乙肝相關(guān)性慢加急性肝衰竭合并細(xì)菌感染患者Treg/Th7細(xì)胞免疫表達(dá)的研究

譚年花　陳斌　彭杰　朱文芳　張茜茜

〔摘要〕 目的 觀察乙型病毒性肝炎（簡(jiǎn)稱(chēng)乙肝）相關(guān)性慢加急性肝衰竭（hepatitis B virus related acute-on-chronic liver failure， HBV-ACLF）合并細(xì)菌感染患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cell， Treg）和輔助性T細(xì)胞17（helper T cell 17， Th17）細(xì)胞計(jì)數(shù)及相關(guān)細(xì)胞因子免疫表達(dá)。方法 選擇96例HBV-ACLF患者，依據(jù)感染情況分為有細(xì)菌感染組與無(wú)細(xì)菌感染組。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)患者外周血Treg、Th17細(xì)胞計(jì)數(shù)，細(xì)胞因子微球檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（transforming growth factor-β， TGF-β）、白介素-10（interleukin-10， IL-10）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）、白介素-17A（interleukin-17A， IL-17A）、白介素-23（interleukin-23， IL-23）表達(dá)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)叉狀頭狀轉(zhuǎn)錄蛋白3（forkhead box protein 3， Foxp3）、維甲酸相關(guān)孤核受體-γt（retinoid-related orphan nuclcar receptor-γt， ROR-γt） mRNA表達(dá)，及檢測(cè)相關(guān)炎癥指標(biāo)[C反應(yīng)蛋白（C-reactive protein， CRP）、降鈣素原（procalcitonin， PCT）、內(nèi)毒素（lipopolysaccharide， LPS）]水平。結(jié)果 有細(xì)菌感染組Treg細(xì)胞計(jì)數(shù)與無(wú)細(xì)菌感染組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與無(wú)細(xì)菌感染組比較，有細(xì)菌感染組Th17細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯升高（P<0.01）;有細(xì)菌感染組CRP、PCT、LPS水平均顯著升高（P<0.01，P<0.05）;有細(xì)菌感染組Th17、TNF-α、IL-17A、IL-23、ROR-γt mRNA表達(dá)均明顯上調(diào)（P<0.01，P<0.05）;有細(xì)菌感染組Foxp3 mRNA、IL-10表達(dá)均明顯下調(diào)（P<0.01，P<0.05）。有細(xì)菌感染組惡化率（83.33%）顯著高于無(wú)細(xì)菌感染組（11.11%）（P<0.01）。結(jié)論 HBV-ACLF患者隨著病程進(jìn)展，感染風(fēng)險(xiǎn)增加，其感染后存在Th17細(xì)胞優(yōu)勢(shì)化現(xiàn)象，具體機(jī)制可能與Th17細(xì)胞過(guò)度增值分化導(dǎo)致炎癥反應(yīng)失控，加重肝組織炎癥反應(yīng)相關(guān)。

〔關(guān)鍵詞〕 乙型病毒性肝炎;肝衰竭;調(diào)節(jié)性T細(xì)胞;輔助性T細(xì)胞17;細(xì)菌感染

〔中圖分類(lèi)號(hào)〕R259? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕B? ? ? ? 〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2022.03.023

〔Abstract〕 Objective To observe the cell count of regulatory T cell （Treg） and helper T cell 17 （Th17） cell and the expression of related cytokines in peripheral blood of patients with hepatitis B virus related acute-on-chronic liver failure （HBV-ACLF） combined with bacterial infection. Methods 96 patients with HBV-ACLF were divided into bacterial infection group and non-bacterial infection group according to the infection. Flow cytometry was used to detect the cell count of Treg and Th17 in peripheral blood. The expression levels of transforming growth factor-β （TGF-β）， interleukin-10 （IL-10）， tumor necrosis factor-α （TNF-α）， interleukin-17A （IL-17A） and interleukin-23 （IL-23） were detected by cytometric bead array. The expression of forkhead box protein 3 （Foxp3） and retinoid-related orphan nuclcar receptor-γt （ROR-γt） mRNA were detected by real-time fluorescent quantitative PCR， and the levels of C-reactive protein （CRP）， procalcitonin （PCT） and lipopolysaccharide （LPS） were detected. Results There was no significant difference in Treg cell count between the bacterial infection group and non-bacterial infection group （P>0.05）. Compared with the non-bacterial infection group， Th17 cell count in bacterial infection group was significantly increased （P<0.01）， CRP， PCT and LPS were significantly increased in the bacterial infection group （P<0.01， P<0.05）. The expression of Th17， TNF-α， IL-17A， IL-23 and ROR-γt mRNA in the bacterial infection group were all up-regulated （P<0.01， P<0.05）， Foxp3 mRNA and IL-10 expression were significantly down-regulated in bacterial infection group （P<0.01， P<0.05）. The deterioration rate in the bacterial infection group （83.33%） was significantly higher than that in the non-bacterial infection group （11.11%） （P<0.01）. Conclusion Patients with HBV-ACLF have an increased risk of infection with the progression of the disease， and there is a phenomenon of Th17 cell dominance after infection. It may be related to the excessive value-added differentiation of Th17 cell， which leads to the uncontrolled inflammatory response and aggravates the inflammatory response of liver tissue.

