扭傷歸膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升

黃萍 馮有龍 周娟娟 時(shí)佩 史清水

中圖分類號(hào) R927.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2022）06-0718-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.06.12

摘 要 目的 為提高扭傷歸膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。方法 在現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，建立扭傷歸膠囊中白芷和知母的薄層色譜（TLC）鑒別方法，建立同時(shí)測(cè)定芒果苷、升麻素苷、柚皮苷、新橙皮苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷5種成分含量的高效液相色譜（HPLC）法并確定限度。結(jié)果 扭傷歸膠囊供試品TLC圖中，在與相應(yīng)（混合）對(duì)照品或白芷、知母對(duì)照藥材相同位置上，均顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性對(duì)照無(wú)干擾。芒果苷、升麻素苷、柚皮苷、新橙皮苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷檢測(cè)質(zhì)量濃度的線性范圍分別為7.98～127.63、6.74～107.84、53.06～848.96、39.31～628.90、13.54～216.62 μg/mL（r均為0.999 9）;精密度、穩(wěn)定性（24 h）、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD均不高于1.20%（n=6），平均加樣回收率分別為95.00%、105.16%、97.16%、101.00%、104.97%（RSD≤1.50%，n=6）。4批樣品中，上述5種成分的平均含量分別為0.842、0.696、6.951、5.755、1.106 mg/g，方中知母、防風(fēng)、枳殼分別以芒果苷含量、升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷總量、柚皮苷和新橙皮苷總量計(jì)不得少于0.42、0.90、6.36 mg/粒。結(jié)論 本研究建立了扭傷歸膠囊中白芷、知母的TLC鑒別方法及芒果苷等5種成分的含量測(cè)定方法，并確定了方中知母、防風(fēng)、枳殼的限度。

關(guān)鍵詞 扭傷歸膠囊;鑒別;含量測(cè)定;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升

Study on the improvement of quality standard for Niushanggui capsules

HUANG Ping1，F(xiàn)ENG Youlong2，ZHOU Juanjuan2，SHI Pei1，SHI Qingshui2（1. College of Pharmacy， Nanjing University of Chinese Medicine， Nanjing 210023， China; 2. Jiangsu Institute for Food and Drug Control， Nanjing 210019， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE To provide reference for the improvement of the quality standard for Niushanggui capsules. METHODS Based on the previous quality standard， thin-layer chromatography （TLC） identification methods were established for Angelicae dahurica and Anemarrhenae asphodeloides. High performance liquid chromatography （HPLC） method was established to determine the contents of 5 components simultaneously， such as mangiferin， prim-O-glucosylcimifugin， naringin， neohesperidin and 5-O-methylvisammioside. The limits were confirmed. RESULTS TLC chromatogram of Niushanggui capsules showed the same color spots in the same position as the corresponding （mixed） substance control or reference medicinal material of A. dahuricae and A. asphodeloides， while the negative samples had no interference. The linear range of mangiferin， prim-O-glucosylcimifugin， naringin， neohesperidin and 5-O-methylvisammioside were 7.98-127.63， 6.74-107.84， 53.06-848.96， 39.31-628.90， 13.54-216.62 μg/mL， respectively（all r=0.999 9）. RSDs of precision， stability （24 h） and repeatability tests were all no more than 1.20% （n=6）. The average recoveries were 95.00%， 105.16%， 97.16%， 101.00% and 104.97% （RSD≤1.50%， n=6）. In 4 batches of samples， the average contents of the above 5 components were 0.842， 0.696， 6.951， 5.755 and 1.106 mg/g respectively; the limits of A. asphodeloides， Saposhnikovia divaricata and Citrus aurantium were based on the contents of mangiferin， the total content of prim-O-glucosylcimmifugin and 5-O-methylvisammioside， naringin and neohesperidin， which would not be less than 0.42， 0.90 and 6.36 mg/grain， respectively. CONCLUSIONS TLC identification methods of A. dahurica and A. asphodeloides and the content determination methods of 5 components as mangiferin in Niushanggui capsules are established in this study， and the limits of A. asphodeloides， S. divaricata and C. aurantium are confirmed.

