褚怡霏 葉健飛 王振宜

摘要 目的：基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法研究濟(jì)川煎治療便秘的藥理機(jī)制及作用靶點(diǎn)。方法：使用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP）篩選濟(jì)川煎中6味中藥的化學(xué)成分及其作用靶點(diǎn)，通過(guò)GeneCards、OMIM、TTD、DisGeNET、Drugbank數(shù)據(jù)庫(kù)查詢(xún)便秘的疾病靶點(diǎn);利用R語(yǔ)言篩選成分和疾病的交集靶點(diǎn)，利用STRING數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建靶點(diǎn)蛋白互作網(wǎng)絡(luò);運(yùn)用Cytoscape（3.8.0）軟件構(gòu)建中藥-化學(xué)成分-便秘疾病靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖;利用R語(yǔ)言對(duì)靶基因進(jìn)行基因本體（GO）功能富集分析和京都基因與基因組百科全書(shū)（KEGG）通路富集分析。結(jié)果：篩選出槲皮素、山柰酚、漢黃芩素、β-谷甾醇、柚皮素、黃芩素6個(gè)主要化學(xué)成分，PTGS2、PTGS1、NCOA2、SCN5A、ADRB2、AR 6個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)，GO富集分析顯示靶點(diǎn)相關(guān)功能主要涉及對(duì)脂多糖的反應(yīng)、對(duì)細(xì)菌來(lái)源分子的反應(yīng)、對(duì)氧化應(yīng)激的反應(yīng)等，KEGG富集分析顯示靶點(diǎn)相關(guān)通路主要涉及藥物代謝-細(xì)胞色素P450、細(xì)胞色素P450對(duì)異生素的代謝、視黃醇代謝等。結(jié)論：濟(jì)川煎可能通過(guò)多靶點(diǎn)、多通路協(xié)同作用，發(fā)揮抗炎、抗氧化等作用，從而改善便秘。

關(guān)鍵詞 濟(jì)川煎;便秘;網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué);作用機(jī)制;藥效物質(zhì);藥物靶點(diǎn);槲皮素;山柰酚

Abstract Objective：To investigate the pharmacological mechanisms and action targets of Jichuan Decoction in the treatment of constipation based on a network pharmacology approach.Methods：Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform（TCMSP） were used to screen the chemical components and action targets of 6 Chinese medicinals in Jichuan Decoction.The disease targets of constipation were queried through Genecards，OMIM，TTD，DisGeNET，DRUGBANK databases.The intersection targets of ingredients and diseases were screened using the R（4.0.3）.STRING database was used to construct the target protein interaction network.The network diagram of TCM chemical component and constipation disease target was constructed using Cytoscape（3.8.0） software.The GO enrichment analysis and KEGG enrichment analysis of target genes were performed using R language.Results：A total of 6 main chemical compounds include quercetin，kaempferol，wogonin，β-sitosterol，naringenin，and baicalein.A total of 6 key targets were PTGS2，PTGS1，NCOA2，SCN5A，ADRB2 and AR.GO enrichment analysis showed that the target-related functions mainly involved in response to lipopolysaccharide，response to molecule of bacterial origin，response to oxidative stress etc.And the KEGG enrichment analysis showed that the target-related pathways mainly involved in drug metabolism-cytochrome P450，metabolism of xenobiotics by cytochrome P450，Retinol metabolism，etc.Conclusion：Jichuan Decoction may relieve constipation by exerting anti-inflammatory，antioxidant，and other effects through multi-target and multi-pathway synergistic effects.

Keywords Jichuan Decoction; Constipation; Network pharmacology; Mechanism of action; Pharmacodynamic substances; Drug targets; Quercetin; Kaempferol

中圖分類(lèi)號(hào)：R285文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2022.01.012

便秘（Constipation）是最常見(jiàn)的胃腸疾病之一，其特征主要為患者對(duì)排便情況不滿(mǎn)意，包含排便少、排便困難或二者兼有[1]。有研究估計(jì)便秘在一般人群中的患病率為12%～19%，患病率隨年齡增長(zhǎng)而增加，在女性中更為常見(jiàn)[2-3]。在便秘相關(guān)的研究中，在65歲以上的人群中，有26%的女性和16%的男性認(rèn)為自己患有便秘;在84歲以上的人群中，有34%的女性和26%的男性認(rèn)為自己患有便秘。便秘治療方法眾多，西醫(yī)治療以瀉藥為主，有研究表明，西方社會(huì)醫(yī)生會(huì)為近85%的便秘就診患者開(kāi)具瀉藥處方[4-5]。但此種方法易產(chǎn)生依賴(lài)性，因此中藥治療便秘具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。

