鹽酸頭孢甲肟原料及制劑聚合物雜質(zhì)的分析方法

王利沙

摘要：目的：分析鹽酸頭孢甲肟原料及制劑聚合物雜質(zhì)的方法。方法：運(yùn)用高濃度溶液降解法制備鹽酸頭孢甲肟降解溶液，用高效凝膠色譜法（TSK G2000 SWxl）、柱切換-LC/MS法為鹽酸頭孢甲肟降解溶液聚合物質(zhì)雜質(zhì)進(jìn)行分離，并對結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定，評(píng)判高效凝膠色譜法分離聚合物雜質(zhì)的專屬性。用Kromasil100-5C18型色譜柱，按水-乙腈-冰醋酸為流動(dòng)相洗脫梯度，創(chuàng)建鹽酸頭孢甲肟聚合物的RP-HPLC剖析方法，借助二維色譜法、柱切換-LC/MS法分析專屬性，剖析實(shí)際供試品。結(jié)果：鹽酸頭孢甲肟降解物判斷為鹽酸頭孢甲肟脫第3位側(cè)鏈二聚體水解物。高效凝膠色譜法對鹽酸頭孢甲肟聚合物雜質(zhì)在分離時(shí)，容易遭受小分子雜質(zhì)影響，定量準(zhǔn)確性容易受到影響。RP-HPLC法對鹽酸頭孢甲肟聚合物雜質(zhì)分析時(shí)，可測定鹽酸頭孢甲肟二聚體，具有優(yōu)良的專屬性。結(jié)論：高效凝膠色譜法無法科學(xué)質(zhì)控鹽酸頭孢甲肟聚合物雜質(zhì)，創(chuàng)建反相色譜法剖析鹽酸頭孢甲肟聚合物雜質(zhì)具有優(yōu)良的專屬性，可用鹽酸頭孢甲肟降解溶液作為聚合物雜質(zhì)系統(tǒng)適用性溶液。

關(guān)鍵詞：鹽酸頭孢甲肟原料;制劑聚合物;雜質(zhì)

【中圖分類號(hào)】 R97 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A? ? ? 【文章編號(hào)】2107-2306（2022）04--01

β-內(nèi)酰胺類抗生素內(nèi)源性聚合物雜質(zhì)易誘發(fā)過敏反應(yīng)，人們用藥安全備受威脅，這類雜質(zhì)會(huì)在運(yùn)輸、存儲(chǔ)期間出現(xiàn)，藥物安全備受影響，需對β-內(nèi)酰胺類抗生素聚合物雜質(zhì)科學(xué)控制。葡聚糖凝膠G10（G10）色譜法、高效液相色譜法（HPSEC法）等均可在聚合物雜質(zhì)質(zhì)控應(yīng)用。聚合物分析技術(shù)發(fā)展下，聚合物質(zhì)控理念漸漸由控制聚合物總量發(fā)展向精準(zhǔn)控制指針性聚合物雜質(zhì)，鹽酸頭孢甲肟是第三代半合成頭孢菌素，主要用在治療敏感菌引起的肝膽系統(tǒng)位置的感染[1]。我國藥典最早采用G10凝膠色譜法開展聚合物雜質(zhì)控制，收載該品種，聚合物雜質(zhì)難以得到科學(xué)控制，未對其進(jìn)行控制。葡聚糖凝膠G10系統(tǒng)可有效分析聚合物雜質(zhì)，應(yīng)用期間漸漸出柱效低下，分離時(shí)間長，分離度不佳，容易遭受藥物輔料影響。HPSEC法即傳統(tǒng)葡聚糖凝膠G10系統(tǒng)升級(jí)技術(shù)，科學(xué)解決G10色譜系統(tǒng)柱效低下，但是這種方式分離聚合物雜質(zhì)峰受極性小分子雜質(zhì)影響較大，測定的聚合物雜質(zhì)含量較高，專屬性受影響較大。RP-HPLC法主要是測定藥物含量，研究要點(diǎn)是分析聚合物。前期研究發(fā)現(xiàn)：用RP-HPLC法對各類抗生素的聚合物雜質(zhì)展開分析，了解不同藥物指針性聚合物物質(zhì)，創(chuàng)建RP-HPLC法對聚合物雜質(zhì)進(jìn)行分析[2]。本研究中，用二維液相色譜法（2D-HPLC）、柱切換（LC/MSn）法研究HPSEC法分離聚合物雜質(zhì)的專屬性。分析創(chuàng)建RP-HPLC法質(zhì)控聚合物雜質(zhì)，對聚合物整體的含量進(jìn)行控制。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 HPSEC法

