吳麗君，金孟浩，黃建芳，陳雪萊，陳紅麗，林 群

(溫州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 1.檢驗(yàn)科；2.神經(jīng)外科，浙江 溫州 325000；3.溫州市中心醫(yī)院 神經(jīng)外科，浙江 溫州 325000)

大量證據(jù)表明，氧化介導(dǎo)的血管損傷和低密度脂蛋白(LDL)氧化參與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病，而氧化修飾LDL較單獨(dú)的LDL 具有更強(qiáng)的致動(dòng)脈粥樣硬化作用。LDL中的多不飽和脂肪酸易發(fā)生脂質(zhì)過氧化，產(chǎn)生脂氫過氧化物(LOOH)，故LOOH較常規(guī)的血脂指標(biāo)的檢測(cè)，在反應(yīng)動(dòng)脈粥樣硬化病理狀態(tài)方面優(yōu)越性更為顯著。因此，內(nèi)源性抗氧化化合物有望抑制LDL氧化和動(dòng)脈粥樣硬化過程。膽紅素屬于一種內(nèi)源性相關(guān)的抗氧化劑，由血紅素代謝生成，具有抗氧化特性，在心血管相關(guān)疾病發(fā)生發(fā)展中具有一定的保護(hù)作用，且有研究發(fā)現(xiàn)血清膽紅素水平與頸動(dòng)脈粥樣狹窄程度呈負(fù)相關(guān)。本研究檢測(cè)計(jì)劃行頸內(nèi)動(dòng)脈剝脫術(shù)患者的血脂、氧化損傷因子水平，并分析氧化損傷因子與血清中膽紅素水平的關(guān)系，以期為尋求從病因上更早地預(yù)防動(dòng)脈粥樣斑塊的發(fā)生提供一定的參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象選取 選擇2019年1月—12月在溫州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院計(jì)劃行頸內(nèi)動(dòng)脈剝脫術(shù)的患者，納入標(biāo)準(zhǔn)：①通過超聲、CTA、MRI及DSA等檢查手段，符合頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；②符合頸內(nèi)動(dòng)脈剝脫術(shù)相關(guān)指征；③動(dòng)脈內(nèi)膜切除術(shù)標(biāo)本、斑塊均為纖維脂質(zhì)病變，無(wú)顯著血栓形成和/或鈣化；④抽血前3天無(wú)高脂飲食。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患炎癥、腫瘤、血液系疾?。虎诖嬖趥魅静　⒏尾『?或腎臟疾病等病史；③酒精濫用或存在服用抗氧化劑補(bǔ)充劑病史。

1.2 一般資料 共入組40例，根據(jù)狹窄程度不同分為A組(狹窄程度<90%)26例和B組(狹窄程度≥90%)14例。A組中男17例，女9例；年齡54～81歲，平均(67.51±8.12)歲；BMI 22～26 kg/m，平均(23.47±1.92)kg/m；既往病史為冠心病8例，高血壓14例，糖尿病5例，腦梗死6例；有吸煙史15例。B組中男9例，女5例；年齡56～83歲，平均(68.17±7.26)歲；BMI 21～24 kg/m，平均(23.08±1.76)kg/m；既往病史為冠心病6例，高血壓10例，糖尿病4例，腦梗死4例；有吸煙史8例。另選取40名健康體檢者作為C組，其中男25例，女15例；年齡54～80歲，平均(67.52±8.13)歲；BMI 22～23 kg/m，平均(22.86±1.96)kg/m。3組患者的性別、年齡、BMI差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(>0.05)。所有研究對(duì)象知情同意，本研究通過溫州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院倫理委員會(huì)審核。

1.3 觀察指標(biāo) 在入院后第2 d采集全部患者10 mL空腹靜脈血，全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)水平；ELISA法(試劑盒購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司)檢測(cè)血清髓過氧化物酶(MPO)水平；礬酸氧化法檢測(cè)總膽紅素(STB)、間接膽紅素(SIB)、直接膽紅素(SDB)水平。

脂質(zhì)氫過氧化物(LOOH)測(cè)定：在全部患者行頸內(nèi)動(dòng)脈剝脫術(shù)過程中，收集內(nèi)膜斑塊，為了提取油脂及其氧化形態(tài)，將斑塊均勻溶于含有丁基羥基甲苯的氯仿/甲醇(體積比為2∶1)中，然后加入50 m mol/L NaCl溶液，離心后，取氯仿相液90 μL，在含10 μL TPP (10 mmol/L)或甲醇中混勻，37℃反應(yīng)30 min；加入FOX 反應(yīng)液900 μL，混勻，室溫反應(yīng)30 min，12 000 r/min 離心5 min。取上清液測(cè)D值，以加與不加TPP 兩管的D值之差計(jì)算LOOH含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0軟件包處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料用%描述，組間用卡方檢驗(yàn)；計(jì)量資料2組間比較用檢驗(yàn)，多組間比較用單因素方差分析；膽紅素水平與氧化損傷因子之間的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)性分析。<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血脂水平 各組的TG、TC、LDL-C、HDL-C水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(<0.001)，見表1。A組、B組的TG、TC、LDL-C水平均高于C組，HDL-C低于C組；B組的TG、TC、LDL-C水平均高于A組，HDL-C低于A組；差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(<0.05)。