KEYWORDS? ?Niushanggui capsules; identification; content determination; improvement of quality standard

扭傷歸膠囊由當(dāng)歸、防風(fēng)、枳殼、浙貝母、知母、天南星（制）、瓜萎、白芷、紅花9味藥組成，具有理氣、活血化瘀、消腫止痛的作用，常用于胸肋、腰背、四肢等軟組織急性損傷。方中當(dāng)歸乃血中之氣藥，蓋氣調(diào)則血和，故有血滯能通、血虛能補(bǔ)、血枯能潤(rùn)、血亂能接之功;防風(fēng)、天南星（制）為祛風(fēng)散血、除疾之要藥;枳殼有破氣行疾，開(kāi)胃健脾之功;浙貝母、知母、瓜蔞能清肺、瀉火、化痰，有潤(rùn)肺止咳之效;白芷能散風(fēng)除濕、芳香通竅;紅花有破瘀之功，瘀行則血活。

扭傷歸膠囊現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為原國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局頒布的國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)YBZ08332006-2015，但僅包含了當(dāng)歸、防風(fēng)、枳殼、紅花4味藥的薄層色譜（thin-layer chromatography，TLC）鑒別和浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）含量測(cè)定，缺少其余藥味的定性和定量分析，難以全面評(píng)價(jià)該制劑的質(zhì)量[1]。方中防風(fēng)具有祛風(fēng)、解表、勝濕、止痙之功效，其所含色原酮類化合物（如升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷）是全方發(fā)揮解熱鎮(zhèn)痛和抗炎作用的主要活性成分[2-4];枳殼具有理氣寬中、行滯消脹等功效，柚皮苷和新橙皮苷是其代表性成分[5-6];芒果苷為知母的主要活性成分，具有清熱瀉火、滋陰潤(rùn)燥的功效[7-8];白芷的主要成分為歐前胡素和異歐前胡素，具有解表散寒，祛風(fēng)止痛、消腫排膿之功效，臨床上多用于抗炎、鎮(zhèn)痛[9]。鑒于此，本課題組按照國(guó)家藥典委員會(huì)國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)提高研究課題（No.YBZ08332006-2015）任務(wù)書(shū)有關(guān)要求，在現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，采用TLC法對(duì)扭傷歸膠囊中白芷、知母進(jìn)行定性鑒別，并運(yùn)用HPLC法測(cè)定其中芒果苷、升麻素苷、柚皮苷、新橙皮苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷5種成分的含量，使其質(zhì)量可控性更強(qiáng)、檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)更加全面和完善，為綜合評(píng)價(jià)該制劑質(zhì)量提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括1260 InfinityⅡ型HPLC儀及配備的二極管陣列檢測(cè)器（美國(guó)Agilent公司）、BS21S型電子天平（德國(guó)Sartorius公司）、XP6型電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）、KH-700TDB型高頻數(shù)控超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）、VISUALIZER型TLC數(shù)碼成像儀（瑞士Camag公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

扭傷歸膠囊（批號(hào)分別為181101、190901、190902、210481，規(guī)格均為每粒裝0.5 g）以及缺白芷陰性對(duì)照樣品、缺知母陰性對(duì)照樣品、缺防風(fēng)陰性對(duì)照樣品、缺枳殼陰性對(duì)照樣品均由無(wú)錫濟(jì)民可信山禾藥業(yè)股份有限公司提供;升麻素苷對(duì)照品（批號(hào)111522-201712，純度94.6%）、5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品（批號(hào)111523-201811，純度97.4%）、柚皮苷對(duì)照品（批號(hào)110722-201815，純度91.7%）、新橙皮苷對(duì)照品（批號(hào)111857-201703，純度99.4%）、芒果苷對(duì)照品（批號(hào)111607-201704，純度98.1%）、歐前胡素對(duì)照品（批號(hào)110826-201616，純度99.6%）、異歐前胡素對(duì)照品（批號(hào)110827-201812，純度99.6%）、白芷對(duì)照藥材（批號(hào)120945-201510，供鑒別使用）、知母對(duì)照藥材（批號(hào)121070-201806，供鑒別使用）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;硅膠G薄層板（規(guī)格100 mm×100 mm）購(gòu)自青島海洋化工有限公司;聚酰胺薄膜（規(guī)格10 cm×20 cm）購(gòu)自浙江省臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠;甲醇和磷酸均為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 TLC鑒別

2.1.1 白芷藥材的TLC鑒別 取扭傷歸膠囊內(nèi)容物適量，混勻，研細(xì)，取2 g，加乙醚10 mL，浸泡1 h并時(shí)時(shí)振搖，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為供試品溶液。取缺白芷陰性對(duì)照樣品，按上述方法操作，制成缺白芷陰性對(duì)照溶液。另取白芷對(duì)照藥材粉末（過(guò)三號(hào)篩）0.5 g，按上述方法操作，制成白芷對(duì)照藥材溶液。再分別取歐前胡素、異歐前胡素對(duì)照品適量，加乙酸乙酯溶解、稀釋，制成質(zhì)量濃度均為2 mg/mL的混合對(duì)照品溶液。按照2020年版《中國(guó)藥典》（四部）通則“0502薄層色譜法”相關(guān)要求[10]，吸取歐前胡素、異歐前胡素混合對(duì)照品溶液，缺白芷陰性對(duì)照溶液，白芷對(duì)照藥材溶液，供試品溶液各4 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（30～60 ℃）-乙醚（3 ∶ 2，V/V）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置于紫外光燈（365 nm）下檢視，結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖1可見(jiàn)，供試品色譜中，在與白芷對(duì)照藥材色譜和歐前胡素、異歐前胡素混合對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，均顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，且缺白芷陰性對(duì)照無(wú)干擾。