濟(jì)川煎出自《景岳全書(shū)》，由當(dāng)歸、牛膝、肉蓯蓉、澤瀉、升麻、枳殼6味中藥組成。張景岳稱(chēng)此方為“用通于補(bǔ)之劑”，故適宜于腎陽(yáng)虛弱，精津不足便秘者，臨床上常用于治療多種因素導(dǎo)致的便秘。方中肉蓯蓉溫腎益精，潤(rùn)腸通便，為君藥。當(dāng)歸補(bǔ)血和血，牛膝補(bǔ)腎強(qiáng)筋，共為臣藥。枳殼行氣導(dǎo)滯，澤瀉利濕瀉濁，升麻升陽(yáng)降濁共為佐藥。諸藥合用使腎陽(yáng)得充，氣化得復(fù)，腸得濡潤(rùn)而便秘漸愈[6]。

中藥復(fù)方治療便秘優(yōu)勢(shì)突出，其作用機(jī)制具有靶點(diǎn)豐富、途徑多樣、安全有效等特征，在改善患者癥狀方面具有極大潛力。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是基于“疾病-基因-靶點(diǎn)-藥物”相互作用網(wǎng)絡(luò)，分析網(wǎng)絡(luò)中各個(gè)節(jié)點(diǎn)與相關(guān)藥物的關(guān)系，以探討藥物的作用機(jī)制，有助于推動(dòng)中藥復(fù)方的傳承和發(fā)展[7]。

本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，基于濟(jì)川煎的分子成分，構(gòu)建“藥物成分-靶點(diǎn)-基因”網(wǎng)絡(luò)，著眼于整體分析濟(jì)川煎調(diào)治便秘的分子機(jī)制，為后續(xù)的研究提供一定的理論基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 軟件與數(shù)據(jù)庫(kù)

R（4.0.3）軟件、RStudio平臺(tái)及VennDiagram、ClusterProfiler[8]、ggplot2程輯包，Cytoscape 3.8.0軟件及MCODE、CytoHubba插件，中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform，TCMSP，https：//tcmspw.com/tcmsp.php），UniProt（Universal Protein，https：//www.uniprot.org），DisGeNET（http：//www.disgenet.org）、GeneCards（http：//www.genecards.org）、在線(xiàn)人類(lèi)孟德?tīng)栠z傳數(shù)據(jù)庫(kù)（Online Mendelian Inheritance in Man，OMIM，https：//omim.org）、治療靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)（Therapeutic Target Database，TTD，http：//bidd.nus.edu.sg/group/cjttd）、Drugbank（https：//go.drugbank.com），STRING 11.0（https：//string-db.org）。

1.2 濟(jì)川煎相關(guān)靶點(diǎn)篩選

基于TCMSP[9]，尋找當(dāng)歸、牛膝、肉蓯蓉、澤瀉、升麻、枳殼6味中藥的化學(xué)成分，并結(jié)合口服生物利用度（Oral Bioavailability，OB）≥30%且類(lèi)藥性（Drug Likeness，DL）≥0.18進(jìn)行活性化合物的初步篩選，并利用TCMSP獲取與篩選得到的活性化合物相對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)。為使蛋白質(zhì)靶點(diǎn)信息標(biāo)準(zhǔn)化，將篩選后的靶點(diǎn)統(tǒng)一在UniProt蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索以規(guī)范。

1.3 便秘相關(guān)靶點(diǎn)篩選

以“Constipation”為關(guān)鍵詞，通過(guò)GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)、TTD數(shù)據(jù)庫(kù)[10]、DisGeNET數(shù)據(jù)庫(kù)挖掘便秘疾病的潛在靶點(diǎn)，并通過(guò)Drugbank數(shù)據(jù)庫(kù)尋找治療便秘的臨床一線(xiàn)西藥作用靶點(diǎn)進(jìn)行補(bǔ)充[11]。合并5個(gè)疾病數(shù)據(jù)庫(kù)靶點(diǎn)后，刪除重復(fù)值作為便秘的預(yù)測(cè)靶點(diǎn)庫(kù)。