色譜柱：TSK-gel G2000SWxl;流動(dòng)相：A相是磷酸鹽緩沖液（pH 7.0），B相是乙腈，A-B（85：15）;流速0.8ml·min-1;檢測波長：231nm;柱溫：30℃;進(jìn)樣量：20μL。稀釋溶液：流動(dòng)相A;供試品溶液質(zhì)量濃度：3.0mg·mL-1。聚合物雜質(zhì)的分析采用HPSEC法。

1.2 RP-HPLC法

色譜柱：Kromasil 100-5C18（4.6mm×250mm，5μm）;流動(dòng)相：A相是水-乙腈-冰醋酸（93：7：1.7），B相是冰醋酸-乙腈（100：17），梯度洗脫：0-10.0minA相是100.0%，10.0-40.0minA相降低為0%，50.0-60.0min A相保持100%。流速1.0mL·min-1。柱溫：30℃;檢測波長：254nm。用于對鹽酸頭孢甲肟原料、制劑指針性聚合物雜質(zhì)進(jìn)行剖析。

1.3 2D-HPLC法

色譜系統(tǒng)I和HPSEC法相同，色譜系統(tǒng)2與RP-HPLC法相同。切換程序：①設(shè)置切換閥為A位置，用色譜系統(tǒng)1分離供試品，用色譜系統(tǒng)2預(yù)平衡RP-C18色譜柱;②色譜系統(tǒng)1分離的目標(biāo)雜質(zhì)出峰后，設(shè)置切換飯為B位置。③用色譜系統(tǒng)2將柱子和定量環(huán)中目標(biāo)雜質(zhì)洗脫到第2根色譜柱，用色譜系統(tǒng)2分離分析。利用HPSEC系統(tǒng)分離弱保留值雜質(zhì)于RP-HPLC色譜系統(tǒng)定位。

1.4 柱切換-LC/MSn法

色譜系統(tǒng)5，與RP-HPLC色譜系統(tǒng)。柱溫30℃，流速0.5mL·min-1。切換閥：六通閥A、B;切換用定量環(huán)體積：500μL。因創(chuàng)建的聚合物分析用RP-HPLC法用流動(dòng)相所含的緩沖鹽為揮發(fā)性緩沖鹽，直接用在LC/MS剖析，直接用于弱保留值雜質(zhì)的脫鹽處理，開展質(zhì)譜定性分析。

1.5 溶液配制

鹽酸頭孢甲肟降解溶液：精密稱取鹽酸頭孢甲肟原料約75mg，放置在25mL量瓶中，加入0.1mol·L-1磷酸鹽緩沖液2mL溶解后，用水稀釋至刻度，搖晃均勻，室溫下置放12h，即大約3mg·mL-1。

鹽酸頭孢甲肟原料供試品溶液：精密稱取鹽酸頭孢甲肟原料約75mg，放置在25mg量瓶中，加水溶解并稀釋到刻度，搖晃均勻，制成質(zhì)量濃度3mg·mL-1溶液。

鹽酸頭孢甲肟原料對照溶液：精密量取鹽酸頭孢甲肟原料供試品溶液1mL，放置在100mL量瓶中，用水稀釋到刻度，搖晃均勻，制成質(zhì)量濃度為30μL·mL-1溶液。

注射用鹽酸頭孢甲肟溶液：精密稱取注射用鹽酸頭孢甲肟適量（相當(dāng)于鹽酸頭孢甲肟75mg），放置在25mg量瓶中，加水溶解并稀釋到刻度，搖晃均勻，制成質(zhì)量濃度為3mg·mL-1溶液。