〔Keywords〕 viral hepatitis B; liver failure; regulatory T cell; helper T cell 17; bacterial infection

慢加亞急性肝衰竭（acute-on-chronic liver failure， ACLF）是在慢性肝病基礎(chǔ)上出現(xiàn)以肝功能急性失代償為特征的臨床綜合征，預(yù)后差，病死率高[1]。其發(fā)病機(jī)制與宿主免疫損傷、缺血缺氧及再灌注損傷密切相關(guān)，我國(guó)則有80%以上是乙型病毒性肝炎（簡(jiǎn)稱(chēng)乙肝）相關(guān)性慢加急性肝衰竭（hepatitis B virus related acute-on-chronic liver failure， HBV-ACLF）[2-3]。HBV-ACLF患者由于免疫功能紊亂（過(guò)度炎癥反應(yīng)與免疫功能障礙重疊）、腸道細(xì)菌失調(diào)、腸道菌群/產(chǎn)物易位等病理生理特征，極易感染[4-5]。合并感染作為肝衰竭最常見(jiàn)的不良事件之一，是導(dǎo)致肝衰竭重癥化的重要原因，大大增加了重癥監(jiān)護(hù)病房入院率和短期死亡率[6]。西醫(yī)治療上目前除了抗感染、退熱、免疫調(diào)節(jié)等對(duì)癥治療，尚無(wú)其他療效確切的藥物，并且因受損臟器的特殊性，大大限制了臨床用藥。而臨床與實(shí)驗(yàn)研究表明通過(guò)傳統(tǒng)中醫(yī)辨證論治，也能達(dá)到較好的療效，認(rèn)為細(xì)菌感染的病理因素?zé)o外乎熱、毒與血瘀，病機(jī)表現(xiàn)為（熱）毒、瘀、虛，與肝衰竭濕熱、血瘀、脾虛的基本病機(jī)相合，可予以清熱涼血、解毒化瘀，兼以補(bǔ)虛治療，再配合通腑泄?jié)?、祛邪外出以截?cái)嗤炷?，控制病?shì)進(jìn)展[7-8]。因此，利用現(xiàn)代分子生物學(xué)再結(jié)合傳統(tǒng)中醫(yī)辨證，多維度認(rèn)識(shí)肝衰竭發(fā)病機(jī)理，形成其中西醫(yī)結(jié)合診療的新理念，已是臨床治療趨勢(shì)。

肝衰竭患者出現(xiàn)感染可能主要與兩種損傷機(jī)制相關(guān)：（1）機(jī)體過(guò)度的免疫應(yīng)答損傷正常組織，增加易感率;（2）感染性生物直接損傷組織[9]。然而在HBV-ACLF背景下，血液免疫細(xì)胞亞群的計(jì)數(shù)、免疫細(xì)胞表面蛋白的表達(dá)和轉(zhuǎn)錄譜特征還未得到系統(tǒng)研究。起源于CD4+T細(xì)胞的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cell， Treg）和輔助性T細(xì)胞17（helper T cell 17， Th17）是ACLF發(fā)病后適應(yīng)性免疫反應(yīng)中最具代表的T細(xì)胞亞群之一[10]。Treg細(xì)胞受叉頭狀轉(zhuǎn)錄蛋白3（forkhead

