張菡偌，白海

1甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅 蘭州 730000；2聯(lián)勤保障部隊(duì)第九四〇醫(yī)院全軍血液病中心

近年來，腫瘤的發(fā)病率仍然居高不下。腫瘤的發(fā)病是遺傳、自身免疫、微環(huán)境及誘因等共同影響的結(jié)果，機(jī)制十分復(fù)雜。新型藥物如免疫調(diào)節(jié)劑、分子靶向藥可以顯著改善腫瘤患者的生存率及預(yù)后。槲皮素是一種廣泛存在于蔬果、種子中的天然黃酮類化合物，呈黃色粉末狀固體，具有抗氧化、抗炎、抗過敏、抗病毒、抗腫瘤、抗突變、抗感染、改善糖尿病損害、保護(hù)神經(jīng)元等生理活性，已有大量研究表明槲皮素通過不同的信號通路發(fā)揮抗腫瘤作用。

1 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡抑制增殖

細(xì)胞凋亡是由細(xì)胞周期機(jī)制和多種信號途徑控制的程序性細(xì)胞死亡過程，主要途徑包括：線粒體途徑、死亡受體途徑、絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）、核心組蛋白的乙?；韧緩?，內(nèi)外刺激在細(xì)胞內(nèi)引起DNA損傷和應(yīng)激反應(yīng)，在各種信號傳導(dǎo)后，最終激活半胱氨酸蛋白酶家族（Caspases）促使凋亡發(fā)生［1-3］。

1.1 線粒體途徑其中研究最多的線粒體依賴途徑：B淋巴細(xì)胞瘤-2基因（B-cell lymphoma/leukemia 2，Bcl-2）家族由促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白組成，它們通常存在于線粒體膜上，線粒體膜功能紊亂或損傷后釋放細(xì)胞色素C，細(xì)胞色素C作用于Caspase家族上游的proCaspase-9、3、7等無活性酶原形式，最終激活Caspase-3。其中MCL-1是屬于Bcl-2蛋白家族的抗凋亡蛋白成員。研究表明，人類腫瘤細(xì)胞中MCL-1往往會發(fā)生過表達(dá)，這可能是腫瘤細(xì)胞對不良環(huán)境的適應(yīng)；Bcl-2-Associated X（Bax）是一種促凋亡蛋白，當(dāng)它在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)增加時(shí)產(chǎn)生凋亡小體，激活Caspase-3，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。有研究表明，槲皮素通過抑制腫瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)其凋亡發(fā)揮抗腫瘤作用。用不同濃度的槲皮素納米粒作用于培養(yǎng)24、48、72 h的MCF-7乳腺癌細(xì)胞系，發(fā)現(xiàn)1～100 μM濃度的槲皮素納米粒能顯著降低MCF-7細(xì)胞的活力、生長速率和集落形成；Bax、Caspase表達(dá)增加、Bcl-2表達(dá)降低，這提示槲皮素通過誘導(dǎo)凋亡抑制細(xì)胞增殖，對乳腺癌治療和預(yù)防具有重要意義［1］。有學(xué)者用槲皮素作用于人卵巢癌細(xì)胞系PA-1，發(fā)現(xiàn)槲皮素處理24 h后，PA-1細(xì)胞活力呈劑量依賴性下降；槲皮素處理的PA-1細(xì)胞中Bcl-2、Bcl-xl等抗凋亡分子減少，而Caspase-3、Caspase-9、Bid、Bad、Bax和細(xì)胞色素C等促凋亡分子增加，提示槲皮素可誘導(dǎo)線粒體介導(dǎo)的凋亡途徑，從而抑制轉(zhuǎn)移性卵巢癌細(xì)胞的生長［2］。

