梁文琳，吳彩霞，林泳儀，朱海燕，楊文康，桂 林

(廣州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廣東 廣州 510006)

化橘紅為蕓香科植物化州柚Citrus grandis Tomentosa或柚Citrus grandis(L.)Osbeck的未成熟或近成熟的干燥外層果皮，其味苦、辛、溫、歸肺脾經(jīng)，具有散寒、燥濕、利氣、消痰的功效，用于風(fēng)寒咳嗽、喉癢痰多、食積傷酒、嘔惡痞悶等[1-2]?！侗窘?jīng)逢原》：“橘紅專主肺寒咳嗽多痰，虛損方多用之，然久嗽氣泄，又非所宜”[3]。李時珍的《本草綱目》中有記載：“橘紅佳品，其瓤內(nèi)有紅白之分，利氣、化痰、止咳功倍于它藥。其功愈陳愈良”[4]。柚皮苷的提取工藝主要為有機(jī)溶劑提取法、熱水提取法、堿性稀醇或堿性水提取法、系統(tǒng)溶劑提取法、超聲波提取法和微波提取法、超濾法等[5]。因為超聲提取法提取柚皮苷更加方便、快捷，故本次實驗采用超聲波提取法對化橘紅中的柚皮苷進(jìn)行提取。本實驗先將化橘紅果實按照設(shè)置的軟化條件進(jìn)行操作，先進(jìn)行不同的單因素實驗，再進(jìn)行兩個因素的搭配，分別探究一下不同條件會對柚皮苷的含量造成什么影響。

1 實 驗

1.1 材料與儀器

化橘紅果實，購買于廣東省化州市。

柚皮苷標(biāo)準(zhǔn)品(含量95%)；甲醇(分析純)；水(超純水)；石油醚(60～90 ℃)。

紫外分光光度計；電子分析天平；超聲波細(xì)胞破碎儀；恒溫水浴鍋；電熱鼓風(fēng)干燥箱。

1.2 實驗方法

1.2.1 樣品溶液的制備

稱取待測樣品0.2 g ，加50 mL 石油醚浸泡于錐形瓶中，超聲波提取30 min ，放涼過濾，棄去石油醚，揮發(fā)風(fēng)干，接著加入50 mL 甲醇，繼續(xù)超聲波提取30 min ，放涼過濾，棄去濾渣，剩余濾液加甲醇定容至 50 mL 容量瓶。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制

用電子分析天平精密稱取標(biāo)準(zhǔn)品 10 mg ，加適量甲醇溶解，定容至100 mL的容量瓶內(nèi)，配置成0.10 mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

采用移液槍分別吸取 0 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL于 10 mL容量瓶內(nèi)，再依次加入 1 mL的10%的硝酸鋁溶液，最后加適量甲醇定容至刻度，混勻后靜置15分鐘，然后用紫外分光光度計在384 nm下測其吸光度。

以所測得的標(biāo)準(zhǔn)柚皮苷濃度為橫坐標(biāo)，所測得的吸光值為縱坐標(biāo)，建立線性回歸方程，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.4 蒸汽溫潤法

(1)單因素實驗

分別對蒸汽溫潤的溫度和蒸汽溫潤的時間兩個因素設(shè)置不同的梯度實驗，各因素設(shè)置的梯度實驗。溫潤的溫度分別設(shè)置為45、50、55、60、65 ℃；溫潤的時間分別設(shè)置為5、6、7、8、9 h。

分別進(jìn)行單因素實驗，得到最佳軟化條件。以上兩個因素的影響實驗均進(jìn)行3次平行實驗，最終數(shù)據(jù)取其平均值。

(2)兩因素優(yōu)化實驗

在單因素優(yōu)化實驗的基礎(chǔ)上，對蒸汽溫潤的溫度和蒸汽溫潤的時間兩個因素來進(jìn)行三水平的實驗，設(shè)置的實驗因素水平表見表1。

表1 蒸汽溫潤法的實驗因素水平表

1.2.5 方法學(xué)考察

(1)精密度實驗

取一定量的0.01 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別連續(xù)在紫外分光光度計下測定6次，記錄結(jié)果，計算RSD值并記錄實驗結(jié)果。

(2)穩(wěn)定性實驗

取同一份樣品溶液，在紫外分光光度計下于15、30、45、60、75、90 min分別進(jìn)行測定，計算RSD值并記錄實驗結(jié)果。

(3)加樣回收率實驗

取6份已知含量樣品，分別加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)品，記錄實驗結(jié)果，并計算回收率和RSD值。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

