霍路曼，李 藝，鄭百芹，李明陽，張淼怡，郝立武，張書宏

河北省唐山市食品藥品綜合檢驗檢測中心；河北省農產品質量安全檢測工程技術研究中心，河北唐山 063000

0 引言

近年來，乳及其制品因具有豐富的營養(yǎng)價值已成為人們生活中必不可少的食品之一[1]。據《2020年中國奶業(yè)統(tǒng)計摘要》統(tǒng)計，2018年、2019年、2020年，我國生乳產量分別為3 038.6 萬噸、3 201.2 萬噸、3440.0 萬噸，呈現(xiàn)出逐年遞增的態(tài)勢。乳品市場發(fā)展?jié)摿薮骩2]。生乳作為乳制品的最主要原料，從生產到加工，再到運輸，經過了較長的產業(yè)鏈，因此如何保障其的質量安全問題，成為行業(yè)和消費者共同關注的焦點。

在生產端，生乳的不安全因素之一，是生乳中的獸藥殘留，其主要來自不規(guī)范使用獸藥與不嚴格執(zhí)行休藥期[3，4]，最終導致生乳中獸藥殘留超過安全值[5]。通過查閱相關資料，目前生乳中獸藥殘留檢測方法包括酶聯(lián)免疫法[6]、氣相色譜法-質譜聯(lián)用法[7]、液相色譜法[8]、液相色譜-質譜聯(lián)用法[9]。但能在短時間內準確測定生乳中多數(shù)量獸藥殘留的研究與報道較少。本研究通過對樣品前處理過程進行優(yōu)化，采用液相色譜高分辨飛行時間質譜技術建立了同時測定生乳中29 種獸藥殘留的快速檢測方法。

1 材料與方法

1.1 儀器

液相色譜-高分辨飛行時間質譜儀（X500R）：美國AB SCIEX公司；電子天平（PL2002）：上海梅特勒-托利多公司；渦旋儀（MS3 basic）：德國艾卡公司；振蕩器：德國海道爾夫（Heidolph）公司；氮吹儀、離心機。

1.2 材料

獸藥殘留標準品購自天津阿爾塔公司；甲酸、甲醇、乙腈為質譜純，其他試劑為分析純；試驗用水為蒸餾水（屈臣氏）；生乳樣品采于河北省唐山市的生鮮乳收購站；0.22 μm濾膜購自DIKMA公司；凈化管（Dikma ProElut QuECHERS獸藥殘留檢測專用）產自Dikma公司。

2 試驗方法

2.1 混合標準儲備溶液

分別吸取濃度為10 ng/mL的單個獸藥標準物質100 μL，用乙腈定容至10 mL，得到濃度為100 μg/mL的混合標準溶液，于-20 ℃冰箱內保存。

2.2 樣品前處理

分別吸取生乳樣品2.0 mL于50 ml離心管中，加入混合標準溶液0.1 mL，配制成含量為5 μg/mL的待測樣品，渦旋混勻后靜置10.0 min，加入8.0 mL乙腈（含0.2%的甲酸），渦旋混勻后超聲5.0 min，4 000 r/min離心10.0 min，將上層清液全部導入凈化管中，渦旋震蕩10.0 min后靜置20.0 min，隨后吸取上層清液4.0 mL氮吹至近干，用10%乙腈水定容至1.0 mL，渦旋混勻后過0.22 μm濾膜至進樣小瓶，待測。

2.3 液相色譜條件

色譜柱條件：Waters ACQUITY UPLC HSS T3（2.1×50 mm，1.8 μm）。柱溫：40 ℃；進樣量：5 μL；流量：0.3 mL/min。正離子模式下流動相：A為水溶液加上0.1%甲酸；B為乙腈溶液加上0.1%甲酸。采集時間為20.0 min，梯度程序見表1。

質譜條件：電噴霧離子源（ESI），正離子掃描模式，采集方式為非依賴型數(shù)據采集模式（IDA）。具體參數(shù)見表2。

表2 質譜條件參數(shù)

2.4 數(shù)據處理

結合已建立的數(shù)據庫進行定性分析，數(shù)據采集完后使用SCIEX OS系統(tǒng)（Version 1.6.1.29803）中自帶的Analytics程序進行數(shù)據分析，分析方式為非靶向分析。

3 結果與討論

準確吸取2.00 g生鮮乳樣品，加入混合標準溶液0.1 mL，配制成含量為5 μg/mL的待測樣品，隨后按照上述前處理方法進行處理，將數(shù)據進行靶向分析，29 種獸藥能夠在20.0 min內被檢測出來，總離子流圖見圖1，結果見表3。從表1中可以看出29 種獸藥殘留能夠被很好的檢測出來，其中Mass Error在±2.0 mg/kg之內，Library Score得分均在90 分以上，能夠滿足快速定性的要求，提高篩查效率與準確性。

表 3 29 種獸藥殘留上機結果

圖1 29種獸藥殘留總離子流圖

表 1 梯度程序

生乳中因含有蛋白質會影響提取效果，前處理方法中，往提取液中加入了0.1%的甲酸，能夠有效地去除樣品中的蛋白質，同時，超聲處理能夠很大程度上提高提取效率。

4 結論

液相色譜-高分辨飛行時間質譜具有高通量、快速定性的優(yōu)點，在建好譜庫的情況下，能夠不使用標準品來對物質進行快速定性，并且其前處理方法簡單，能夠在很大程度上節(jié)約檢測時間，提高檢測效率與準確性。

本方法通過優(yōu)化的前處理方法結合液相色譜高分辨飛行時間質譜，開發(fā)了乳制品29 種獸藥殘留的快速定性方法，具有前處理簡單、靈敏度高、檢測時間快等優(yōu)點，但因其在定量檢測的準確性上不如三重四級桿，因此，定量檢測暫不考慮該方法。