外泌體在肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用及潛在臨床價(jià)值

羅業(yè)浩，許棟涵，呂 挺，趙鐵建，汪 磊

1 廣西中醫(yī)藥大學(xué) 壯醫(yī)方藥基礎(chǔ)與應(yīng)用研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南寧 530200；2 澳門科技大學(xué) 中醫(yī)學(xué)院，澳門 999078； 3 湖北民族大學(xué) 醫(yī)學(xué)部，湖北 恩施 445000；4 廣西中醫(yī)藥大學(xué) 賽恩斯新醫(yī)藥學(xué)院，南寧 530200

肝細(xì)胞癌(HCC)是最常見的惡性腫瘤之一，在全球范圍內(nèi)，HCC是肝癌的主要類型，約占原發(fā)性肝癌的85%。死亡率居全球第三，每年死亡人數(shù)超過80萬，生存期僅有3～6個(gè)月，5年生存率僅為6%[1]，大多數(shù)HCC病例由于慢性肝病、肝硬化等危險(xiǎn)因素導(dǎo)致，具有起病隱匿、發(fā)生發(fā)展迅速及死亡率高的特點(diǎn)[2]。因此，尋找有助于HCC早期診斷、治療和預(yù)后判斷的生物標(biāo)志物至關(guān)重要。外泌體包含多種生物活性物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、DNA、miRNA、lncRNA、mRNA、腫瘤基因和轉(zhuǎn)錄因子等，這些生物活性物質(zhì)的水平與腫瘤侵襲力和腫瘤微環(huán)境有一定關(guān)系，可通過介導(dǎo)HCC的相關(guān)信號(hào)通路，加劇HCC的發(fā)生、發(fā)展[3]。外泌體有可能成為早期診斷HCC或轉(zhuǎn)移的標(biāo)志物，因此，充分了解外泌體對(duì)HCC進(jìn)展的作用機(jī)制，對(duì)其早期診斷、治療具有重要價(jià)值。

1 外泌體概述

1.1 外泌體的來源及包含成分 外泌體是大小在30～150 nm之間的小細(xì)胞外囊泡，是細(xì)胞外囊泡的一種亞型，通過在多囊泡體中內(nèi)吞形成腔內(nèi)囊泡。胞內(nèi)多泡體可以與溶酶體融合，導(dǎo)致內(nèi)容物降解，并且它們還與質(zhì)膜融合，將內(nèi)容物作為外泌體釋放到細(xì)胞外空間，由所有細(xì)胞類型分泌并負(fù)責(zé)細(xì)胞間通訊[4]。外泌體由包括腫瘤細(xì)胞在內(nèi)的各種身體組成細(xì)胞[如紅細(xì)胞、血小板、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、脂肪組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞(adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,AMSC)、成纖維細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞間質(zhì)細(xì)胞等]分泌，廣泛存在于人體的血液、唾液、尿液、腹水和腦脊液中。外泌體包含了蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸等生物大分子，如mRNA、miRNA等[5]。

1.2 外泌體的生物學(xué)功能 外泌體的功能取決于其來源的細(xì)胞類型。一般來說，外泌體可參與包括細(xì)胞通訊、免疫反應(yīng)、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、腫瘤侵襲和血管生成在內(nèi)的多種生理和病理過程[6]。主要是由于其具有脂質(zhì)雙分子層的結(jié)構(gòu)特征，能夠有效保護(hù)其內(nèi)容物的活性，方便其在細(xì)胞間穿梭以促進(jìn)細(xì)胞間的通訊。外泌體可以與特定的受體結(jié)合，通過釋放囊泡內(nèi)容物的方式進(jìn)行信息傳遞，攜帶的各種細(xì)胞因子和蛋白質(zhì)在細(xì)胞與其微環(huán)境之間的細(xì)胞間通信中起關(guān)鍵作用，為癌細(xì)胞的生存和生長(zhǎng)提供合適的環(huán)境[7]。