1.2 MAPK途徑MAPK通路可分為細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal-regulated protein kinase，ERK1/2）、p38 MAPK或c-Jun N端激酶/應(yīng)激激活蛋白激酶（c-Jun N-terminal kinase/stress-activated protein kinase，JNK/SAPK），其中p38和JNK被應(yīng)激等刺激激活，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；ERK1/2在激活時(shí)，視細(xì)胞性質(zhì)而起抗凋亡或促凋亡作用。有學(xué)者用槲皮素作用于人黑色素瘤細(xì)胞系A(chǔ)375SM和A375P，槲皮素呈濃度依賴性顯著降低A375SM細(xì)胞的活性和增殖，誘導(dǎo)其凋亡；而對另一細(xì)胞株A375P無影響，造成這種差異的原 因 目前尚不清楚［3］。Bax、p-JNK、p-p38及p-ERK1/2表達(dá)增加，聚ADP核糖聚合酶（cleaved poly-ADP ribose polymerase，PARP）和Bcl-2表達(dá)降低，表明槲皮素通過MAPK途徑與線粒體途徑誘導(dǎo)A375SM細(xì)胞凋亡。

1.3 其他途徑Survivin是凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein，IAP）家族的新成員，是迄今發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的凋亡抑制因子，研究凋亡抑制因子對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后具有重要意義［4］。Survivin在胎兒及許多惡性腫瘤中呈高表達(dá)，而在正常組織中呈低表達(dá)或不表達(dá)。陳仲巍等［5］以人鼻咽癌細(xì)胞系CNE2為研究對象，結(jié)果發(fā)現(xiàn)槲皮素不僅呈濃度依賴性誘導(dǎo)CNE2細(xì)胞凋亡，也呈濃度依賴性阻遏Wnt信號通路、下調(diào)其靶標(biāo)蛋白c-Myc和Survivin的表達(dá)，進(jìn)而抑制CNE2細(xì)胞的惡性增殖。米靜等［4］用槲皮素作用于人腺樣囊性癌細(xì)胞系A(chǔ)CC-M，結(jié)果表明槲皮素能夠?qū)⒓?xì)胞特異性地阻滯于G2/M期，誘導(dǎo)其凋亡，且呈時(shí)間-劑量依賴性關(guān)系，隨著藥物濃度增加，ACC-M細(xì)胞中Survivin mRNA的表達(dá)水平均呈不同程度的降低，提示槲皮素可能通過下調(diào)Survivin的表達(dá)水平而發(fā)揮抗腺樣囊性癌的作用。

Janus激酶（Janus kinase 2，JAK2）是一種非受體酪氨酸激酶，是Janus激酶家族的一員，參與了許多調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的信號通路，以前的研究表明JAK2在許多腫瘤中呈高表達(dá)，抑制JAK2信號通路可以抑制腫瘤的生長。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)槲皮素納米粒通過抑制JAK 2誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞凋亡、自噬及抗增殖作用，而JAK2抑制癌細(xì)胞的凋亡和自噬作用是通過激活Caspase-3，抑制細(xì)胞周期蛋白D1（Cyclin-D1）和雷帕霉素的哺乳動物靶蛋白（mTOR）信號轉(zhuǎn)導(dǎo)來完成的，這三者受轉(zhuǎn)錄激活因子3/5（signal transducer and activator of transc-ription，STAT3/5）和磷脂酰肌苷3激酶/蛋白激酶（phosphatidylinositide 3-kinase/protein kinases，PI3K/AKT）信 號 通 路 調(diào) 控［6］。JAK2能激活STATs，誘導(dǎo)炎癥、增殖和侵襲。STAT3的本構(gòu)性激活［6］導(dǎo)致細(xì)胞增殖無限制地增加，凋亡減少，與多種癌癥的發(fā)生密切相關(guān)，敲除JAK2會導(dǎo)致STAT3和STAT5失活，抗凋亡基因bcl-2明顯下調(diào)，促凋亡基因Bax和Bad上調(diào)，Cytoc和Apaf-1的活性增加，從而導(dǎo)致Caspase-3上調(diào)。研究證明，槲皮素通過抑制PI3K/AKT/mTOR和STAT3信號通路誘導(dǎo)原發(fā)性滲出淋巴瘤細(xì)胞凋亡和自噬［7-8］。