box protein 3， Foxp3）調(diào)控，通過(guò)分泌轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（transforming growth factor-β， TGF-β）、白介素-10（interleukin-10， IL-10）等抑炎細(xì)胞因子，發(fā)揮抑制炎癥作用，Th17細(xì)胞在維甲酸相關(guān)孤核受體-γt（retinoid-related orphan nuclcar receptor-γt， ROR-γt）的調(diào)控下，通過(guò)分泌腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）、白介素-17A（interleukin-17A， IL-17A）、白介素-23（interleukin-23， IL-23）等促炎細(xì)胞因子，加重炎癥反應(yīng)[11]。二者在ACLF發(fā)病過(guò)程中的炎癥調(diào)控作用是近年國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)[12-14]，其具體表達(dá)與肝衰竭患者的感染風(fēng)險(xiǎn)增加是否有關(guān)，目前研究較少。因此，本研究以HBV-ACLF患者為研究對(duì)象，通過(guò)觀察HBV-ACLF合并感染患者外周血炎癥指標(biāo)、Treg、Th17細(xì)胞計(jì)數(shù)及相關(guān)細(xì)胞因子免疫表達(dá)，有助于為ACLF炎癥反應(yīng)調(diào)控的研究提供全新視角和新思路。

1 資料與方法

1.1? 一般資料

選取2018年3月至2019年3月收住于湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院肝病科/傳染性疾病科的HBV-ACLF患者共96例，依據(jù)患者是否合并細(xì)菌感染，分為有細(xì)菌感染組42例和無(wú)細(xì)菌感染組54例。依據(jù)ACLF病程分期，有細(xì)菌感染組分別有7例早期患者、13例中期患者、22例晚期患者，主要分布在疾病晚期。在性別年齡分布上，42例有細(xì)菌感染組中男性31例，女性11例，年齡（48.34±18.51）歲，54例無(wú)細(xì)菌感染組中男性41例，女性13例，年齡（45.62±16.33）歲。各組在性別、年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號(hào)：HN-LL-20170720）。所有患者皆被告知參與研究的相關(guān)內(nèi)容，充分知情后自愿簽署知情同意書(shū)。

1.2? 診斷標(biāo)準(zhǔn)

HBV-ACLF診斷參照《肝衰竭診治指南（2012年版）》的診斷標(biāo)準(zhǔn)[15]。細(xì)菌感染診斷標(biāo)準(zhǔn)[16]：血、尿、糞便、腹水、胸水等病原學(xué)檢測(cè)明確提示細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性者;或病原微生物學(xué)培養(yǎng)陰性，但臨床上有可疑感染灶的相應(yīng)癥狀和體征，外周血相關(guān)炎癥指標(biāo)白細(xì)胞和（或）中性粒細(xì)胞、C反應(yīng)蛋白（C-reactive protein， CRP）、降鈣素原（procalcitonin， PCT）升高，以及X線、CT等影像學(xué)檢查提示有感染者。預(yù)后判斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)患者出院時(shí)情況及在院死亡作為判斷節(jié)點(diǎn)，分為好轉(zhuǎn)及惡化[17]。（1）好轉(zhuǎn)：患者肝衰竭癥狀、體征基本消失或有明顯好轉(zhuǎn)，且肝功能指標(biāo)明顯好轉(zhuǎn)（血清膽紅素以及谷丙轉(zhuǎn)氨酶降低50%以上）;（2）惡化：癥狀、體征均無(wú)好轉(zhuǎn)，甚至出現(xiàn)病情惡化及臟器衰竭等生命體征不穩(wěn)定表現(xiàn)，或者醫(yī)治無(wú)效死亡。

1.3? 納入標(biāo)準(zhǔn)

（1）符合乙肝相關(guān)性慢性肝病基礎(chǔ)上導(dǎo)致的HBV-ACLF診斷標(biāo)準(zhǔn);（2）年齡18～65歲;（3）患者病歷資料全面者;（4）入組患者皆自愿參加，并簽署知情同意書(shū)。

1.4? 排除標(biāo)準(zhǔn)

（1）乙肝相關(guān)性慢性肝病基礎(chǔ)上合并其他病因如甲肝、戊肝、丙肝、EB病毒、巨細(xì)胞病毒及自身免疫性肝病、藥物性肝損傷等導(dǎo)致的肝衰竭;（2）合并有某些致死性并發(fā)癥如腦水腫、消化道大出血等;（3）合并真菌感染者;（4）妊娠或哺乳期婦女;（5）合并原發(fā)性肝癌或其他腫瘤者;（6）近3月服用免疫抑制劑、激素者。