外泌體可以作為載體啟動(dòng)抗癌免疫反應(yīng)，也可以運(yùn)輸癌蛋白和免疫抑制分子以破壞宿主免疫系統(tǒng)并有利于腫瘤的微環(huán)境，幫助癌細(xì)胞免疫逃逸[8]。研究表明，HepG2細(xì)胞的外泌體激活脂肪細(xì)胞中的幾種激酶和NF-κB，并促進(jìn)炎癥細(xì)胞因子的分泌、腫瘤生長(zhǎng)和遷移、血管生成和炎癥浸潤。一旦腫瘤病灶太大而無法獲得足夠的營養(yǎng)，腫瘤微環(huán)境就會(huì)發(fā)生壞死和炎癥并誘導(dǎo)血管生成[9]。

2 外泌體在HCC發(fā)生、發(fā)展中的作用

外泌體參與HCC的形成和發(fā)展，包括重塑腫瘤微環(huán)境、細(xì)胞間通訊、免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞分化、遷移和侵襲、血管生成和耐藥性等，對(duì)HCC具有雙向作用(圖1)。

圖1 外泌體的組成及參與HCC的形成和發(fā)展

2.1 外泌體通過影響微環(huán)境促進(jìn)肝癌的增殖、遷移 在HCC的進(jìn)展過程中，具有致癌特性的外泌體逐漸超過了抑制腫瘤的外泌體，并最終將微環(huán)境轉(zhuǎn)變?yōu)橹铝鲂?。這些外泌體促進(jìn)腫瘤啟動(dòng)、血管生成、上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化 (epithelial-mesenchymal transition,EMT)、基質(zhì)重塑和免疫調(diào)節(jié)，它們協(xié)同支持腫瘤進(jìn)行增殖和遷移[10]。研究表明，外泌體的分泌有可能是協(xié)調(diào)腫瘤異質(zhì)性的一種機(jī)制，促進(jìn)具有不同基因型細(xì)胞的協(xié)同作用，刺激表觀遺傳變異和支持轉(zhuǎn)移克隆的生長(zhǎng)。研究[11]顯示，HCC 患者血清外泌體miRNA-665水平顯著升高，與腫瘤大小、臨床分期、局部侵襲和轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。如MET原癌基因可以被肝細(xì)胞內(nèi)化，然后通過激活 PI3K/AKT和MAPK信號(hào)通路以及基質(zhì)金屬蛋白酶 2(MMP-2)和 MMP-9 的過度表達(dá)，顯著促進(jìn)非運(yùn)動(dòng)肝細(xì)胞的遷移和侵襲[12]。含MHC-Ⅰ分子和熱休克蛋白的腫瘤來源的外泌體增強(qiáng)了骨髓基質(zhì)細(xì)胞的抗腫瘤活性。當(dāng)在體外用腫瘤來源的外泌體脈沖時(shí)，骨髓基質(zhì)細(xì)胞可以促進(jìn)同源HCC的遷移。

HCC細(xì)胞來源的外泌體也可以改變微環(huán)境來促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。Vps4A 是外泌體釋放的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，可能在肝癌細(xì)胞中充當(dāng)腫瘤抑制因子。它降低了細(xì)胞對(duì)外泌體的反應(yīng)，抑制了外泌體的生物活性，并增強(qiáng)了外泌體致癌miRNA的釋放。更重要的是，PI3K/Akt 信號(hào)通路被認(rèn)為是Vps4A相關(guān)miRNA最有可能的靶通路[13]。肥大細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境中富集，也促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。肥大細(xì)胞顯著增強(qiáng)肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，主要由HCV-E2刺激的肝癌細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體將lncRNA FAL1傳遞給Huh7和HepG2細(xì)胞來發(fā)揮作用[14]。而蛋白質(zhì)在HCC的發(fā)展中也起著重要作用。Vasorin (VASN)是一種Ⅰ型跨膜蛋白，已被證實(shí)可促進(jìn)細(xì)胞增殖和遷移[15]。實(shí)驗(yàn)[16]證明，由HepG2分泌的外泌體轉(zhuǎn)運(yùn)的VASN有效地促進(jìn)了人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)的遷移。CD90+肝癌細(xì)胞分泌的外泌體將lncH19轉(zhuǎn)移到 HUVEC，導(dǎo)致血管生成并促進(jìn)細(xì)胞間黏附，從而改變微環(huán)境促進(jìn)HCC的發(fā)展。