調(diào)控癌細(xì)胞增殖的Wnt信號通路在細(xì)胞增殖、分化、細(xì)胞極化、細(xì)胞轉(zhuǎn)移、基因表達(dá)調(diào)控等過程中發(fā)揮著重要的作用［8］。膜結(jié)合內(nèi)皮硫酸酯酶作用于硫酸類肝素葡萄糖胺聚糖及與甘草聚糖相關(guān)的整體膜硫酸肝素蛋白聚糖，使得Wnt信號與7次跨膜卷曲蛋白受體和低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白（LRP5/6）結(jié)合形成Wnt-Fz-LRP6復(fù)合物，觸發(fā)鷹架蛋白的招募及LRP5/6的磷酸化，磷酸化的LRP5/6識別并結(jié)合Axin，使得Axin介導(dǎo)的β-catenin磷酸化及降解受阻，胞質(zhì)中的β-catenin升高并大量進(jìn)入胞核，激活T細(xì)胞因子與淋巴增強(qiáng)因子復(fù)合物進(jìn)而促進(jìn)下游靶基因Cyclin D1應(yīng)答；下調(diào)膜結(jié)合內(nèi)皮硫酸酯酶使Wnt信號缺失，胞質(zhì)中的β-catenin與Axin、APC、GSK3和CK1形成復(fù)合物，CK1和GSK3相繼磷酸化β-catenin，促進(jìn)β-catenin泛素化和蛋白酶體降解，阻止β-catenin進(jìn)入細(xì)胞核，進(jìn)而抑制Wnt靶基因應(yīng)答。有學(xué)者用姜黃素和槲皮素處理大腸癌的多種細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)槲皮素下調(diào)了細(xì)胞周期蛋白Cyclin D1、COX2、DvL2和Axin2，它們與βcatenin的降低有關(guān)，提示槲皮素通過調(diào)節(jié)DvL2和Axin2等信號轉(zhuǎn)導(dǎo)影響Wnt/β-catenin信號通路，進(jìn)而降低β-catenin，從而抑制Cyclin D1等細(xì)胞增殖基因。miRNAs是一類長度約為20～22個(gè)核苷酸的小單鏈非編碼RNA分子，與增殖、凋亡及基因表達(dá)的負(fù)調(diào)控等生物學(xué)行為及惡性腫瘤的病因有關(guān)［8］。研究發(fā)現(xiàn)，槲皮素可降低口腔鱗癌細(xì)胞活性、增加細(xì)胞凋亡率，上調(diào)miR-22的表達(dá)，抑制Wnt1和β-catenin的表達(dá)，而WNT1是miR22的靶信號，敲除miR-22或使用抑制劑可以減弱槲皮素對口腔鱗癌細(xì)胞的抑制和凋亡作用，表明槲皮素可以通過誘導(dǎo)miR-22的表達(dá)并通過抑制Wnt1/βcatenin途徑進(jìn)而抑制口腔鱗癌的生長［9］。

2 抑制細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移

基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）是一類鋅離子依賴的蛋白水解酶，其在腫瘤形成中發(fā)揮重要作用，其中MMP2和MMP9是蛋白溶解Ⅳ型膠原的兩種主要MMPs，通過促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)降解促進(jìn)腫瘤侵襲，人體也存在多種MMPs抑制劑，最重要的是基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑（tissue inhibitor of MMPs，TIMPs），多數(shù)藥物可通過不同的信號通路最終維持MMPs-TIMPs平衡，從而抑制腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移。研究發(fā)現(xiàn)，槲皮素通過下調(diào)MMP-2和MMP-9的表達(dá)來抑制人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U 251細(xì)胞的遷移和侵襲［10］。