1.5? 觀察指標(biāo)

1.5.1? 外周血Treg、Th17細(xì)胞計(jì)數(shù)? 采用美國(guó)BD公司C6型流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血Treg、Th17細(xì)胞計(jì)數(shù)，取患者外周血約2 mL分離單個(gè)核細(xì)胞后，依次進(jìn)行細(xì)胞刺激活化、表面標(biāo)記染色、固定破膜等，具體檢測(cè)方式參照CD4、CD25、IL-17A、Foxp3試劑盒，試劑盒均購(gòu)自美國(guó)BD公司，批號(hào)分別為555346、555432、560486、560045。

1.5.2? 炎癥因子IL-10、TGF-β、TNF-α、IL-17A、IL-23的表達(dá)? 取患者空腹外周血約2 mL，分離留取上清液，采用美國(guó)BD公司C6型流式細(xì)胞儀，用細(xì)胞因子微球檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)炎癥因子IL-10、TGF-β、TNF-α、IL-17A、IL-23的表達(dá)，具體檢測(cè)方式參照IL-17A、TNF-α、TGF-β、IL-10、IL-23試劑盒，試劑盒均購(gòu)自美國(guó)BD公司，批號(hào)分別為560383、560112、560429、558274、558245。

1.5.3? 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子Foxp3、ROR-γt mRNA水平? 采用美國(guó)Applied Biosystems公司7500型熒光定量PCR儀檢測(cè)外周血Treg、Th17細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Foxp3、ROR-γt mRNA表達(dá)，具體檢測(cè)方式參照ROR-γt、Foxp3多克隆抗體試劑盒，試劑盒均購(gòu)自美國(guó)ABclonal公司，批號(hào)分別為A10240、A8024?；虻囊镉蒅ENELIFE公司利用Primer Express 2.0軟件設(shè)計(jì)，上海Sangon公司合成完成。內(nèi)參β-Actin引物序列：正向引物序列為GCACTCTTCCAGCCTTCCTTCC，反向引物序列為GCGGATGTCCACGTCACACTTC，長(zhǎng)度為93 bp。Foxp3引物序列：正向引物序列為AAGAACGCCATCCGCCACAAC，反向引物序列為T(mén)CCAGCTCATCCACGGTCCAC，長(zhǎng)度為92 bp。ROR-γt引物序列：正向引物序列為AGCGGCAACAGCAGCAACAG，反向引物序列為CAGGCAGGTCAGGCGAGGAG，長(zhǎng)度為132 bp。

1.5.4? 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)CRP、PCT及鱟試劑法檢測(cè)內(nèi)毒素（lipopolysaccharide， LPS）水平? 采用德國(guó)Roche Diagnostics Gmbh公司cobas 8000和cobas e 411型電化學(xué)發(fā)光全自動(dòng)免疫分析儀分別檢測(cè)CRP、PCT的表達(dá)，具體操作步驟參照試劑盒操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，試劑盒購(gòu)自羅氏診斷公司，批號(hào)分別為20152401562、20162404451。采用湛江博康海洋生物公司BET-24A型細(xì)菌內(nèi)毒素分析儀以鱟試劑法檢測(cè)LPS表達(dá)，具體操作步驟參照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，試劑盒購(gòu)自湛江博康海洋生物公司，批號(hào)為17051014。

1.6&nbsp; 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理。計(jì)數(shù)資料以率或構(gòu)成比表示，采用χ2檢驗(yàn);等級(jí)資料行秩和檢驗(yàn);計(jì)量資料以“x±s”表示，進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)及方差齊性檢驗(yàn)，符合正態(tài)性分布和方差齊性釆用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，不符合正態(tài)性分布和方差齊性，采用兩個(gè)獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗(yàn)。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1? 兩組患者CRP、PCT、LPS水平

有細(xì)菌感染組CRP、PCT、LPS水平均明顯高于無(wú)細(xì)菌感染組（P<0.01，P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.2? 兩組患者Treg、Th17細(xì)胞計(jì)數(shù)

有細(xì)菌感染組Treg細(xì)胞計(jì)數(shù)與無(wú)細(xì)菌感染組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。有細(xì)菌感染組Th17細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯高于無(wú)細(xì)菌感染組（P<0.01）。見(jiàn)表2、圖1-2。