2.2 外泌體通過靶向內(nèi)皮細(xì)胞促進(jìn)肝癌血管生成 腫瘤細(xì)胞可以通過釋放外泌體中的內(nèi)容物來調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的行為，進(jìn)而增加血管通透性，促進(jìn)血管生成，導(dǎo)致腫瘤轉(zhuǎn)移和生長(zhǎng)。miRNA-103 在肝癌細(xì)胞的外泌體中明顯增加并可以被遞送到內(nèi)皮細(xì)胞，導(dǎo)致內(nèi)皮完整性破壞以及血管通透性增加，最終促進(jìn) HCC 轉(zhuǎn)移，其機(jī)制與抑制miRNA-103表達(dá)膜相關(guān)黏附分子，如VE-鈣粘蛋白 (VE-Cad)、p120-連環(huán)蛋白 (p120)和封閉小帶1 (ZO-1)有關(guān)[17]。HCC細(xì)胞來源的外泌體中miRNA-210、ephrin-B2、Delta-like 4 配體 (DLL4)、血管生成素-2 (ANGPT2)、circ-100338 和 VASN等6種物質(zhì)被上調(diào)，并且證實(shí)與活性內(nèi)皮依賴性血管生成有關(guān)。miRNA-210可以通過外泌體進(jìn)入內(nèi)皮細(xì)胞，然后miRNA-210直接靶向SMAD4和STAT6并下調(diào)它們的表達(dá)，從而促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的小管形成，最終導(dǎo)致腫瘤血管生成[18]。一項(xiàng)研究[19]發(fā)現(xiàn)ephrin-B2和DLL4的高表達(dá)水平是通過Notch信號(hào)通路的上調(diào)所實(shí)現(xiàn)的，可以使其通過外泌體進(jìn)入內(nèi)皮祖細(xì)胞并促進(jìn)腫瘤血管生成。在HCC細(xì)胞分泌的外泌體表面檢測(cè)到高水平的ANGPT2可以將其輸送到內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的血管生成。此外，肝癌細(xì)胞分泌的外泌體中檢測(cè)到高水平的circ-100338，它可以被輸送到內(nèi)皮細(xì)胞，circ-100338不僅促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖和血管生成，還增加了血管通透性[20]。在肝癌細(xì)胞的外泌體檢測(cè)出高水平VASN，它可以通過硫酸肝素蛋白聚糖 (HSPG)介導(dǎo)的內(nèi)吞作用傳遞到內(nèi)皮細(xì)胞中，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞遷移，導(dǎo)致血管生成而進(jìn)一步促進(jìn)肝癌的發(fā)生與發(fā)展[21]。

與上述上調(diào)的物質(zhì)相反，部分外泌體中也有一些被下調(diào)的物質(zhì)。研究[22]發(fā)現(xiàn)C型凝集素域家族3成員B (CLEC3B)在肝癌細(xì)胞分泌的外泌體中被檢測(cè)到具有低水平并且可以被遞送到內(nèi)皮細(xì)胞，這可能導(dǎo)致AMP活化蛋白激酶(AMPK)下調(diào)信號(hào)通路，與內(nèi)皮細(xì)胞中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 (vascular endothelial growth factor,VEGF)水平的增加有關(guān)，高水平的VEGF增強(qiáng)血管生成，最終促進(jìn)腫瘤進(jìn)展。另一項(xiàng)研究[23]表明，肝癌細(xì)胞分泌的外泌體中miRNA-200b-3p低表達(dá)，同樣可以被遞送到內(nèi)皮細(xì)胞中，低水平的miRNA-200b-3p通過上調(diào)轉(zhuǎn)變?yōu)樵鰪?qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞的血管生成能力相關(guān)的基因。