鎳（Ni）是大氣中常見的污染物，被國際癌癥研究機(jī)構(gòu)認(rèn)定為人類致癌物。研究表明，Ni暴露激發(fā)了人肺癌細(xì)胞的侵襲潛能，Toll樣受體（toll-like receptors，TLRs）是一種跨膜受體家族，可幫助免疫系統(tǒng)識別病原體相關(guān)分子，在宿主防御系統(tǒng)中起重要作用，但是TLRs的激活也可能導(dǎo)致癌癥的發(fā)展，Ni通過上調(diào)TLR4及其配體髓系分化因子88（Myd88）的表達(dá)，激活下游轉(zhuǎn)錄因子NF-κB，進(jìn)而增強(qiáng)人肺癌細(xì)胞A549和H1299的侵襲能力。有學(xué)者用5種多酚類化合物（其中包括槲皮素）作用于H1975和A549肺癌細(xì)胞株，發(fā)現(xiàn)在5 μm時(shí)，Ni對H1975和A549細(xì)胞的遷移和侵襲作用受到顯著抑制。5種化合物對Ni誘導(dǎo)的A549細(xì)胞分泌的IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-10等細(xì)胞因子也有明顯抑制作用，其中槲皮素的效價(jià)最高。槲皮素抑制了A549細(xì)胞TLR4和Myd88的mRNA和蛋白表達(dá)，降低了A549細(xì)胞中IKKβ和IκB的磷酸化，降低了p65（NF-κB）的核表達(dá)水平，降低了與侵襲相關(guān)的基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-9的表達(dá)，提示槲皮素通過TLR4/NF-κB信號通路對Ni誘導(dǎo)的人肺癌細(xì)胞侵襲發(fā)揮潛在預(yù)防作用［11］。

MiR-16過表達(dá)會影響腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲及MMP-9和MMP-2水平，靶基因HOXA10的修復(fù)作用則減弱了miR-16對口腔癌的影響。有學(xué)者用槲皮素作用于某醫(yī)院口腔癌患者的病理組織，結(jié)果miR-16的表達(dá)增強(qiáng)，HOXA10水平降低；miR-16的過表達(dá)靶向HOXA10及其敲除口腔癌細(xì)胞的進(jìn)展，阻斷細(xì)胞的存活、遷移和侵襲，表明槲皮素通過增強(qiáng)miR-16表達(dá)，敲除靶基因HOXA10來阻斷口腔癌細(xì)胞的進(jìn)展［12］。

腫瘤干細(xì)胞（cancer stem cells，CSCs）與癌癥進(jìn)展、放化療抵抗及復(fù)發(fā)密切相關(guān)，CD44、CD133和其他幾種干細(xì)胞標(biāo)記在癌細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞亞群和免疫刺激細(xì)胞等多種細(xì)胞中已有描述，而CD44+和CD44+/α2β1Hi/CD133+表型，約占前列腺腫瘤細(xì)胞總數(shù)的0.1%。MK是一種多功能肝素結(jié)合的細(xì)胞因子或生長因子，具有抗凋亡、促進(jìn)遷移、促進(jìn)血管生成等多種生物學(xué)功能，MK在多種癌癥中高表達(dá)，與預(yù)后不良相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)使用槲皮素對PC3前列腺癌細(xì)胞和CD44+/CD133+干細(xì)胞有顯著的細(xì)胞毒性作用，與單獨(dú)治療相比，MKsiRNA和槲皮素聯(lián)合應(yīng)用更有效地降低細(xì)胞存活率，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并導(dǎo)致G1期細(xì)胞阻滯；MK基因敲除可明顯增強(qiáng)槲皮素對CD44+/CD133+遷移的抑制作用。此外，聯(lián)合治療還可抑制PI3K、AKT和ERK1/2的磷酸化，降低p38、ABCG2和NF-κB的蛋白表達(dá)；表明MK可通過下調(diào)PI3K/AKT和MAPK/ERK途徑增強(qiáng)槲皮素對前列腺癌干細(xì)胞存活和遷移的影響，提示利用槲皮素進(jìn)行治療可能是針對CSCs復(fù)發(fā)、遷移和耐藥的重要策略［13］。CD44+/CD24-是乳腺癌干細(xì)胞的表面標(biāo)記物。有學(xué)者研究了槲皮素對CD44+/CD24-乳腺癌干細(xì)胞的影響，結(jié)果加入槲皮素后干細(xì)胞增殖、克隆受抑，相比對照組CyclinD1、BcL-2、m-TOR、p-m-TOR、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、雌激素受體（Estrogenreceptorα，ERα）的表達(dá)均下調(diào)，表明槲皮素通過PI3K/Akt/mTOR信號通路發(fā)揮抗乳腺癌干細(xì)胞作用。而ERα的下調(diào)可能與槲皮素誘導(dǎo)干細(xì)胞失活有關(guān)［14］。