2.3? 兩組患者IL-10、TGF-β、TNF-α、IL-17A、IL-23表達(dá)

兩組TGF-β表達(dá)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。有細(xì)菌感染組IL-10表達(dá)明顯低于無(wú)細(xì)菌感染組（P<0.05）;有細(xì)菌感染組Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子TNF-α、IL-17A、IL-23表達(dá)均明顯高于無(wú)細(xì)菌感染組（P<0.01，P<0.05）。見(jiàn)表3。

2.4? 兩組患者Foxp3、ROR-γt mRNA表達(dá)

有細(xì)菌感染組Foxp3 mRNA表達(dá)低于無(wú)細(xì)菌感染組（P<0.01），有細(xì)菌感染組ROR-γt mRNA表達(dá)高于無(wú)細(xì)菌感染組（P<0.01）。見(jiàn)表4。

2.5? 兩組患者預(yù)后

有細(xì)菌感染組惡化率（83.33%）顯著高于無(wú)細(xì)菌感染組（11.11%）（P<0.01）。見(jiàn)表5。

3 討論

感染作為ACLF急性事件之一，是其發(fā)展過(guò)程中導(dǎo)致病情加重甚至死亡最常見(jiàn)的原因之一[18]，本研究中合并感染患者占43.75%，這與國(guó)內(nèi)外多數(shù)研究占30%～50%基本相符。隨著肝衰竭病程進(jìn)展，機(jī)體在依次經(jīng)受早、中期階段病毒介導(dǎo)的免疫炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)作用和晚期階段LPS介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)作用后，自身防御機(jī)制受損加重，由于肝內(nèi)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)受損，巨噬細(xì)胞功能下降，白細(xì)胞黏附、趨化及吞噬功能降低、補(bǔ)體合成不足，導(dǎo)致機(jī)體對(duì)細(xì)菌的易感性增加，出現(xiàn)炎癥免疫損傷[19]。而且ACLF晚期患者由于腸壁瘀血水腫、缺血缺氧，加上氧化應(yīng)激、炎癥趨化因子等使腸黏膜損傷造成腸道機(jī)械屏障、生物、化學(xué)及免疫等屏障障礙，出現(xiàn)“腸泄漏現(xiàn)象”，腸源性?xún)?nèi)毒素血癥的發(fā)生率高達(dá)93.3%～100%，這種“LPS-巨噬細(xì)胞-細(xì)胞因子風(fēng)暴”機(jī)制的啟動(dòng)是患者發(fā)生內(nèi)源性感染的主要內(nèi)在因素，在此過(guò)程中大量炎癥介質(zhì)瀑布樣釋放入血，而機(jī)體相應(yīng)的內(nèi)源性炎癥拮抗機(jī)制未作出有效應(yīng)對(duì)，最終導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)綜合征甚至多器官功能衰竭[20]。同時(shí)隨著肝衰竭進(jìn)展，內(nèi)源性抗炎介質(zhì)大量釋放，引起代償性抗炎癥反應(yīng)綜合征，大量炎癥因子消耗與抗炎因子釋放，最終導(dǎo)致免疫麻痹發(fā)生，從而加劇了各種感染的易感性[21]，其中以自發(fā)性腹膜炎最為常見(jiàn)，其次為腸道感染、肺部感染、膽道感染、尿路感染等[16]，是ALCF患者死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[22]。

正如中醫(yī)學(xué)的正氣學(xué)說(shuō)，肝主疏泄，主藏血，為調(diào)節(jié)氣血的場(chǎng)所和樞紐，它的生理結(jié)構(gòu)和特性使疫病之毒更易入血，乙肝病毒性肝炎相關(guān)的慢加急性肝衰竭就是屬中醫(yī)學(xué)“疫毒內(nèi)伏血分”范疇。伏邪發(fā)病，正虛是必要條件，也就是說(shuō)在機(jī)體正氣不足為本，即免疫失衡的情況下伏邪易于暴發(fā)。而HBV-ACLF患者屬于臨床危重病證，邪氣盛而正氣虧損嚴(yán)重，“邪之所湊其氣必虛”，細(xì)菌則好比“伏邪”，當(dāng)機(jī)體正虛時(shí)伺機(jī)引發(fā)感染，因此治療上也強(qiáng)調(diào)細(xì)菌感染虛注意固扶正氣，正氣足則邪不可干，從而避免新生內(nèi)生之邪，使得感染復(fù)雜化。