2.3 外泌體調(diào)節(jié)EMT促進(jìn)肝癌的轉(zhuǎn)移 EMT是癌癥遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的第一步。EMT定義為細(xì)胞失去上皮標(biāo)志物(如 E-鈣粘蛋白)并獲得間充質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物(如 N-鈣粘蛋白)的過程[24]。腫瘤細(xì)胞通過EMT過程獲得移動(dòng)性和侵襲性，從而發(fā)生轉(zhuǎn)移。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell,MSC)衍生的外泌體在許多不同癌癥類型的相鄰上皮細(xì)胞中誘導(dǎo)EMT[25]。癌相關(guān)成纖維細(xì)胞(carcinoma-related fibroblasts,CAF)衍生的外泌體中miRNA-320a的缺失促進(jìn)了EMT和HCC轉(zhuǎn)移。HCC衍生的外泌體將miRNA-92-3p轉(zhuǎn)運(yùn)至受體細(xì)胞，從而通過PTEN/Akt 通路的調(diào)節(jié)促進(jìn)EMT和低轉(zhuǎn)移性HCC細(xì)胞向高轉(zhuǎn)移性HCC細(xì)胞的轉(zhuǎn)化[26]。含堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的外泌體通過激活A(yù)KT/GSK-3β/Snail/Twist1 信號(hào)通路誘導(dǎo)EMT和肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。研究[27]證實(shí)，CTHRC1 mRNA與腫瘤大小和分期、微血管侵犯和肝內(nèi)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。CTHRC1的外泌體通過PI3K/Akt/ERK/CREB/Snail/TGFβ/MMP2信號(hào)傳導(dǎo)抑制膠原蛋白Ⅰ并刺激HCC細(xì)胞和EMT的遷移。在HCC組織中，lncRNA-CCAL過表達(dá)與較大的腫瘤、晚期 pTNM 分期和低凋亡率相關(guān)，它通過Wnt/β-catenin通路激活誘導(dǎo)EMT，從而促進(jìn)肝癌細(xì)胞遷移[28]。在肺轉(zhuǎn)移生態(tài)位中，由高轉(zhuǎn)移性HCC細(xì)胞釋放的外泌體miRNA-1247-3p下調(diào)成纖維細(xì)胞中的β-1,4-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶Ⅲ的表達(dá)，激活β1-整合素-NF-κB 信號(hào)并進(jìn)一步促進(jìn)肝癌的肺轉(zhuǎn)移[29]。

3 外泌體在HCC中潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值

3.1 外泌體在HCC診斷和預(yù)后判斷中的應(yīng)用 由于外泌體中的RNA不受血液中降解酶的影響，而裸露的RNA會(huì)迅速降解，血清和血漿miRNA已被研究作為癌癥診斷和治療中有價(jià)值的生物標(biāo)志物[30]。例如人食管鱗狀細(xì)胞癌血清外泌體miRNA-21顯著高于良性疾病，血清外泌體miRNA水平高于非外泌體miRNA。其次，外泌體反映了它們的起源組織，因?yàn)樗鼈兛梢允褂冕槍?duì)膜表面組織特異性蛋白的抗體進(jìn)行免疫分離[31]。事實(shí)上，血清外泌體miRNA與腫瘤衍生的miRNA相關(guān)。有文獻(xiàn)[32]指出，與慢性乙型肝炎或肝臟相關(guān)慢性疾病相比，HCC患者血清中外泌體miRNA-18a、miRNA-221、miRNA-222和miRNA-224的水平顯著較高，而miRNA-101的水平較低。HCC患者的血清外泌體miRNA-1247-3p較正常人的升高，較高水平的血清外泌體miRNA-1247-3p提示HCC的肺轉(zhuǎn)移預(yù)后較差。miRNA-1247-3p有望成為診斷HCC有價(jià)值的生物標(biāo)志物，尤其是預(yù)測(cè)HCC肺轉(zhuǎn)移方面[33]。活體肝移植后，與未復(fù)發(fā)的HCC患者相比，復(fù)發(fā)的HCC患者其miRNA-718顯著降低。然而，僅有miRNA-718與臨床病理因素相關(guān)。低表達(dá)miRNA-718顯示出組織學(xué)分化較差、腫瘤發(fā)生率較高和腫瘤更大的相關(guān)特點(diǎn)[34]。不僅如此，外泌體miRNA-106b、miRNA-122和miRNA-195的水平在HCC血清中低于肝硬化。數(shù)據(jù)[35-36]表明，miRNA-10b和miRNA-21在HCC進(jìn)展過程中增加，而miRNA-122、miRNA-218和miRNA-200a在外泌體中減少。ROC曲線分析顯示，AFP、miRNA-10b、miRNA-21、miRNA-122和miRNA-200a組合診斷HCC,其ROC曲線下面積達(dá)0.993，可以被認(rèn)為是一種優(yōu)越的早期診斷HCC的方法。上述結(jié)果表明，外泌體miRNA可能成為診斷和預(yù)測(cè)HCC復(fù)發(fā)及治療效果的新型生物標(biāo)志物。