1.4 濟(jì)川煎成分-便秘靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

為明確濟(jì)川煎藥物相關(guān)靶點(diǎn)與便秘疾病靶點(diǎn)間的相互作用，利用R語(yǔ)言VennDiagram包篩選二者靶點(diǎn)的交集并繪制韋恩圖。將所取交集靶點(diǎn)上傳至STRING 11.0數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（Protein-protein Interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)模型，將物種設(shè)置為“Homo Sapiens”，設(shè)定最小相互作用閾值為最高置信（Highest Confidence>0.9），構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)。并通過(guò)Cytoscape 3.8.0軟件中的MCODE插件對(duì)該結(jié)果進(jìn)一步分析，得到潛在蛋白質(zhì)功能模塊并對(duì)其功能進(jìn)行描述。同時(shí)通過(guò)Cytoscape 3.8.0軟件中的CytoHubba插件的MCC算法篩選Hub基因。

1.5 基因本體富集功能分析和京都基因與基因組百科全書(shū)通路富集分析

為確定基因的主要功能，使用R（4.0.3）軟件ClusterProfiler程輯包對(duì)靶點(diǎn)進(jìn)行基因本體（Gene Ontology，GO）功能富集分析和京都基因與基因組百科全書(shū)（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）通路富集分析，并用ggplot2程輯包繪制條形圖。

1.6 中藥-化學(xué)成分-便秘疾病靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建

運(yùn)用Cytoscape 3.8.0軟件構(gòu)建中藥-化學(xué)成分-便秘疾病靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖，分析得到化學(xué)成分與對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)之間的連接度、介度及緊密度等，并根據(jù)其網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)分析得出主要化學(xué)成分及關(guān)鍵對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)。

2 結(jié)果

2.1 濟(jì)川煎活性成分及對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)的獲取

濟(jì)川煎中當(dāng)歸化學(xué)成分2種，牛膝化學(xué)成分20種，肉蓯蓉化學(xué)成分6種，澤瀉化學(xué)成分10種，升麻化學(xué)成分17種，枳殼化學(xué)成分5種。見(jiàn)表1。當(dāng)歸作用靶點(diǎn)69個(gè)，牛膝作用靶點(diǎn)444個(gè)，肉蓯蓉作用靶點(diǎn)223個(gè)，澤瀉作用靶點(diǎn)9個(gè)，升麻作用靶點(diǎn)83個(gè)，枳殼作用靶點(diǎn)123，共得到靶點(diǎn)255個(gè)。

2.2 便秘疾病相關(guān)靶點(diǎn)的獲取

從GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)獲取便秘靶點(diǎn)5 053個(gè)，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)設(shè)定疾病與靶點(diǎn)的關(guān)聯(lián)分?jǐn)?shù)（Relevance score）大于中位數(shù)的目標(biāo)靶點(diǎn)為便秘的潛在靶點(diǎn)。此處通過(guò)GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)獲取的便秘靶點(diǎn)關(guān)聯(lián)分?jǐn)?shù)最大值為30.61，最小值為0.2，中位數(shù)為3.39，故設(shè)定關(guān)聯(lián)分?jǐn)?shù)>3.39的靶點(diǎn)為便秘疾病的潛在靶點(diǎn)。結(jié)合Drugbank數(shù)據(jù)庫(kù)、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)、TTD數(shù)據(jù)庫(kù)、DisGeNET數(shù)據(jù)庫(kù)最終得到2 158個(gè)便秘疾病相關(guān)靶點(diǎn)。

2.3 濟(jì)川煎成分-便秘靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

利用R（4.0.3）軟件及VennDiagram程輯包，篩選出濟(jì)川煎潛在靶點(diǎn)和便秘疾病相關(guān)靶點(diǎn)的交集靶點(diǎn)164個(gè)，并繪制韋恩圖。見(jiàn)圖1。將164個(gè)交集靶點(diǎn)提交至STRING 11.0平臺(tái)，得到濟(jì)川煎成分-便秘靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)。在此PPI網(wǎng)絡(luò)圖中，共有164個(gè)節(jié)點(diǎn)，580條邊。見(jiàn)圖2。