2.1.2 知母藥材的TLC鑒別 取扭傷歸膠囊內(nèi)容物適量，混勻，研細(xì)，取2 g，加稀乙醇10 mL，超聲（功率250 W，頻率40 kHz）處理20 min，過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。取缺知母陰性對(duì)照樣品，按上述方法操作，制成缺知母陰性對(duì)照溶液。另取知母對(duì)照藥材粉末（過(guò)三號(hào)篩）0.5 g，按上述方法操作，制成知母對(duì)照藥材溶液。再取芒果苷對(duì)照品適量，加稀乙醇溶解、稀釋，制成質(zhì)量濃度為0.5 mg/mL的對(duì)照品溶液。按照2020年版《中國(guó)藥典》（四部）通則“0502薄層色譜法”相關(guān)要求[10]，吸取芒果苷對(duì)照品溶液、缺知母陰性對(duì)照溶液、知母對(duì)照藥材溶液、供試品溶液各1 μL，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以乙醇-水（3 ∶ 1，V/V）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置于紫外光燈（365 nm）下檢視，結(jié)果見(jiàn)圖2。由圖2可見(jiàn)，供試品色譜中，在與知母對(duì)照藥材色譜和芒果苷對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，均顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，且知母陰性對(duì)照無(wú)干擾。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 混合對(duì)照品貯備溶液的制備 取芒果苷、升麻素苷、柚皮苷、新橙皮苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品各適量，加50%甲醇制成質(zhì)量濃度分別為127.63、107.84、848.96、628.90、216.62 μg/mL的混合對(duì)照品貯備溶液，備用。

2.2.2 供試品溶液的制備 取扭傷歸膠囊內(nèi)容物適量，研細(xì)，混勻，取約1.0 g，精密稱定，置于25 mL量瓶中，加50%甲醇20 mL，超聲（功率250 W，頻率40 kHz）處理30 min，放冷，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 分別取缺防風(fēng)、缺知母、缺枳殼陰性對(duì)照樣品各1.0 g，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法操作，制成相應(yīng)的陰性對(duì)照溶液。

2.2.4 色譜條件 以Agela Durashell C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）為色譜柱，以甲醇（A）-0.1%磷酸溶液（B）為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫（0～5 min，20%A;5～15 min，20%A→33%A;15～36 min，33%A→45%A;36～50 min，45%A→55%A;50～55 min，55%A→70%A;55～60 min，70%A→20%A）;流速為1.0 mL/min;柱溫為35 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm（芒果苷、升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷）、280 nm（柚皮苷、新橙皮苷）;進(jìn)樣量為10 μL。

2.2.5 專屬性考察 分別吸取“2.2.1”～“2.2.3”項(xiàng)下混合對(duì)照品貯備溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各10 μL，按“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，詳見(jiàn)圖3。由圖3可見(jiàn)，在該色譜條件下，供試品溶液的理論板數(shù)按芒果苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷峰計(jì)均不低于10 000，相鄰色譜峰間的分離度均大于1.5;同時(shí)，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相同保留時(shí)間處檢出色譜峰，方中其他成分對(duì)芒果苷、升麻素苷、柚皮苷、新橙皮苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷的測(cè)定均無(wú)干擾。

2.2.6 線性關(guān)系考察 取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品貯備溶液，用50%甲醇稀釋，制成芒果苷質(zhì)量濃度分別為7.98、15.95、31.91、63.81、127.63 μg/mL，升麻素苷質(zhì)量濃度分別為6.74、13.48、26.96、53.92、107.84 μg/mL，柚皮苷質(zhì)量濃度分別為53.06、106.12、212.24、424.45、848.96 μg/mL，新橙皮苷質(zhì)量濃度分別為39.31、78.61、157.23、314.45、628.90 μg/mL，5-O-甲基維斯阿米醇苷質(zhì)量濃度分別為13.54、27.08、54.15、108.31、216.62 μg/mL的系列混合對(duì)照品溶液，按“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以待測(cè)成分的峰面積（y）為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸分析，得回歸方程，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2.7 檢測(cè)限和定量限考察 取“2.2.6”項(xiàng)下最低質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液，用50%甲醇逐級(jí)稀釋，按照“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以信噪比10 ∶ 1測(cè)得定量限，以信噪比3 ∶ 1測(cè)得檢測(cè)限。結(jié)果顯示，芒果苷、升麻素苷、柚皮苷、新橙皮苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷的定量限分別為0.06、0.16、0.18、0.16、0.24 μg/mL，檢測(cè)限分別為0.02、0.05、0.05、0.05、0.07 μg/mL。