此外，外泌體miRNA-665過表達(dá)時(shí)HCC患者表現(xiàn)出更短的生存時(shí)間，這表明外泌體miRNA-665可作為HCC患者潛在的預(yù)后生物標(biāo)志物[37]。血清外泌體miRNA-638在HCC患者中下調(diào)，其與生存期呈正相關(guān)，miRNA-638水平偏低，可預(yù)測(cè)HCC患者的總生存期較短[38]。血清中外泌體miRNA-125b水平與腫瘤增殖、分化和TNM分期顯著相關(guān)，外泌體衍生的miRNA-125b水平顯著高于HCC患者血清中的水平，而且miRNA-125b水平較低的HCC患者其總生存期和復(fù)發(fā)率較短[39]。外泌體miRNA-125b可以作為HCC患者的預(yù)后標(biāo)志物。

外泌體CASC9和LUCAT1在HCC衍生細(xì)胞系的一個(gè)子集中上調(diào)，兩者都與HCC患者術(shù)后的腫瘤大小和復(fù)發(fā)有關(guān)[40]。

3.2 外泌體在HCC治療中的應(yīng)用 早期 HCC 最常用的治療方法主要是手術(shù)切除、肝移植和介入放射學(xué)。然而，大多數(shù)HCC患者被診斷時(shí)已是晚期，預(yù)后差。經(jīng)肝動(dòng)脈化療栓塞術(shù)是多結(jié)節(jié)中期 HCC患者的一線治療方法，但由于缺氧和代償性血運(yùn)重建，其效果欠佳。索拉非尼是晚期 HCC唯一的全身用藥，但容易產(chǎn)生耐藥性[41]。

來自HCC細(xì)胞的外泌體通過激活HGF/c-Met/Akt通路在體外增強(qiáng)了肝癌細(xì)胞對(duì)索拉非尼的抵抗力，并逆轉(zhuǎn)了索拉非尼誘導(dǎo)的HCC細(xì)胞凋亡。此外，與侵襲性較低的HCC細(xì)胞來源的外泌體相比，高侵襲性HCC細(xì)胞來源的外泌體在逆轉(zhuǎn)索拉非尼誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡方面具有更大的作用[42]。脂肪組織來源的AMSC 將miRNA-122包裝成分泌的外泌體，然后外泌體在體外將miRNA-122遞送到HCC細(xì)胞中，介導(dǎo)AMSC和HCC細(xì)胞之間的通訊。而且，miRNA-122修飾的AMSC衍生的外泌體通過增加細(xì)胞周期停滯和凋亡來增強(qiáng)HCC細(xì)胞的化學(xué)敏感性，從而促進(jìn)索拉非尼對(duì)HCC細(xì)胞的敏感性[43]。miRNA-335-5p可以通過成纖維細(xì)胞釋放的外泌體被HCC細(xì)胞攝取。作為HCC的腫瘤抑制因子，miRNA-335-5p抑制HCC細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、侵襲和凋亡[44]。miRNA-320a被轉(zhuǎn)移到HCC細(xì)胞，然后通過抑制PBX3表達(dá)和MAPK通路激活來抑制HCC細(xì)胞增殖、遷移和轉(zhuǎn)移。外泌體miRNA-9-3p在HCC中減少，并通過靶向成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子5 (fibroblast growth factor 5,HBGF-5)影響細(xì)胞增殖，HBGF-5也可能是HCC的潛在治療靶點(diǎn)[45]。