甲狀旁腺激素受體1（parathyroid hormone receptor 1，PTHR1）是一種G蛋白偶聯(lián)受體，在轉(zhuǎn)移的組織和細(xì)胞中廣泛表達(dá)。有學(xué)者用槲皮素作用于骨肉瘤細(xì)胞系U2OS and Saos-2，結(jié)果細(xì)胞黏附、侵襲和遷移明顯減少，細(xì)胞活力降低；PTHR1、MMP-2和MMP-9的mRNA表達(dá)水平下調(diào)，而組織金屬蛋白酶抑制劑TIMP-1和TIMP-2的mRNA表達(dá)水平升高；PTHR1敲除后槲皮素抑制增殖和侵襲作用顯著增強(qiáng)，表明槲皮素通過抑制PTHR1抑制人轉(zhuǎn)移性骨肉瘤細(xì)胞的侵襲、黏附、增殖和遷移［15］。

3 逆轉(zhuǎn)抗腫瘤藥物耐藥性

目前化療已被廣泛應(yīng)用于癌癥治療，但多藥耐藥（multi-drug resistant，MDR）的出現(xiàn)是影響化療成功的最大障礙。順鉑是一種有細(xì)胞毒性的化療藥物，能破壞腫瘤細(xì)胞中的DNA，從而使細(xì)胞進(jìn)入凋亡程序。Bim蛋白是一種Bcl-2促凋亡蛋白家族成員，定位于細(xì)胞線粒體，正向調(diào)節(jié)細(xì)胞的凋亡進(jìn)程。翁旭東［16］研究了槲皮素對順鉑耐藥人膀胱癌細(xì)胞系T24的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明槲皮素能顯著促進(jìn)順鉑對耐藥T24細(xì)胞的殺傷活性和誘導(dǎo)凋亡活性，上調(diào)順鉑耐藥T24細(xì)胞中Bim蛋白的表達(dá)，當(dāng)用小干擾RNA抑制Bim基因的表達(dá)后，槲皮素的協(xié)同抗腫瘤效應(yīng)明顯減弱，表明Bim蛋白是順鉑耐藥膀胱癌細(xì)胞中的作用靶點(diǎn)。從而通過與Bak、Bax蛋白的相互作用促進(jìn)順鉑對腫瘤細(xì)胞線粒體膜孔道的開放，誘導(dǎo)細(xì)胞色素C和Smac/DIABLO從線粒體中釋放到細(xì)胞質(zhì)中，最終引起Caspase-9和Caspase-3活化。表明槲皮素能通過Bim-Bak/Bax途徑提高順鉑耐藥膀胱癌細(xì)胞對順鉑的敏感性。

腫瘤細(xì)胞能夠通過多種機(jī)制耐受抗腫瘤藥物，上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transformation，EMT）即是其中最為重要的一種。王艷麗等［17］用槲皮素作用于人肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌細(xì)胞系HCCC-9810，發(fā)現(xiàn)槲皮素、索拉菲尼、奧沙利鉑和多西他賽等均能夠劑量依賴地抑制HCCC-9810細(xì)胞的存活。選取2 μmol/L濃度的槲皮素，該濃度的槲皮素預(yù)處理HCCC-9810細(xì)胞能夠顯著上調(diào)其對上述三種抗腫瘤藥物的敏感性，下調(diào)HCCC-9810細(xì)胞中的間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)識物N-Cadherin和Vimentin的表達(dá)，上調(diào)上皮細(xì)胞標(biāo)識物ECadherin的表達(dá)。上皮來源的惡性腫瘤細(xì)胞（上述的膽管細(xì)胞癌來源于感官上皮，因此又稱為膽管上皮癌），一般會保留有一定的上皮細(xì)胞特征，在化療過程中，抗腫瘤藥物能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞EMT，使腫瘤細(xì)胞具有部分間質(zhì)細(xì)胞的特性，最終顯著上調(diào)細(xì)胞的腫瘤能力。槲皮素能夠通過抑制膽管癌細(xì)胞系EMT上調(diào)抗腫瘤的效能，在肝臟膽管細(xì)胞癌治療中具有潛在應(yīng)用價(jià)值。