將PPI網(wǎng)絡(luò)信息導(dǎo)入Cytoscape 3.8.0軟件中，運(yùn)用MCODE插件分析得到Module，并保留其中3個(gè)評(píng)分最佳的生物過(guò)程。見(jiàn)圖3。同時(shí)通過(guò)CytoHubba插件中的MCC算法分析濟(jì)川煎成分-便秘靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)中的每個(gè)節(jié)點(diǎn)，篩選排名前10的靶點(diǎn)。顏色從紅到黃代表該靶點(diǎn)的重要程度遞減，依次為JUN、MAPK3、TP53、FN1、MAPK1、TIMP1、ALB、ESR1、VEGFA、TGFB1。見(jiàn)圖4。

2.4 GO富集功能分析和KEGG通路富集分析

運(yùn)用R（4.0.3）軟件及ClusterProfiler程輯包對(duì)164個(gè)交集靶點(diǎn)進(jìn)行GO富集功能分析和KEGG通路富集分析。主要參與的生物過(guò)程（Biological Process，BP）包括對(duì)脂多糖的反應(yīng)（Response to Lipopolysaccharide）、對(duì)細(xì)菌來(lái)源分子的反應(yīng)（Re-sponse to Molecule of Bacterial Origin）、對(duì)氧化應(yīng)激的反應(yīng)（Response to Oxidative Stress）、對(duì)金屬離子的響應(yīng)（Response to Metal Ion）、對(duì)營(yíng)養(yǎng)水平的反應(yīng)（Response to Nutrient Levels）、細(xì)胞對(duì)化學(xué)應(yīng)激的反應(yīng)（Cellular Response to Chemical Stress）。見(jiàn)圖5-1。所涉及的分子功能（Molecular Function，MF）主要有蛋白酶結(jié)合（Protease Binding）、血紅素結(jié)合（Heme Binding）、抗氧化活性（Antioxidant Activity）、Dna結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合（Dna-Binding Transcription Factor Binding）、Rna聚合酶ii特異性dna結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合（Rna Polymerase Ii-Specific Dna-Binding Transcription Factor Binding）、四吡咯結(jié)合（Tetrapyrrole Binding）。見(jiàn)圖5-2。所涉及的細(xì)胞組分（Cell Component，CC）主要有膜筏（Membrane Raft）、膜微區(qū)（Membrane Microdomain）、膜區(qū)域（Membrane Region）、囊泡腔（Vesicle Lumen）、Rna聚合酶ii轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)復(fù)合物（Rna Polymerase Ii Transcription Regulator Complex）、分泌顆粒腔（Secretory Granule Lumen）。見(jiàn)圖5-3。參與的通路主要有藥物代謝-細(xì)胞色素P450（Drug Metabolism-Cytochrome P450）、細(xì)胞色素P450對(duì)異生素的代謝（Metabolism of Xenobiotics by Cytochrome P450）、視黃醇代謝（Retinol Metabolism）、酪氨酸代謝（Tyrosine Metabolism）、藥物代謝-其他酶（Drug Metabolism-Other Enzymes）、類(lèi)固醇激素生物合成（Steroid Hormone Biosynthesis）。見(jiàn)圖5-4。

2.5 中藥-化學(xué)成分-便秘疾病靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建

運(yùn)用Cytoscape 3.8.0軟件構(gòu)建中藥-化學(xué)成分-便秘疾病靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)。該圖中共包含267個(gè)節(jié)點(diǎn)，574條邊。見(jiàn)圖6。長(zhǎng)方形節(jié)點(diǎn)代表中藥，不同顏色的圓形節(jié)點(diǎn)代表化學(xué)成分，菱形節(jié)點(diǎn)代表便秘疾病靶點(diǎn)。其中A1為當(dāng)歸、牛膝、肉蓯蓉、枳殼共有化學(xué)成分;B1為當(dāng)歸、牛膝、升麻共有化學(xué)成分;C1為牛膝、肉蓯蓉共有化學(xué)成分;D1為澤瀉、升麻共有化學(xué)成分。節(jié)點(diǎn)的面積代表其度數(shù)，即面積越大，說(shuō)明該節(jié)點(diǎn)越重要。

通過(guò)Cytoscape 3.8.0軟件分析得到核心化學(xué)成分及核心疾病靶點(diǎn)。濟(jì)川煎化學(xué)成分連接度（Degree）中連接度最高為槲皮素（連接度：142），預(yù)測(cè)其為濟(jì)川煎治療便秘的主要成分，其次為山柰酚、漢黃芩素、β-谷甾醇、柚皮素、黃芩素。便秘靶點(diǎn)連接度中連接度最高為PTGS2（連接度：24），預(yù)測(cè)其為濟(jì)川煎治療便秘的主要靶點(diǎn)，其次為PTGS1、NCOA2、SCN5A、ADRB2、AR。

