葛志標(biāo) 管燕 廖明亮

摘? ?要? ?羊肚菌栽培具有高投入、高風(fēng)險(xiǎn)、高效益特點(diǎn)，其菌種必須含有兩種交配型基因才能出菇，普通羊肚菌菌種分離技術(shù)均有可能缺失交配型基因，而科研院所可以通過(guò)PCR技術(shù)檢測(cè)菌種后用于生產(chǎn)，導(dǎo)致羊肚菌菌種市場(chǎng)價(jià)高并趨于壟斷?？梢宰孕兄谱餮蚨蔷N，利用冷庫(kù)進(jìn)行出菇效果對(duì)比試驗(yàn)，篩選出菌種用于大田栽培。通過(guò)3年生產(chǎn)實(shí)踐，方法可行，具有推廣價(jià)值。

關(guān)鍵詞? ?羊肚菌;菌種;冷庫(kù);出菇試驗(yàn)

羊肚菌栽培具有高投入、高風(fēng)險(xiǎn)、高效益特點(diǎn)，其菌種必須含有兩種交配型基因才能出菇。采用普通的羊肚菌菌種分離技術(shù)，可能造成菌種缺失交配型基因，需要專業(yè)科研院所通過(guò)PCR技術(shù)進(jìn)行菌種檢測(cè)篩選，由此導(dǎo)致羊肚菌菌種市場(chǎng)價(jià)高并趨于壟斷。

為了解決普通食用菌種植戶自制羊肚菌母種，擴(kuò)繁后生產(chǎn)出的羊肚菌栽培種因交配型基因缺失而造成大田生產(chǎn)不出菇的問(wèn)題，貴州市遵義縣中信食用菌專業(yè)合作社組織課題組自制母種后，利用冷庫(kù)進(jìn)行菌種出菇試驗(yàn)，篩選出菌種用于大面積大田栽培，3年平均畝產(chǎn)150 kg以上，與科研院所采用PCR技術(shù)生產(chǎn)的菌種大田栽培產(chǎn)量相當(dāng)，具有實(shí)用推廣價(jià)值。以下是這一實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的操作流程總結(jié)，供參考。

1? ?母種分離

1.1? ?多孢子分離? 選大田栽培中個(gè)大、形好、肉厚的羊肚菌頭茬菇，用于菌種分離。分離步驟如下：

用市售標(biāo)準(zhǔn)PDA培養(yǎng)基40.1 g，加水? ? ? 1 000 mL煮沸，分裝入試管和100 mL組培瓶、錐形瓶中，高壓滅菌鍋121 ℃保持30分鐘，試管擺成斜面，組培瓶?jī)?nèi)置100 mL培養(yǎng)基，冷卻后備用。

準(zhǔn)備回形針、刀片、鑷子、吹風(fēng)機(jī)、羊肚菌子實(shí)體等。在超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行如下無(wú)菌操作：

用吹風(fēng)機(jī)冷風(fēng)吹羊肚菌菌蓋表面，達(dá)到干凈的效果，用刀片把菌蓋表面切成1 cm見(jiàn)方的小塊;用酒精給回形針消毒，制成“Z”字形掛鉤，用一頭鉤住小塊羊肚菌菌蓋，另一頭掛在組培瓶或錐形瓶上，塞緊棉塞。

放置20 ℃恒溫箱內(nèi)12～24小時(shí)后，取出組培瓶或錐形瓶，在超凈工作臺(tái)內(nèi)將掛鉤連同組織塊取出，繼續(xù)塞緊棉塞，20 ℃下培養(yǎng)，2～5天即可見(jiàn)到彈射出的孢子萌發(fā)出的小菌落。

仔細(xì)觀察辨認(rèn)菌落，挑取少量菌絲轉(zhuǎn)入試管中，編號(hào)標(biāo)記。待5天左右長(zhǎng)滿試管后，用體視鏡或顯微鏡檢測(cè)，選出9支純菌種編號(hào)標(biāo)記，按編號(hào)標(biāo)記一一對(duì)應(yīng)進(jìn)行擴(kuò)繁備用，9個(gè)編號(hào)標(biāo)記的母種各用1支接種原種，剩余保存至出菇試驗(yàn)后確定淘汰或繼續(xù)擴(kuò)繁。

1.2? ?組織分離? ?PDA培養(yǎng)基，采用柄蓋交接處組織分離獲得純菌種，每支試管進(jìn)行編號(hào)標(biāo)記。分離步驟如下：

用市售標(biāo)準(zhǔn)PDA培養(yǎng)基40.1 g，加1 000 mL水煮沸，分裝入試管中，高溫滅菌鍋121 ℃下保持30分鐘，試管擺成斜面，冷卻后備用。

準(zhǔn)備刀片、鑷子、吹風(fēng)機(jī)、酒精燈、羊肚菌子實(shí)體等。在超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行如下無(wú)菌操作：

先用75%酒精擦拭雙手，再用吹風(fēng)機(jī)冷風(fēng)吹羊肚菌菌蓋表面，達(dá)到干凈的效果，用75%酒精棉球擦拭羊肚菌表面，器械用酒精燈火焰滅菌冷卻后，縱向切開羊肚菌子實(shí)體，挑取柄蓋交接處組織，置入斜面培養(yǎng)基試管中，編號(hào)標(biāo)記。