ATP結(jié)合盒（ATP-binding cassette，ABC）轉(zhuǎn)運(yùn)體的過表達(dá)，也是MDR的機(jī)制之一。如P-糖蛋白（P-gp/ABCB1）和多藥耐藥相關(guān)蛋白（MRPs/ABCCs），限制了化療藥物的長期有效使用。為了提高腫瘤細(xì)胞的化療敏感性，有學(xué)者用槲皮素作用于人肝癌細(xì)胞系BEL-7402和多藥耐藥細(xì)胞系BEL/5-Fu，結(jié)果經(jīng)槲皮素處理的BEL/5-Fu細(xì)胞系其ABCB1、ABCC1和ABCC2的mRNA和蛋白表達(dá)下調(diào)，ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在化療藥物的分布和消除及肝癌的固有耐藥和獲得性耐藥中起主要調(diào)節(jié)作用，這些轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在肝癌中的過度表達(dá)是產(chǎn)生多藥耐藥的重要機(jī)制之一，它能促進(jìn)多種抗癌藥物從腫瘤細(xì)胞中流出［18］。

王靜等［19］用槲皮素作用于PC9/GR（吉非替尼獲得性耐藥的NSCLC細(xì)胞株），結(jié)果發(fā)現(xiàn)槲皮素可明顯抑制PC9/GR細(xì)胞增殖，并呈濃度依賴性關(guān)系，與對照組相比，可促進(jìn)細(xì)胞凋亡，Stat3蛋白的活化水平下降，其下游的凋亡相關(guān)蛋白Mcl-1表達(dá)亦減弱，表明槲皮素對PC9/GR細(xì)胞具有較強(qiáng)的抗腫瘤作用，作用機(jī)制可能與STAT3/Mcl-1途徑介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。STAT3在細(xì)胞的增值、分化、存活、炎癥反應(yīng)和血管生成等多個(gè)進(jìn)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，STAT3的活化與耐藥密切相關(guān)，與敏感細(xì)胞相比，耐藥細(xì)胞中STAT3的活性更強(qiáng)，抑制STAT3的活性可使耐吉非替尼的NSCLC細(xì)胞致敏。

晚期糖基化終產(chǎn)物受體（receptor for advanced glycation end products，RAGE）在不同的信號級聯(lián)介導(dǎo)的胰腺癌發(fā)生中起著重要作用，它可觸發(fā)胰腺癌中的吉西他濱耐藥。有學(xué)者用槲皮素作用于普通的胰腺癌細(xì)胞株MIA Paca-2和穩(wěn)定耐吉西他濱胰腺癌細(xì)胞株MIA Paca-2GEMR，結(jié)果顯示MIA Paca-2和MIA Paca-2GEMR細(xì)胞中RAGE特異性siRNA轉(zhuǎn)染能下調(diào)RAGE的表達(dá)，通過抑制PI3K/AKT/mTOR通路，從而抑制細(xì)胞凋亡、自噬和地西他濱誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用。此外，在RAGE基因敲除細(xì)胞中，MDR1的表達(dá)也受到抑制，提示抑制RAGE能阻止吉西他濱外排。表明槲皮素具有類似于RAGE沉默的顯著效果，它能有效地抑制RAGE的表達(dá)［20］。研究表明，槲皮素對活細(xì)胞中CYP1B1具有較強(qiáng)的抑制作用，其可將CYP1B1高表達(dá)三陰性MDA-MB-468乳腺癌細(xì)胞的順鉑耐藥完全逆轉(zhuǎn)［21］。