越來越多的研究表明，外泌體衍生的相互作用可以調(diào)節(jié)耐受性和免疫抑制性微環(huán)境，外泌體能夠在體內(nèi)誘導(dǎo)特定的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)，并以T淋巴細(xì)胞依賴性方式抑制腫瘤的生長(zhǎng)[46]。研究[47]表明，腫瘤細(xì)胞衍生的外泌體 (tumor exosomes,TEX)可以有效地將HCC抗原攜帶到樹突細(xì)胞，導(dǎo)致比癌細(xì)胞裂解物更強(qiáng)的免疫反應(yīng)。TEX脈沖樹突細(xì)胞 (DC TEX)與細(xì)胞裂解物脈沖的樹突細(xì)胞相比，顯著抑制了異位和原位HCC小鼠的腫瘤生長(zhǎng)。此外，在原位HCC小鼠中，DC TEX治療通過增加IFNγ和T淋巴細(xì)胞，降低腫瘤部位的TGFβ和IL-10來改善免疫和腫瘤微環(huán)境。5-Aza-2′-脫氧胞苷 (5-Aza-CdR)是一種DNA去甲基化啟動(dòng)子，可提高 HLA-Ⅰ和 HLA-Ⅱ等免疫分子的表達(dá)。用5-Aza-CdR處理后的HepG2和Hep3B細(xì)胞的外泌體分泌增加[48]?？鼓[瘤細(xì)胞免疫所需的HSP70、HLA-Ⅰ和NY-ESO-1蛋白在這些外泌體中均升高，這可能是通過刺激抗腫瘤特異性免疫應(yīng)答導(dǎo)致的。這些蛋白質(zhì)可能為HCC免疫療法提供新的治療選擇[49]。癌癥免疫治療的目的是促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)CTL的活性，協(xié)助淋巴器官中腫瘤特異性CTL的啟動(dòng)，建立有效持久的抗癌免疫。在免疫治療中，通過保證CD4+T淋巴細(xì)胞向CD8+T淋巴細(xì)胞的信號(hào)傳遞和調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞的代謝活動(dòng)，可以優(yōu)化CTL反應(yīng)，從而增強(qiáng)抗癌免疫[50]。

4 小結(jié)與展望

在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中，外泌體的mRNA、miRNA、lncRNA和蛋白質(zhì)等在細(xì)胞間轉(zhuǎn)移可改變腫瘤微環(huán)境、新生血管生成，使HCC發(fā)生增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。相反，外泌體同樣可調(diào)節(jié)各種生理和病理過程，也可用作癌癥治療的藥物載體，對(duì)于HCC的診斷、預(yù)后標(biāo)志物及治療起到重要的作用。外泌體膜的修飾可以增加外泌體對(duì)特定病變的趨化性。因此，外泌體可以直接有效地將抗腫瘤藥物遞送至HCC 組織并阻止HCC的進(jìn)展[51]。但是，外泌體在HCC診斷和治療中的臨床應(yīng)用還需要進(jìn)一步研究，因?yàn)楫?dāng)前外泌體提煉技術(shù)尚未成熟，仍迫切需要改進(jìn)有效的外泌體分離、純化和儲(chǔ)存技術(shù)以更好地應(yīng)用于臨床。在HCC中，大多數(shù)研究仍然集中于血液中的外泌體。在今后研究中，外泌體在HCC患者腹腔積液或膽汁中的檢測(cè)技術(shù)將是有潛力的可開發(fā)領(lǐng)域。

利益沖突聲明：所有作者均聲明不存在利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明：羅業(yè)浩負(fù)責(zé)課題設(shè)計(jì)，資料分析及撰寫論文；許棟涵、呂挺參與收集數(shù)據(jù)及修改論文；趙鐵建、汪磊負(fù)責(zé)擬定寫作思路，指導(dǎo)撰寫文章并最后定稿。