放置于20 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，2～5天菌絲萌發(fā)，挑取菌絲轉(zhuǎn)管培養(yǎng)，按編號(hào)標(biāo)記，5天左右長(zhǎng)滿試管，選擇9支進(jìn)行編號(hào)擴(kuò)繁標(biāo)記，將9個(gè)編號(hào)標(biāo)記的母種各用1支接種原種，剩余保存至出菇試驗(yàn)后確定淘汰或繼續(xù)擴(kuò)繁。

2? ?原種制作

1）制作培養(yǎng)基。按照木屑68%、麥粒22%、土壤7%、石灰2%、石膏1%的比例配制培養(yǎng)基。步驟如下：稱取麥粒，加石灰浸泡24小時(shí)或煮沸后保持30分鐘左右，以麥粒吸水飽滿且麥皮不開裂為度，加木屑（0.5 cm）、土壤、石膏等混勻裝瓶，高壓或常壓滅菌，冷卻后接種培養(yǎng)。

2）接種培養(yǎng)。用多孢分離或組織分離后編號(hào)標(biāo)記的9支斜面母種，每支接種1瓶原種培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，按母種編號(hào)標(biāo)記，共9瓶。10天左右長(zhǎng)滿菌種瓶。

3? ?栽培種制作

1）制作培養(yǎng)基。按照木屑45%、麥粒45%、土壤7%、石灰2%、石膏1%的比例配制培養(yǎng)基。步驟如下：稱取麥粒，加石灰浸泡24小時(shí)或煮沸后保持30分鐘左右，以麥粒吸水飽滿且麥皮不開裂為度，加木屑（0.5 cm）、土壤、石膏等混勻裝袋，高壓或常壓滅菌，冷卻后接種培養(yǎng)。

2）接種培養(yǎng)。將9瓶編號(hào)標(biāo)記的原種，1瓶接種1個(gè)栽培袋，按原種編號(hào)標(biāo)記，共9袋。15天左右長(zhǎng)滿菌種袋。

4? ?營(yíng)養(yǎng)袋制作

準(zhǔn)備12 cm×24 cm聚丙烯袋，玉米芯100 g，麥粒150 g，石膏2 g，石灰2 g。將麥粒用石灰水浸泡12～24小時(shí);玉米芯加水，24小時(shí)翻1次，悶48小時(shí)后與石灰、石膏、浸泡的麥?；靹?，裝入聚丙烯袋，高溫高壓滅菌8小時(shí)，冷卻備用。每袋營(yíng)養(yǎng)袋濕重350 g左右。

5? ?篩選菌種

通過(guò)冷庫(kù)出菇試驗(yàn)篩選菌種。

5.1? ?試驗(yàn)過(guò)程

1）準(zhǔn)備長(zhǎng)方形或正方形容器，保證底部能夠?yàn)r水。

2）選取壤土，用石灰混勻消毒，根據(jù)土壤干濕度進(jìn)行水分調(diào)節(jié)，至土壤手握成團(tuán)，自由落下能散開為宜。

3）容器底部及四周用地膜鋪蓋。地膜要超出容器至完全覆蓋上部，地膜上橫豎20 cm均勻打孔通水通氣，然后裝入消毒處理后的土壤至容器4/5處。

4）撒播栽培種。播種后覆蓋2 cm厚的土壤，栽培容器按栽培種編號(hào)標(biāo)記，共9個(gè)處理，每個(gè)處理重復(fù)3次。以科研院所的菌種作對(duì)照（1個(gè)）。共28個(gè)處理。

5）調(diào)控出菇環(huán)境。將播種后的容器放置在可調(diào)溫冷庫(kù)中，調(diào)節(jié)溫度上限為19 ℃，溫度下限為10 ℃，溫差9 ℃。

6）日常管理。播種5天左右，菌絲長(zhǎng)滿土面，放置營(yíng)養(yǎng)袋。把覆蓋打孔的黑地膜蓋在營(yíng)養(yǎng)袋上，保溫保濕。每周檢查1次土壤濕度，土壤含水量保持在50%～60%。營(yíng)養(yǎng)袋放置30天左右后，噴出菇水，開啟燈光，土面菌霜消退，原基開始分化。

5.2? ?試驗(yàn)結(jié)果與應(yīng)用? ?16個(gè)處理出現(xiàn)原基，其中包括對(duì)照（1個(gè)），試驗(yàn)和對(duì)照出現(xiàn)原基的密度基本相當(dāng);其余12個(gè)處理無(wú)原基，淘汰。

選擇出現(xiàn)原基的5支栽培種試管進(jìn)行擴(kuò)繁，生產(chǎn)菌種，用于大田栽培。

6? ?應(yīng)注意的問(wèn)題

1）配方中的原材料要新鮮，玉米芯、麥粒、木屑等處理要到位。

2）母種轉(zhuǎn)管時(shí)要橫向截取菌塊，不要縱向截取。

3）培養(yǎng)溫度一定不要超過(guò)22 ℃，菌種用冷藏車運(yùn)輸，保證低溫環(huán)境。

4）菌種一定要放置在通風(fēng)、涼爽的地方儲(chǔ)存，不能堆碼。

5）控制轉(zhuǎn)管次數(shù)，不要超過(guò)5代。