胡楚元，蔡 拓，朱嘯川

（湖南省職業(yè)病防治院，湖南長沙 410007）

2019 年11 月，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所出現(xiàn)大面積感染布魯氏菌疾病。蘭州“布病”事件對實驗動物行業(yè)生物安全敲響警鐘，隨著新冠疫情在全球范圍的暴發(fā)給人類生命健康帶來嚴(yán)重的威脅，完善實驗動物生物安全管理迫在眉捷。良好實驗室規(guī)范（Good Laboratory Practice，GLP)本質(zhì)是一種質(zhì)量管理體系，實施GLP 旨在規(guī)范試驗安全的全過程，包括設(shè)施建設(shè)、管理、實驗設(shè)計、操作、記錄、報告等，確保試驗結(jié)果真實、客觀、可靠。該文從GLP 質(zhì)量管理體系對設(shè)施建設(shè)、設(shè)施管理以及實驗動物管理的全方位要求出發(fā)，結(jié)合筆者17 年實驗動物一線工作經(jīng)驗對實驗動物管理過程存在的一系列生物安全問題進(jìn)行探討，在實踐中建立以預(yù)防為主、突發(fā)事件應(yīng)急預(yù)案為輔的思路，為生物安全防范制定具體措施提供對策。

1 設(shè)施標(biāo)準(zhǔn)化管理

1.1 生物安全-設(shè)施建設(shè)與取證

建成后的SPF 級動物實驗室的各項條件符合《中華人民共和國實驗動物管理條例》和實驗動物及設(shè)施國標(biāo)的要求[1]，經(jīng)檢測、驗收取得《實驗動物使用許可證》。屏障設(shè)施的設(shè)計除符合國標(biāo)要求外，應(yīng)重點在“人污分離、交叉感染”方面做好設(shè)計工作。應(yīng)重視設(shè)施管理人員、獸醫(yī)、病理人員、生物安全員的有效建議。

設(shè)施申請新證或換證，設(shè)施環(huán)境指標(biāo)檢測應(yīng)交由第三方公司完成，檢測指標(biāo)應(yīng)覆蓋設(shè)施內(nèi)環(huán)境2/3 區(qū)域。自檢報告不宜做為上交材料。

1.2 生物安全-通風(fēng)與壓差

通風(fēng)與壓差對于保持環(huán)境指標(biāo)穩(wěn)定性、對于生物安全風(fēng)險防范非常重要。各層樓最好具備獨立的兩套送風(fēng)系統(tǒng)，新風(fēng)經(jīng)初效－中效－高效過濾器進(jìn)入設(shè)施內(nèi)環(huán)境，房間排風(fēng)通過初效和中效及活性炭后排出設(shè)施，初效過濾器每年更換6 次，中效過濾器需每年更換2 次，高效過濾器每年更換一次，設(shè)施內(nèi)環(huán)境壓差維持相鄰區(qū)域大于10Pa。

通風(fēng)、壓差在實踐管理中要注意幾個細(xì)節(jié)問題，①房門隨開隨關(guān)，讓相鄰區(qū)域壓差保持正壓，保持風(fēng)向正向流動；②注意出口緩沖間的衛(wèi)生消毒以及兩扇門不能同時打開，防止外環(huán)境風(fēng)逆流；③注意電腦系統(tǒng)內(nèi)24h 的壓差數(shù)據(jù)必須符合國標(biāo)要求且保持平穩(wěn)運行；④分析電腦系統(tǒng)中數(shù)據(jù)異常波動因素，迅速解決問題并記錄在案。

1.3 生物安全-人員管理

嚴(yán)格實行人流、物流、動物流的有序控制，人員污染是屏障動物設(shè)施失敗的重要原因，應(yīng)經(jīng)常對相關(guān)人員進(jìn)行職業(yè)培訓(xùn)，嚴(yán)格控制人員流動、保持無菌觀念、嚴(yán)格遵守操作規(guī)程中的規(guī)定，規(guī)范化、程序化、標(biāo)準(zhǔn)化地進(jìn)行操作[2]。

人員進(jìn)出一律實行門禁卡使用制度，一人一卡不能外借，外來人員參觀必須經(jīng)設(shè)施負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)且由工作人員陪同參觀。人員進(jìn)出須嚴(yán)格執(zhí)行SOP 操作，定向流動、穿戴整齊，實際的管理中最需要注意的是培訓(xùn)考核以及懲罰升級制度，所有進(jìn)出人員必須樹立設(shè)施內(nèi)環(huán)境質(zhì)量第一的觀念，杜絕一切污染設(shè)施行為，提高人員的生物安全意識，保持內(nèi)環(huán)境指標(biāo)良性循環(huán)。