3 討論

便秘是常見(jiàn)的健康問(wèn)題之一，它會(huì)引起患者的不適，影響患者的生命質(zhì)量[12]。便秘的癥狀多樣，常隨著患者年齡的增長(zhǎng)而增加，不僅會(huì)引起不適，還會(huì)引起焦慮、腹脹、嘔吐、腸梗阻和穿孔等并發(fā)癥，有病例報(bào)道其甚至可能導(dǎo)致肺栓塞[13]。

研究提示中藥復(fù)方相比于導(dǎo)瀉藥在便秘癥狀改善方面具有更大的潛力。顧盡暉等[14]研究發(fā)現(xiàn)，濟(jì)川煎可改善結(jié)腸慢傳輸性便秘模型大鼠的癥狀，其機(jī)制一方面為增加大鼠胃腸神經(jīng)遞質(zhì)含量、胃腸組織Cajal間質(zhì)細(xì)胞數(shù)量，加快胃腸信息轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而加快胃腸平滑肌蠕動(dòng)，促進(jìn)腸道內(nèi)容物通過(guò)，縮短排便時(shí)間;另一方面濟(jì)川煎可能通過(guò)抑制腸道水分的吸收，增加糞便含水量，從而刺激胃腸蠕動(dòng)，起到緩解便秘的作用。楊穎等[15]研究發(fā)現(xiàn)，慢傳輸性便秘模型大鼠經(jīng)濟(jì)川煎治療后，其首粒黑便時(shí)間顯著減少，糞便干濕重百分比也顯著下降，P物質(zhì)（SP）顯著增加，血管活性腸肽（VIP）顯著減少，并且大腸埃希菌含量顯著降低，雙歧桿菌和乳酸菌含量則顯著升高，說(shuō)明濟(jì)川煎對(duì)STC大鼠具有調(diào)節(jié)腸道菌群平衡和促進(jìn)排便的作用。張雙喜等[16]研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)于老年慢性功能性便秘患者，服用琥珀酸普蘆卡必利片加濟(jì)川煎相較于單純服用琥珀酸普蘆卡必利片，全胃腸排出率、胃排空率、血清5-HT，SP含量均明顯升高，血清NO含量明顯降低，乳桿菌、雙歧桿菌數(shù)量均明顯升高，酵母菌、腸桿菌數(shù)量均明顯降低，腸道菌群水平趨于穩(wěn)定。匡曉雯等[17]隨機(jī)將146例老年慢性功能性便秘患者分為2組，對(duì)照組服用乳果糖和普蘆卡必利，觀(guān)察組在此基礎(chǔ)上加服濟(jì)川煎，均持續(xù)治療1個(gè)月，觀(guān)察組排便時(shí)間評(píng)分、糞便性狀評(píng)分、排便費(fèi)力評(píng)分低于對(duì)照組;觀(guān)察組模擬排便時(shí)直腸壓力較前升高且高于對(duì)照組，2組初始閾值、排便閾值及最大耐受閾值均降低，且觀(guān)察組低于對(duì)照組。