注射鹽酸頭孢甲肟對照溶液：精密量取注射用鹽酸頭孢甲肟供試品溶液1mL，放置100mL量瓶內(nèi)，用水稀釋到刻度，搖晃均勻，制成質(zhì)量濃度為30μg·mL-1溶液。

2 結(jié)果

2.1 高效凝膠色譜法分離雜質(zhì)

鹽酸頭孢甲肟降解溶液，用HPSEC法進(jìn)行分析，結(jié)果在鹽酸頭孢甲肟主峰前分離獲取弱保留值雜質(zhì)HPSEC，后用柱切換-LC/MS法推動(dòng)各組分化學(xué)結(jié)構(gòu)，推定雜質(zhì)結(jié)構(gòu)，雜質(zhì)歸屬見表1。

2.2 HPSEC-1

用柱切換-LC/MS法于弱保留值雜質(zhì)HPSEC-1中分離取得2個(gè)未知雜質(zhì)，命名為HPSEC-1a、HPSEC-1b。

3 討論

柱切換-LC/MS法剖析頭孢甲肟降解溶液數(shù)據(jù)得出：鹽酸頭孢甲肟降解溶液中所含有的各結(jié)構(gòu)位置小分子雜質(zhì)，未出現(xiàn)三聚體與較高聚合態(tài)雜質(zhì)。聚合物雜質(zhì)均與頭孢甲肟主峰前出來，表示HPSEC法可分離聚合物雜質(zhì)，但降解濃溶液中存在小分子，HPSEC色譜系統(tǒng)難以科學(xué)分離聚合物，聚合物雜質(zhì)的含量準(zhǔn)確性會(huì)受到影響[3]。所以，HPSEC法剖析聚合物雜質(zhì)方式專屬性差。

用RP-HPLC法對鹽酸頭孢甲肟原料和注射劑的聚合物含量的分析，用頭孢甲肟脫四氮唑二聚體充當(dāng)指針性聚合物雜質(zhì)，采用對照法對聚合物的含量進(jìn)行計(jì)算，數(shù)據(jù)展現(xiàn)，鹽酸頭孢甲肟原料聚合物含量為0.08%，制劑聚合物含量為0.16%，明顯比HPSEC法低，兩者差異是因HPSEC法分離的弱保留值雜質(zhì)中含有小分子雜質(zhì)導(dǎo)致，可能和其他不同原理技術(shù)定量有關(guān)系，需逐步證明[4-5]。

綜上所述，本研究采用不同方法等現(xiàn)代色譜分析方式建立聚合物的測定方法，結(jié)果表明HPSEC法對鹽酸頭孢甲肟原料和制劑聚合物雜質(zhì)分析專屬性不佳，RP-HPLC 法對鹽酸頭孢甲肟聚合物雜質(zhì)分析靈敏度較高，且具有較強(qiáng)專屬性，可科學(xué)質(zhì)控聚合物。

參考文獻(xiàn)：

[1]夏佳，席時(shí)東.UPLC測定鹽酸頭孢甲肟原料藥及注射劑的有關(guān)物質(zhì)[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2019，36（22）：2769-2772.

[2]李進(jìn)姚.鹽酸頭孢甲肟原料及制劑的聚合物雜質(zhì)分析[J].藥物分析雜志，2021， 41（1）：11.

[3]劉玲，陳博，劉曈.鹽酸頭孢甲肟無菌粉結(jié)晶工藝優(yōu)化[J].化學(xué)與生物工程，2018， 35（8）：3.

[4]董曉松.呋喃妥因聯(lián)合頭孢甲肟治療兒童復(fù)發(fā)性尿路感染的臨床研究[J].現(xiàn)代藥物與臨床，2021，36（9）：1940-1943.

[5]夏佳，席時(shí)東.UPLC測定鹽酸頭孢甲肟原料藥及注射劑的有關(guān)物質(zhì)[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2019，36（22）：2769-2772.

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