物品進(jìn)出執(zhí)行嚴(yán)格的消毒制度，標(biāo)識制度，設(shè)崗位負(fù)責(zé)人全責(zé)制，崗位負(fù)責(zé)人除自己嚴(yán)格執(zhí)行程序規(guī)定外同時也扮演監(jiān)督角色。

2 實驗動物申購

2.1 供應(yīng)商評估

建立實驗動物及相關(guān)產(chǎn)品的供應(yīng)商評估制度非常必要，從供應(yīng)商的生產(chǎn)規(guī)模、產(chǎn)品質(zhì)量、包裝運輸、質(zhì)檢結(jié)果、服務(wù)態(tài)度、行業(yè)聲譽等維度評估，選擇優(yōu)秀的供應(yīng)商，直接從實驗動物生產(chǎn)源頭把控質(zhì)量，有效防范生物安全風(fēng)險。供應(yīng)商評估應(yīng)每年進(jìn)行一次，以組員團(tuán)隊的方式實地調(diào)查評估，實驗動物使用單位與生產(chǎn)單位形成監(jiān)督與被監(jiān)督關(guān)系，有效促進(jìn)實驗動物生產(chǎn)單位以質(zhì)量優(yōu)先生產(chǎn)經(jīng)營。

2.2 動物申購倫理審查

所有動物試驗項目均須倫理申請審查，倫理申請審查內(nèi)容須客觀真實，包括實驗項目名稱、項目組人員、擬開展試驗時間、實驗的目的與內(nèi)容、擬使用動物相關(guān)信息、試驗過程的主要技術(shù)、實驗動物處理方式等等，實驗動物使用必須符合“3R”原則，實驗動物處理無害化。

實際操作執(zhí)行中要注意關(guān)鍵環(huán)節(jié)把控，不能走過程流于形式，①不管是正式試驗還是預(yù)試驗動物，所有的實驗動物申購必須經(jīng)單位實驗動物福利與倫理委員會審查，；②只申購合格供應(yīng)商供應(yīng)的來源清楚的實驗動物，其他形式的購買、寄養(yǎng)一律禁止，保持渠道來源穩(wěn)定。

2.3 動物的包裝運輸

實驗動物包裝必須規(guī)范符合國標(biāo)要求，運輸工具車況良好、通風(fēng)空調(diào)正常，不能隨意使用外來租借車輛運輸，杜絕生物安全風(fēng)險。

3 實驗動物飼養(yǎng)管理

3.1 生物安全-傳染病

嚴(yán)格執(zhí)行“預(yù)防為主、防重于治”的方針，特別是小動物，發(fā)生傳染病或疑似傳染病時，應(yīng)第一時間向獸醫(yī)、項目負(fù)責(zé)人報告，采取消毒、隔離、停止設(shè)施運行等一切必要措施。

3.2 生物安全-飲用水

根據(jù)GB14925-2010 對實驗動物飲水的要求，研究單位實驗動物飲用水來源于長沙市城市生活飲用水，經(jīng)JZR－200 制水設(shè)備進(jìn)行無菌處理，利用超濾+微電解機(jī)殺菌原理。微電解設(shè)備由水處理設(shè)備公司提供并定期維護(hù)，超濾膜每年更換一次，水箱空氣濾芯每年更換一次，回水濾芯每四個月更換一次，水箱和管道每月清洗一次，每一季度做一次水質(zhì)檢測。

無菌供水系統(tǒng)是一套閉水循環(huán)系統(tǒng)，采用食品級材料水管，能做到24h 循環(huán)持續(xù)殺菌不留死角，接水端也進(jìn)行外源逆污染控制，經(jīng)JZR－200 制水設(shè)備產(chǎn)生的微電解水可以做為SPF 級實驗動物的無菌飲用水[3]。

3.3 生物安全-飼料

從生物安全的角度看，主要做好飼料的滅菌工作，選擇優(yōu)秀的供應(yīng)商，飼料真空包裝，Co6025K 輻照劑量，飼料進(jìn)出設(shè)施內(nèi)環(huán)境做好外包裝消毒。

飼料傳遞是非常關(guān)鍵的一環(huán)，傳遞消毒必須到位，外包裝必須進(jìn)行擦拭消毒或充分的噴霧消毒，紫外燈照射每次不低于15min。

3.4 生物安全-墊料

墊料供應(yīng)商的選擇非常重要，確保墊料的供應(yīng)能力與供應(yīng)質(zhì)量，墊料一般優(yōu)先玉米芯或刨木花墊料，墊料使用前必須經(jīng)高溫高壓滅菌消毒，滅菌效果檢測必須符合標(biāo)準(zhǔn)，對于滅菌后進(jìn)入屏障內(nèi)環(huán)境的墊料還必須跟蹤，2 周內(nèi)未用完則必須重復(fù)滅菌消毒。