4 抗腫瘤治療協(xié)同作用

腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（TNF-related apoptosis-inducing ligand，TRAIL）是一種具有選擇性殺傷癌細(xì)胞的抗腫瘤藥物。戴卓睿等［22］探討了槲皮素對發(fā)現(xiàn)TRAIL抗前列腺癌細(xì)胞系PC3作用的影響，TRAIL聯(lián)合槲皮素對PC3的細(xì)胞活力抑制率和凋亡誘導(dǎo)率顯著高于TRAIL單治療組，TRAIL聯(lián)合槲皮素治療組SIRT1表達(dá)水平顯著低于TRAIL單治療組，TRAIL聯(lián)合槲皮素治療組DR5表達(dá)水平、ROS水平及Caspase-8、Caspase-3活化水平均顯著高于TRAIL單治療組，TRAIL+槲皮素+SIRT1質(zhì)粒組及TRAIL+槲皮素+N-乙酰半胱氨酸組PC3的細(xì)胞活力抑制率和凋亡誘導(dǎo)率均顯著低于TRAIL聯(lián)合槲皮素組。有學(xué)者用槲皮素聯(lián)合TRAIL處理胰腺癌細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)其通過改變線粒體外膜通透性促進(jìn)TRAIL誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，敲除BH3-only蛋白Bid基因后TRAIL/槲皮素誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡顯著受到抑制則證實(shí)了這一點(diǎn)。細(xì)胞因子樣抑制蛋白（cytokine like inhibitory protein，cFLIP）的過表達(dá)可以有效地挽救TRAIL/槲皮素誘導(dǎo)的胰腺癌細(xì)胞凋亡，槲皮素以劑量依賴的方式激活c-jun N端激酶（JNK），一方面JNK的激活使胰腺癌細(xì)胞對TRAIL誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡敏感，另一方面可誘導(dǎo)cFLIP的蛋白酶體降解，使得cFLIP表達(dá)水平呈劑量依賴性下降。

γδT細(xì)胞正在作為一種免疫治療藥物進(jìn)行臨床試驗(yàn)，研究發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞對γδT細(xì)胞單獨(dú)治療的敏感性較低，需聯(lián)合其他藥物提高γδT細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性。張紅萍等［23］發(fā)現(xiàn)槲皮素處理肝癌細(xì)胞系Huh7能顯著增強(qiáng)γδT的細(xì)胞毒性，然而在Huh7細(xì)胞中轉(zhuǎn)染MCL-1質(zhì)粒后，槲皮素對γδT細(xì)胞的協(xié)同效應(yīng)受到明顯抑制；γδT細(xì)胞+槲皮素組Huh7細(xì)胞Caspase-9、Caspase-3的活化及細(xì)胞色素C的釋放均顯著高于γδT細(xì)胞組和槲皮素+γδT細(xì)胞+MCL-1質(zhì)粒組，表明槲皮素通過下調(diào)Huh7細(xì)胞中MCL-1的表達(dá)來增強(qiáng)γδT細(xì)胞對肝癌細(xì)胞系Huh7的殺傷活性。

5-FU（5-氟尿嘧啶）是一種DNA致?lián)p藥物，能干擾腫瘤細(xì)胞DNA的合成，并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞進(jìn)入凋亡程序。c-Jun是一種轉(zhuǎn)錄因子蛋白，屬于核轉(zhuǎn)錄激活蛋白1家族成員，受上游分子JNK的調(diào)節(jié)。當(dāng)腫瘤細(xì)胞的DNA受5-FU等藥物損傷時(shí)，JNK蛋白會發(fā)生活化從而激活c-Jun，使之磷酸化。研究表明，磷酸化的c-Jun不僅能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移、抑制凋亡，而且c-Jun的高度磷酸化是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞發(fā)生化療抵抗的重要機(jī)制［18-19］。黃曄等［24］研究表明，槲皮素可通過c-Jun/ATF2/Bcl-xL途徑增強(qiáng)5-FU對胃癌細(xì)胞線粒體途徑凋亡的誘導(dǎo)活性。

