19.20%、21.79%。從兩種方法得到的數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，奶牛隱性乳房炎乳區(qū)患病率存在一定的規(guī)律性：左前、右前、左后、右后乳區(qū)的患病率存在遞增趨勢(shì)；同側(cè)的后乳區(qū)的患病程度高于前乳區(qū)的，右乳區(qū)的乳房炎患病程度高于左乳區(qū)的。同側(cè)后乳區(qū)的患病程度高于前乳區(qū)的，可能與后乳區(qū)離地面、奶牛尾部、外陰部比較近有關(guān)，更容易接觸糞污，增加了感染機(jī)會(huì)。右乳區(qū)的乳房炎感染程度高于左乳區(qū)的，可能與奶牛的臥床姿勢(shì)有關(guān)，臥床時(shí)左側(cè)高于右側(cè)，右側(cè)乳區(qū)更容易接觸糞污，增加感染機(jī)會(huì)。使用LMT法和SCC法檢測(cè)各乳區(qū)乳房炎陽性率，發(fā)現(xiàn)各乳區(qū)陽性率差異不顯著（P＞0.05），說明各乳區(qū)陽性率之間沒有必然規(guī)律，但也要引起奶牛場(chǎng)工作人員的重視。不同乳區(qū)乳房炎患病率存在一定差異，原因是多方面的，與該場(chǎng)擠奶器或者擠奶工的不規(guī)范擠奶操作也有一定關(guān)系。因此，擠奶廳的設(shè)備要健全，加強(qiáng)擠奶前、后的消毒工作，減少奶牛乳頭在擠奶廳受傷的機(jī)會(huì)。

3.4 不同年齡奶牛隱性乳房炎患病率差異性分析

使用LMT法檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)180 頭試驗(yàn)?zāi)膛Ｖ?～3歲、4～5歲、6歲以上的奶牛隱性乳房炎患病率依次為26.39%、28.57%、42.22%；使用SCC法檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)180頭試驗(yàn)?zāi)膛Ｖ?～3歲、4～5歲、6歲以上的奶牛隱性乳房炎患病率依次為29.17%、30.16%、44.44%。不難發(fā)現(xiàn)，實(shí)際生產(chǎn)中奶牛的年齡越大，患奶牛隱性乳房炎的機(jī)會(huì)增加，這與劉銀梅（2009年）[20]的試驗(yàn)研究結(jié)果相符合。使用LMT法和SCC法檢測(cè)不同年齡段奶牛乳房炎患病率，發(fā)現(xiàn)6歲以上奶牛的乳房炎患病率與2～3歲、4～5歲的患病率相比差異顯著（P＜0.05），說明6歲及以上奶牛乳房炎的患病率要高于2～3歲、4～5歲奶牛乳房炎的患病率。造成這種試驗(yàn)結(jié)果，有多方面的原因：年齡偏大的奶牛在日常的生產(chǎn)中乳房受傷的機(jī)會(huì)增加，感染乳房炎致病菌的機(jī)會(huì)增加；年齡偏大的奶牛的自身免疫力會(huì)下降，不能很好地抵抗外界病原菌的侵害；年齡偏大的奶牛乳房韌帶松弛，接觸糞污的機(jī)會(huì)增加，易增加病原菌的感染機(jī)會(huì)。因此，在奶牛場(chǎng)的實(shí)際生產(chǎn)中，要有計(jì)劃的淘汰年齡偏大的奶牛，適時(shí)補(bǔ)充年輕泌乳奶牛。與此同時(shí)，應(yīng)該科學(xué)合理地制定奶牛干乳期的管理計(jì)劃，使用藥物進(jìn)行乳房炎的防治。

3.5 不同胎次奶牛隱性乳房炎的患病率差異性分析

使用LMT法，統(tǒng)計(jì)分析180 頭試驗(yàn)?zāi)膛０l(fā)現(xiàn)，1胎、2胎、3胎、4胎、5胎、6胎及以上的奶牛乳房炎患病率依次為22.22%、25.00%、25.00%、28.13%、28.57%、75.00%；使用SCC法，統(tǒng)計(jì)分析180 頭試驗(yàn)?zāi)膛０l(fā)現(xiàn)，1胎、2胎、3胎、4胎、5胎、6胎及以上的奶牛乳房炎患病率依次為24.44%、25.00%、28.57%、31.25%、31.43%、75.00%。分析兩種方法的數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，生產(chǎn)胎次越多的奶牛感染奶牛乳房炎的機(jī)會(huì)增加，與不同年齡奶牛乳房炎的感染機(jī)會(huì)有相似的規(guī)律。分析LMT法和SCC法檢測(cè)的各胎次奶牛乳房炎患病率，發(fā)現(xiàn)6胎及以上的奶牛乳房炎患病率與其他胎次之間差異極顯著（P＜0.01），說明6胎及以上奶牛的乳房炎患病率要遠(yuǎn)高于1胎、2胎、3胎、4胎、5胎奶牛的，因此奶牛場(chǎng)要有計(jì)劃的淘汰高胎次的奶牛[21]。在場(chǎng)內(nèi)的畜牧生產(chǎn)中，要及時(shí)檢測(cè)并淘汰患乳房炎久治不愈的奶牛，因?yàn)橹委熯@些奶牛不但會(huì)增加醫(yī)藥費(fèi)用的支出，還會(huì)作為傳染源將致病菌傳染給其他健康奶牛。