4 實驗動物尸體及廢棄物

4.1 動物尸體及廢棄物的危害性

傳播疾病、危害食品安全、污染環(huán)境是動物尸體及其廢棄物的三大危害[4]。實驗動物尸體及廢棄物的無害化處理非常必要，也是生物安全工作重要組成部分，對實驗動物尸體及廢棄物處理措施如下步聚：①各層設(shè)施的衛(wèi)生負(fù)責(zé)人履行實驗動物尸體及廢棄物收集工作，收集工作要做到及時、包裝規(guī)范、記錄到位；②實驗動物尸體用黑色垃圾專用袋密封保存，醫(yī)廢垃圾用黃色垃圾袋密封保存，針頭用銳器盒保存，動物尸體及相關(guān)產(chǎn)品集中存放于冰箱；③根據(jù)實驗動物尸體及廢棄物存放情況定期統(tǒng)一交由第三方廢棄物處理公司無害化處理。

4.2 實驗動物全程跟蹤

跟蹤所有動物試驗項目，從實驗計劃書開始到試驗結(jié)束，建立完整的實驗動物管理鏈條，倫理申請審查－購買動物－動物接收－檢疫－檢疫期觀察－檢疫報告－與試驗人員記錄交接－試驗過程及記錄－動物安樂死處理－冰箱存放－與第三方無害化處理公司交接。除此之外，贈送動物等其他情況都要納入生物安全的防范之中，嚴(yán)禁任何實驗動物違規(guī)流入市場。

實踐管理中項目負(fù)責(zé)人應(yīng)對動物試驗的人員參與、培訓(xùn)、試驗進(jìn)程、試驗質(zhì)量、動物去向進(jìn)行有效的跟蹤，項目負(fù)責(zé)人應(yīng)第一時間知曉任何偏離試驗計劃的情況并做出有效處理措施。

4.3 記錄管理

記錄是工作完整性真實性重要的證據(jù)，記錄對實驗動物工作溯源有重要意義。

實驗動物管理的各項工作均要制定完善的工作記錄，既要考慮規(guī)范性也要考慮執(zhí)行性，記錄表格的設(shè)計宜由主要使用人員制定為好，由質(zhì)量管理人員復(fù)核，經(jīng)機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)人審批。記錄表格使用前必須先進(jìn)行人員培訓(xùn)，做到程序合規(guī)。記錄表格的修訂也要遵循相關(guān)SOP 修訂程序。

實踐工作中，要做到記錄的及時性與真實性，記錄必須規(guī)范，如有誤寫、漏寫應(yīng)及時糾正，并注明修改原因、簽名、日期；記錄的空白處應(yīng)劃斜杠完善；實驗動物尸體及廢棄物的交接記錄必須雙方簽名，落實責(zé)任人；記錄的存檔必須及時、規(guī)范。

4.4 個人防護(hù)

定期培訓(xùn)從業(yè)人員生物安全知識，提升生物安全意識，遵守設(shè)施運行管理制度，在設(shè)施內(nèi)環(huán)境必須穿戴隔離工作服，連體衣比較規(guī)范適合，戴無菌口罩、帽子、手套，處理特殊廢棄物時還要穿戴護(hù)目鏡等保護(hù)措施。在設(shè)施外環(huán)境也必須穿工作服、戴口罩、手套等防護(hù)用品，勤洗手消毒。

5 生物安全應(yīng)急機(jī)制

實驗單位應(yīng)強(qiáng)化實驗動物突發(fā)事件應(yīng)急管理，完善管理機(jī)制，提升應(yīng)急能力，有效防范和處置突發(fā)實驗室安全事件[5]。

實驗單位為保障機(jī)構(gòu)實驗動物工作有效開展，設(shè)立有實驗動物管理委員會，實驗動物管理辦公室，實驗動物倫理道德小組以及實驗動物生物安全應(yīng)急小組，機(jī)構(gòu)健全，責(zé)任明確，并定期培訓(xùn)、考核、演練，制定應(yīng)急預(yù)案，保持應(yīng)急工作有序穩(wěn)健。

實踐工作中應(yīng)著重提升從業(yè)人員生物安全防范意識，工作務(wù)實避虛，把生物安全、人民健康、人與自然和諧共生放在第一位。

6 小結(jié)

《中華人民共和國生物安全法》是實驗動物生物安全防范工作有力的后盾，隨著該法自2021 年4 月15 日起施行，在此背景下，實驗動物管理部門投入力量組織宣法培訓(xùn)工作，在實踐工作中建立相應(yīng)的SOP制度，從設(shè)施運行管理到實驗動物的飼養(yǎng)管理，從動物試驗到實驗動物尸體及其廢棄物處理，從人員培訓(xùn)到SOP 制度執(zhí)行進(jìn)行了全方位的監(jiān)督落實，特別是關(guān)鍵環(huán)節(jié)落實責(zé)任人，確保實驗動物生物安全各項工作穩(wěn)健到位。