課題組前期實(shí)驗(yàn)已發(fā)現(xiàn)Treg/Th17細(xì)胞與內(nèi)毒素血癥二者有著密切復(fù)雜的關(guān)系，二者在肝衰竭患者病程發(fā)展中發(fā)揮重要的作用，機(jī)體合并細(xì)菌感染后，Th17細(xì)胞在相關(guān)因子的刺激下增值分化，通過(guò)分泌相關(guān)炎癥細(xì)胞因子、趨化因子、集落刺激因子如TNF-α、IL-17A、IL-23等從而誘導(dǎo)單核/巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞向病灶內(nèi)轉(zhuǎn)移，促進(jìn)免疫反應(yīng)，進(jìn)而加重炎癥反應(yīng);而Treg細(xì)胞呈現(xiàn)一種負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用，通過(guò)增值分化能抑制過(guò)強(qiáng)的免疫反應(yīng)以減輕炎癥損傷，但不足以抗衡Th17所介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，因此，在感染狀態(tài)下，其相關(guān)抑炎因子IL-10、TGF-β反而呈下調(diào)趨勢(shì)[23-24]。但是，ROR-γt和Foxp3分別作為T(mén)h17和Treg細(xì)胞的特異性轉(zhuǎn)錄因子，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)合并細(xì)菌感染的肝衰竭患者ROR-γt mRNA表達(dá)與Th17細(xì)胞計(jì)數(shù)皆上升;而Foxp3 mRNA表達(dá)下降，與Treg細(xì)胞計(jì)數(shù)趨勢(shì)相反。由此，我們推測(cè)在合并有細(xì)菌感染的條件下，Treg細(xì)胞可以使Foxp3的表達(dá)下調(diào)，從而削弱其抑制Th17介導(dǎo)下的免疫炎癥反應(yīng)的功能[25]，而導(dǎo)致這種現(xiàn)象出現(xiàn)的關(guān)鍵因素是機(jī)體中高水平的炎性細(xì)胞因子，在這種炎癥性?xún)?nèi)環(huán)境里許多前炎性細(xì)胞因子能明顯降低Treg細(xì)胞的功能而導(dǎo)致其功能的缺陷，不能有效抑制炎癥反應(yīng)。這種Treg/Th17細(xì)胞免疫平衡關(guān)系與肝衰竭細(xì)菌易感性的聯(lián)系，正是中醫(yī)學(xué)正邪相爭(zhēng)致病之理，充分了解其病程中Th17/Treg失衡偏移的方向及炎癥反應(yīng)也有利于為中醫(yī)辨證分析提供一個(gè)客觀化實(shí)驗(yàn)指標(biāo)，更大程度上發(fā)揮中醫(yī)藥干預(yù)治療疾病的優(yōu)勢(shì)作用。

因此，本研究中通過(guò)觀察比較HBV-ACLF合并與未合并細(xì)菌感染患者Treg/Th17細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)變化，發(fā)現(xiàn)合并細(xì)菌感染患者Th17細(xì)胞及相關(guān)因子TNF-α、IL-17A、IL-23及其特異性轉(zhuǎn)錄因子ROR-γt的表達(dá)明顯高于無(wú)細(xì)菌感染患者（P<0.05，P<0.01），提示在HBV-ACLF整個(gè)發(fā)病過(guò)程中存在Th17細(xì)胞優(yōu)勢(shì)化現(xiàn)象，其表達(dá)水平在一定程度上反應(yīng)了機(jī)體的免疫功能狀態(tài)，且與HBV-ACLF合并感染患者的預(yù)后密切相關(guān)，具體機(jī)制可能與Th17細(xì)胞過(guò)度增值分化介導(dǎo)炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)導(dǎo)致炎癥反應(yīng)失控，加重肝組織炎癥反應(yīng)相關(guān)。通過(guò)干預(yù)促進(jìn)恢復(fù)Treg/Th17細(xì)胞的動(dòng)態(tài)平衡，降低炎癥因子表達(dá)，改善肝衰竭患者炎癥反應(yīng)失衡狀態(tài)，可有望降低感染事件發(fā)生，為肝衰竭治療提供全新視角和思路。

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