以吸光度384 nm為縱坐標(biāo)、柚皮苷濃度為橫坐標(biāo),繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1，得到的線性回歸方程為y = 7.8929x+0.0028，相關(guān)系數(shù)r為0.9997，線性關(guān)系良好。

圖1 紫外分光光度384 nm下得到的柚皮苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 蒸汽溫潤法

2.2.1 蒸汽溫潤法的溫潤溫度與柚皮苷含量的關(guān)系

如圖2所示，在相同的提取條件下，柚皮苷的含量隨著蒸汽溫潤的溫度的變化而變化。在45～60 ℃時，柚皮苷的含量隨著溫潤溫度的增加而增加，在60 ℃時達(dá)到最高；在60～65 ℃時，柚皮苷的含量隨著溫潤溫度的增加而開始下降。

圖2 蒸汽溫潤法的溫潤溫度對柚皮苷含量的影響

2.2.2 蒸汽溫潤法的溫潤溫度與柚皮苷含量的關(guān)系

如圖3所示，在相同的提取條件下，柚皮苷的含量隨著蒸汽溫潤的時間的變化而變化。在實驗設(shè)定時間5～9 h內(nèi)，柚皮苷的含量一直隨著溫潤時間的增加而增加。

圖3 蒸汽溫潤法的溫潤時間對柚皮苷含量的影響

2.2.3 兩因素優(yōu)化實驗

表2 蒸汽溫潤法的柚皮苷優(yōu)化提取的兩因素優(yōu)化實驗

表3 蒸汽溫潤法的兩因素方差分析結(jié)果表

F檢驗結(jié)果表明，溫度之間的F值大于F0.01，說明溫潤的溫度之間達(dá)到極顯著水平，說明不同的溫度處理之間對柚皮苷含量有極顯著的影響；而時間之間的F值小于F0.05，說明溫潤的時間之間對柚皮苷含量的影響未達(dá)到顯著水平。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 精密度實驗結(jié)果

連續(xù)測定6次所得的OD值見表4，從實驗結(jié)果中，可以計算得到實驗中所測定的溶液的柚皮苷的吸光度(OD384)的RSD為0.192%；本次實驗結(jié)果表明，該實驗的精密度良好(n=6)。

表4 紫外分光光度計精密度實驗(n=6)

2.3.2 穩(wěn)定性實驗結(jié)果

穩(wěn)定性的實驗結(jié)果見表5，從實驗所得的OD值，我們通過計算該實驗的待測樣品溶液中柚皮苷的吸光度(384 nm)，得到其RSD為0.567%；實驗結(jié)果表明本次實驗的待測樣品溶液的穩(wěn)定性良好(n=6)，樣品中的柚皮苷在90 min內(nèi)是穩(wěn)定的。

表5 穩(wěn)定性實驗結(jié)果(n=6)

2.3.3 加樣回收率實驗結(jié)果

加樣回收重復(fù)測定6次，所得實驗結(jié)果見表6，所得的平均回收率為97.90%，RSD為1.02%(n=6)，故加樣回收效果良好。

表6 加樣回收率實驗結(jié)果(n=6)

3 結(jié) 論

本次實驗采用超聲波提取法對化橘紅中的柚皮苷進(jìn)行提取，蒸汽溫潤法設(shè)置了不同的溫潤時間和溫潤溫度，結(jié)果顯示在相同的提取條件下，柚皮苷的含量隨著蒸汽溫潤時間的變化而變化；在實驗設(shè)定時間5～9 h內(nèi)，柚皮苷的含量一直隨著溫潤時間的增加而增加的。而在相同的提取條件下，柚皮苷的含量隨著蒸汽溫潤的溫度的變化而變化的，在45～60 ℃時，柚皮苷的含量隨著溫潤溫度的增加而增加，在60 ℃時達(dá)到最高；在60～65 ℃時，柚皮苷的含量隨著溫潤溫度的增加而開始下降。各取兩個因素最好的三個水平進(jìn)行搭配，發(fā)現(xiàn)不同的溫度之間對柚皮苷的含量是有顯著影響的，但溫潤時間的對化橘紅中柚皮苷含量的影響并不顯著。根據(jù)所得的結(jié)果，筆者認(rèn)為蒸汽溫潤法的優(yōu)化可以主要選擇在溫度上，本實驗所得到的最佳工藝是溫潤溫度60 ℃，蒸汽溫潤的時間9 h。