5 減少化療不良反應(yīng)

槲皮素是已知的具有心臟保護(hù)作用的自由基清除劑。有學(xué)者使用槲皮素干預(yù)經(jīng)阿霉素處理的轉(zhuǎn)染熒光素酶的人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞（ES-2-Luc）后發(fā)現(xiàn)與阿霉素單藥組相比，槲皮素+阿霉素組的cTnI和CKM水平降低，首次給藥周期后，阿霉素治療組的小鼠左室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection fraction，LVEF）和 縮短分 數(shù)（fractional shortening，F(xiàn)S）明顯下降，表明槲皮素對阿霉素誘導(dǎo)的心臟毒性有明顯的拮抗作用［25］。研究表明，槲皮素可通過促進(jìn)下游的Akt磷酸化，進(jìn)而抑制肌Myostatin的表達(dá)，對地塞米松引起的肌肉萎縮具有保護(hù)作用［26］。研究表明，5-Fu治療組抗氧化酶活性（GPx和GSH）的下降提示5-Fu所致氧化應(yīng)激對肝的病理生理有影響，而槲皮素通過提升酶和非酶抗氧化劑的活性來改善氧化應(yīng)激所致肝毒性。

6 其他

血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是影響腫瘤血管生成的重要因素之一，它能夠顯著促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，新血管的形成和癌癥轉(zhuǎn)移。研究表明，槲皮素通過抑制VEGF的表達(dá)，抑制血管生成，進(jìn)而影響鼻咽癌NPC-039細(xì)胞的活性［27-28］。

細(xì)胞信號通路通過轉(zhuǎn)錄因子Nrf2對氧化還原信號做出反應(yīng)，Nrf2的激活對氧化損傷（H2O2）所致的毒性有保護(hù)作用，且支持細(xì)胞存活，通過激活存活基因促進(jìn)NF-κB p50易位到細(xì)胞核；在一些惡性血液學(xué)過程中，NF-κB對細(xì)胞內(nèi)氧化還原狀態(tài)敏感，受ROS和iNOS的調(diào)節(jié)，NF-κB的激活有助于轉(zhuǎn)化細(xì)胞的異常增殖和存活。研究發(fā)現(xiàn)，槲皮素在25 μm時(shí)對處理24 h的人白血病細(xì)胞NB4殺傷活性最強(qiáng)，可降低細(xì)胞核內(nèi)超氧化物歧化酶（SOD）、5-氧合酶（5-LOX）及Nrf2的含量。同時(shí)胞核中NFκB p65的含量增加，胞漿中含量減少，而其對胞漿和胞核中NF-κB p50水平均無明顯影響，表明槲皮素通過抗氧化損傷發(fā)揮對NB4細(xì)胞的殺傷作用［29］。

腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）是調(diào)控細(xì)胞能量代謝的關(guān)鍵分子，凋亡及自噬過程均受細(xì)胞內(nèi)能量代謝的調(diào)控，然而腫瘤細(xì)胞中常存在能量代謝紊亂和AMPK激活抑制。肖潔等［30］發(fā)現(xiàn)，槲皮素能夠活化HL-60細(xì)胞中AMPK，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)p-AMPK的表達(dá)增加，這一過程能夠被AMPK特異性的小分子抑制劑Compound C所阻斷。槲皮素+Compound C組細(xì)胞凋亡率、LC3Ⅱ/Ⅰ比值、p-AMPK的表達(dá)均低于單用槲皮素組。表明抑制AMPK的活性后，槲皮素誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、自噬的作用減弱，說明槲皮素通過提高AMPK的磷酸化水平，誘導(dǎo)HL-60的凋亡和自噬。

綜上所述，槲皮素為治療腫瘤提供了新的思路，無論是直接殺傷腫瘤細(xì)胞、逆轉(zhuǎn)耐藥、減低化療不良反應(yīng)，還是對已有治療方案發(fā)揮協(xié)同作用，均提示天然化合物或許存在更大的價(jià)值，需要進(jìn)一步研究。