2.2.8 精密度試驗(yàn) 取“2.2.6”項(xiàng)下芒果苷、升麻素苷、柚皮苷、新橙皮苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷質(zhì)量濃度分別為31.91、26.96、212.24、157.23、54.15 μg/mL的混合對(duì)照品溶液，按照“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果顯示，芒果苷、升麻素苷、柚皮苷、新橙皮苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷峰面積的RSD分別為0.40%、0.42%、0.30%、0.31%、0.26%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液（批號(hào)181101），分別于室溫下放置0、2、4、8、12、24 h時(shí)按照“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果顯示，芒果苷、升麻素苷、柚皮苷、新橙皮苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷峰面積的RSD分別為0.24%、1.20%、0.20%、0.25%、1.15%（n=6），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.10 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取扭傷歸膠囊（批號(hào)181101）內(nèi)容物1.0 g，共6份，分別按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，再按照“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并代入回歸方程計(jì)算各成分的含量。結(jié)果顯示，芒果苷、升麻素苷、柚皮苷、新橙皮苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷的平均含量分別為0.974、0.673、6.504、4.577、1.181 mg/g，RSD分別為1.03%、0.27%、0.38%、0.39%、0.36%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

2.2.11 加樣回收率試驗(yàn) 稱取已知含量的扭傷歸膠囊（批號(hào)181101）內(nèi)容物約0.5 g，精密稱定，共6份，分別置于25 mL量瓶中，加入芒果苷、升麻素苷、柚皮苷、新橙皮苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷質(zhì)量濃度分別為0.516 6、0.311 7、3.175 5、2.324 7、0.546 9 mg/mL的混合對(duì)照品溶液（配制方法同“2.2.1”項(xiàng)）1 mL，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，再按照“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2.12 樣品含量測(cè)定 取4批扭傷歸膠囊樣品適量，分別按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，再按照“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并代入回歸方程計(jì)算各成分的含量，重復(fù)測(cè)定2次，計(jì)算平均值，結(jié)果見(jiàn)表3。

2.3 限度確定

由表3可見(jiàn)，4批扭傷歸膠囊中芒果苷、升麻素苷、柚皮苷、新橙皮苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷的平均含量分別為0.842、0.696、6.951、5.755、1.106 mg/g。根據(jù)芒果苷轉(zhuǎn)移率=成藥中芒果苷的含量/（知母中芒果苷的含量×知母的處方量）×100%計(jì)算，得芒果苷的轉(zhuǎn)移率最低為9.8%、最高為21.8%，平均值為18.8%。暫將芒果苷的限度設(shè)定為知母最低含量×處方量×平均轉(zhuǎn)移率，即0.42 mg/粒，綜合考慮，扭傷歸膠囊含知母以芒果苷（C19H18O11）計(jì)不得少于0.42 mg/粒。同上，扭傷歸膠囊含防風(fēng)以升麻素苷（C22H28O11）和5-O-甲基維斯阿米醇苷（C22H28O10）總量計(jì)不得少于0.90 mg/粒，含枳殼以柚皮苷（C27H32O14）和新橙皮苷（C28H34O15）總量計(jì)不得少于6.36 mg/粒。

3 討論

3.1 藥材的選擇

扭傷歸膠囊原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)YBZ08332006有3項(xiàng)理化鑒別，但方法專屬性較差，在現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)YBZ08332006- 2015中已被刪除，增加了紅花的TLC鑒別，對(duì)知母、天南星（制）、白芷未涉及。本研究在現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，增加了知母和白芷的TLC鑒別，同時(shí)采用HPLC法對(duì)防風(fēng)、枳殼、知母進(jìn)行了含量測(cè)定，以達(dá)到同時(shí)控制方中不同藥味的目的，為進(jìn)一步提高扭傷歸膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