本研究對(duì)濟(jì)川煎中當(dāng)歸、牛膝、肉蓯蓉、澤瀉、升麻、枳殼共6味中藥的有效成分進(jìn)行分析，通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法初步篩選出濟(jì)川煎調(diào)治便秘疾病的活性成分主要為槲皮素、山柰酚、漢黃芩素、β-谷甾醇、柚皮素、黃芩素等。槲皮素能夠顯著增加結(jié)腸慢傳輸型便秘模型大鼠的排糞量，其機(jī)制與通過(guò)乙酰膽堿受體（mAChRs）調(diào)節(jié)腸胃平滑肌細(xì)胞的蠕動(dòng)功能，并促進(jìn)其分泌黏蛋白有關(guān)[18]。山柰酚具有抑制PGE2和NO釋放的能力，并能中和自由基，降低編碼iNOS和COX-2的mRNA的表達(dá)水平，減輕炎癥介質(zhì)腫瘤壞死因子（Tumor Necrosis Factor，TNF）-α造成的細(xì)胞損傷，改善腸道穩(wěn)態(tài)[19]。漢黃芩素能夠顯著下調(diào)LPS誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞中典型炎癥介質(zhì)白細(xì)胞介素（Interleukin，IL）-6和IL-1β的分泌，減少周?chē)M織中的核因子κB的表達(dá)，改善腸道炎癥，維持腸道內(nèi)穩(wěn)態(tài)[20]。β-谷甾醇能夠以濃度依賴(lài)的方式降低結(jié)腸炎小鼠腸道組織中TNF-α，IL-6和IL-1β的水平，并顯著增加腸上皮細(xì)胞中抗菌肽的表達(dá)，降低腸道炎癥病原菌的存活率，減輕炎癥對(duì)腸道環(huán)境的干擾[21]。柚皮素可調(diào)節(jié)血清中胃腸代謝相關(guān)成分的產(chǎn)生。研究提示柚皮素緩解便秘癥狀的機(jī)制可能與上調(diào)LOP誘導(dǎo)便秘小鼠的Cajal間質(zhì)細(xì)胞（ICC）標(biāo)志物（c-Kit和SCF）和AQP3的表達(dá)增加有關(guān)[22]。黃芩素通過(guò)作用于cMAP途徑，刺激大鼠結(jié)腸黏膜的Cl（-）分泌，從而引起I（sc）響應(yīng)，以激活腸道神經(jīng)系統(tǒng)，促進(jìn)平滑肌運(yùn)動(dòng)改善大鼠便秘癥狀[23]。

綜合中藥-化學(xué)成分-便秘疾病靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)及交集靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)，預(yù)測(cè)濟(jì)川煎調(diào)治便秘疾病的異常靶點(diǎn)主要為PTGS2、PTGS1、NCOA2、SCN5A、ADRB2。環(huán)氧合酶1（COX-1/PTGS1）的表達(dá)及其主要代謝產(chǎn)物內(nèi)源性前列腺素（PGs），通過(guò)調(diào)節(jié)黏膜完整性和消化道的各種功能改善排便情況[24]。環(huán)氧合酶2（COX-2/PTGS2）的表達(dá)及其主要代謝產(chǎn)物前列腺素E2（PGE2）通過(guò)調(diào)節(jié)結(jié)直腸收縮功能以助于調(diào)節(jié)排便[25]。Wnt3a是Wnt信號(hào)分子家族中的一個(gè)重要成員，已被證明能促進(jìn)成肌細(xì)胞的增殖和分化[26]。Wnt3a表達(dá)下調(diào)抑制了肌源性祖細(xì)胞從增殖向肌源性分化的轉(zhuǎn)變，從而導(dǎo)致平滑肌細(xì)胞（Smooth Muscle Cell，SMC）成熟延遲[27]。NCOA2通過(guò)同時(shí)上調(diào)Wnt/β-catenin的抑制劑和下調(diào)刺激劑來(lái)抑制Wnt/β-catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，以改善SMC功能，進(jìn)而調(diào)節(jié)排便[28]。SMC和Cajal間質(zhì)細(xì)胞（ICC）上的電壓門(mén)控機(jī)械敏感性鈉通道由SCN5A編碼，可調(diào)控肌細(xì)胞收縮，控制腸蠕動(dòng)，進(jìn)而改善便秘癥狀[29]。β（2）-腎上腺素受體（ADRB2）能夠介導(dǎo)多巴胺誘導(dǎo)的大鼠結(jié)腸遠(yuǎn)端離子遷移，引起細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度改變，促進(jìn)腸蠕動(dòng)及抑制胃腸道水分吸收，進(jìn)而改善便秘癥狀[30]。

綜上所述，本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)辦法，對(duì)“濟(jì)川煎-有效成分-便秘疾病靶點(diǎn)”進(jìn)行多維度分析，初步探究了濟(jì)川煎治療便秘疾病的潛在機(jī)制過(guò)程，體現(xiàn)了中藥方劑多靶點(diǎn)聯(lián)合干預(yù)的作用特點(diǎn)，為進(jìn)一步探究濟(jì)川煎治療便秘的機(jī)制提供了新研究方向，也為濟(jì)川煎治療便秘的臨床應(yīng)用提供了理論依據(jù)。但同時(shí)因網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法的局限性[31]，以及復(fù)方中藥用量配比及中藥煎煮后有效成分可能發(fā)生的變化，因此仍須進(jìn)一步的藥理及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，以明確濟(jì)川煎對(duì)于便秘疾病主要的調(diào)控靶點(diǎn)。

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（2021-01-11收稿 本文編輯：魏慶雙）