表1 各組的血脂水平比較Table 1 Comparison of lipid levels in each group

2.2 氧化損傷因子水平 各組的LOOH、MPO水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(<0.001)，B組最高，C組最低，見表2。

表2 各組氧化損傷因子水平比較Table 2 Comparison of oxidative damage factor levels in each

2.3 血清膽紅素水平 各組的STB、SIB、SDB水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(<0.001)，B組最低，C組最高，見表3。

表3 各組血清膽紅素水平比較

2.4 相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)分析顯示，頸內(nèi)動(dòng)脈剝脫術(shù)患者血清膽紅素水平與氧化損傷因子水平呈顯著負(fù)相關(guān)(=-0.6092、=-0.6972、=-0.5429、=-0.6844，均<0.001；=-0.3870，=0.0136)。見圖1。

圖1 行頸內(nèi)動(dòng)脈剝脫術(shù)患者的血清膽紅素 水平與LOOH(A)、MPO(B)水平的相關(guān)性Figure 1 Correlation between serum bilirubin levels and LOOH (A) and MPO (B) levels in patients undergoing internal carotid artery dissection

3 討論

高血壓、糖尿病、冠心病、腦梗死等心腦血管疾病可促進(jìn)患者動(dòng)脈粥樣硬化，形成斑塊，若病情得不到有效控制，可出現(xiàn)斑塊破裂甚至脫落，嚴(yán)重危及患者的生命安全。了解動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展機(jī)制對(duì)降低心腦血管不良事件的發(fā)生具有積極意義。內(nèi)-中膜作為最早病變的部位，起源于內(nèi)皮細(xì)胞受損，線粒體產(chǎn)生大量的活性氧，引起LDL-C蓄積于血管內(nèi)皮下，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，誘導(dǎo)單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞進(jìn)入血管壁吞噬LDL-C，產(chǎn)生大量的泡沫細(xì)胞累積于此，形成局部的慢性炎癥反應(yīng)促進(jìn)斑塊的發(fā)生發(fā)展。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，B組血脂水平較A組變化更為顯著。提示隨著患者頸動(dòng)脈狹窄程度的加劇，其血脂代謝更紊亂，進(jìn)一步證實(shí)脂質(zhì)代謝參與了動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。

研究發(fā)現(xiàn)，在脂質(zhì)被組織代謝后，其產(chǎn)生的氧自由基促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞分泌MPO，參與氧化修飾作用，致使HDL功能失調(diào)及氧化LDL形成氧化型LDL，引發(fā)脂質(zhì)過氧化，促進(jìn)氧化損傷因子LOOH的產(chǎn)生，將進(jìn)一步加劇動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成發(fā)展。故為了進(jìn)一步了解上述氧化損傷因子與頸動(dòng)脈狹窄程度的關(guān)系，本研究檢測(cè)患者血清中MPO水平及內(nèi)膜中的LOOH水平，結(jié)果顯示，與C組相比，B組LOOH、MPO水平較A組增加更為顯著。提示隨著頸動(dòng)脈狹窄程度的加劇，患者頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊氧化損傷愈發(fā)嚴(yán)重，也說明了氧化損傷和脂質(zhì)過氧化是影響頸內(nèi)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊致狹窄的重要指標(biāo)。

現(xiàn)階段臨床研究報(bào)道，血清膽紅素屬于一種內(nèi)源性的抗氧化劑，頸動(dòng)脈粥樣硬化患者的頸動(dòng)脈狹窄程度與血清膽紅素水平呈負(fù)相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，與C組相比，B組STB、SIB、SDB水平較A組降低更為明顯，提示患者頸動(dòng)脈狹窄程度越嚴(yán)重，其血清膽紅素水平越低，說明血清膽紅素水平的增高可抑制動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。分析原因可能為：1)膽紅素屬于機(jī)體中鐵卟啉化合物的一種代謝產(chǎn)物，本身作為一種脂溶性抗氧化劑，可清除氧自由基，提升膽固醇的溶解性，促進(jìn)膽固醇從膽汁中排出，抑制LDL-C的氧化修飾反應(yīng)，進(jìn)而起到保護(hù)血管內(nèi)皮功能的作用；2)膽紅素通過對(duì)補(bǔ)體的抑制作用來降低機(jī)體的炎癥反應(yīng)，進(jìn)而緩解病灶處的慢性炎癥反應(yīng)，抵抗動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展。

本研究進(jìn)一步分析了血清膽紅素對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊氧化損傷因子的影響，結(jié)果顯示，患者STB、SIB與LOOH、MPO之間呈顯著負(fù)相關(guān)。這一結(jié)果證明了血清膽紅素在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成過程中具有較好的脂質(zhì)氧化調(diào)控作用，對(duì)斑塊氧化損傷具有抑制作用。而SDB對(duì)脂質(zhì)氧化作用不顯著的原因可能是SDB屬于共軛膽紅素，其親水特性導(dǎo)致與生物脂類的疏水相互作用，故在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中發(fā)揮較低的抗氧化抗脂溶作用。

綜上所述，血脂水平紊亂及脂質(zhì)氧化損傷機(jī)制參與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成進(jìn)展，而血清膽紅素水平的升高對(duì)該病具有保護(hù)作用，其作用原因可能與膽紅素對(duì)氧化損傷因子的負(fù)調(diào)控作用有關(guān)。