3.2 TLC鑒別藥材和方法的選擇

扭傷歸膠囊由9味藥組成，成分復(fù)雜，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控不夠全面，缺少白芷、知母、天南星（制）等關(guān)鍵藥味的質(zhì)控項(xiàng)目，故十分有必要建立上述藥材的TLC鑒別方法以控制藥品的整體質(zhì)量。本研究參考2020年版《中國(guó)藥典》（一部）“白芷”“知母”鑒別項(xiàng)下的方法建立了扭傷歸膠囊中這兩味藥的TLC鑒別方法[11]。結(jié)果顯示，供試品色譜中，與對(duì)照藥材和（混合）對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上均顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性對(duì)照無(wú)干擾。在方法學(xué)研究中，筆者比較了不同廠家的薄層板以及在不同溫度、不同濕度下的展開(kāi)情況，結(jié)果表明，各色譜斑點(diǎn)及分離度均符合2020年版《中國(guó)藥典》（四部）通則“0502薄層色譜法”的相關(guān)要求[10]，且耐用性良好。此外，本課題組還對(duì)天南星（制）進(jìn)行了TLC鑒別研究，但陰性對(duì)照有干擾，經(jīng)過(guò)多次實(shí)驗(yàn)后仍未能找到適宜的展開(kāi)條件，故未將其TLC鑒別方法列入正文中。

3.3 HPLC流動(dòng)相的選擇

通過(guò)查閱相關(guān)文獻(xiàn)[12-15]，本課題組考察了甲醇-0.1%醋酸溶液、甲醇-0.1%磷酸溶液、乙腈-0.2%醋酸溶液3種流動(dòng)相系統(tǒng)的分離效果。結(jié)果顯示，以甲醇-0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相時(shí)，5種待測(cè)成分的出峰時(shí)間、峰形及峰純度最優(yōu)，故采用甲醇-0.1%磷酸溶液作為流動(dòng)相。

3.4 HPLC檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

本課題組前期采用二極管陣列檢測(cè)器進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，發(fā)現(xiàn)芒果苷、升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷在254 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，柚皮苷、新橙皮苷在280 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故選擇254、280 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.5 HPLC供試品溶液提取條件的選擇

本課題組前期分別考察了超聲、冷浸、加熱回流等不同提取方式的提取效果，結(jié)果表明，超聲處理的提取效果最好，故最終確定以超聲作為供試品溶液的提取方式。本課題組前期還考察了提取溶劑（50%甲醇、70%甲醇、甲醇、乙醇、正丁醇）、超聲時(shí)間（20、30、50 min）、取樣量（1.0、2.0、4.0 g）對(duì)提取效果的影響，結(jié)果顯示，取1 g樣品加50%甲醇超聲提取30 min的效果最好。

3.6 不足

本方中天南星（制）為有毒中藥，在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中有TLC鑒別和含量測(cè)定研究?jī)?nèi)容。但在TLC鑒別研究中，本課題組嘗試了多種供試品溶液制備方法：60%乙醇超聲處理、甲醇超聲處理、乙醇冷浸處理、乙醇加熱回流、石油醚索氏提取等;同時(shí)，本課題組也嘗試了多種展開(kāi)劑和顯色劑，均未得到理想結(jié)果[未找到天南星（制）的特征斑點(diǎn)]。此外，本課題組還嘗試采用HPLC法對(duì)天南星（制）進(jìn)行鑒別和含量測(cè)定研究，但均未能找到特征峰。鑒于此，此次標(biāo)準(zhǔn)提升未涉及天南星（制）相關(guān)檢驗(yàn)項(xiàng)目。

本課題組在前期實(shí)驗(yàn)中設(shè)計(jì)了當(dāng)歸指標(biāo)性成分阿魏酸的含量測(cè)定項(xiàng)，但實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，阿魏酸的含量較低，色譜峰響應(yīng)極弱且陰性對(duì)照有干擾，雖反復(fù)優(yōu)化供試品溶液的制備方法和色譜條件，仍未能消除陰性對(duì)照的干擾，考慮到現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)已收載當(dāng)歸的TLC鑒別項(xiàng)，故此次多成分含量測(cè)定未納入阿魏酸。

綜上所述，本研究在扭傷歸膠囊現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，增加了白芷、知母的TLC鑒別項(xiàng)，擴(kuò)展了含量測(cè)定項(xiàng)的指標(biāo)性成分，建立了可同時(shí)測(cè)定扭傷歸膠囊中芒果苷、升麻素苷、柚皮苷、新橙皮苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷含量的新方法。但由于本研究樣品批次偏少（只有4批），后期將進(jìn)一步積累數(shù)據(jù)，在此基礎(chǔ)上制訂上述各成分的合理含量限度。

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（收稿日期：2021-12-06 修回日期：2022-02-10）

（編輯：鄒麗娟）